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棉花(Gossypium hirsutum)ROP1基因酵母双杂交体系的诱饵载体构建及鉴定

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分子植物育种 2020年第1期18卷 139-143页

作者：吾尕力汗·阿不都维力杨迷代培红宁忠雄李月新疆农业大学农学院

ROP是高等植物里一类分布广泛的信号小G蛋白,在植物生长、发育、抗逆、抗病和激素信号转导过程中起重要调控作用。本研究用PCR体外扩增技术获得棉花GhROP1基因片段,将目的基因与诱饵质粒载体pGBKT7通过双酶切定向重组,构建诱饵质粒pGBKT... 详细信息

ROP是高等植物里一类分布广泛的信号小G蛋白,在植物生长、发育、抗逆、抗病和激素信号转导过程中起重要调控作用。本研究用PCR体外扩增技术获得棉花GhROP1基因片段,将目的基因与诱饵质粒载体pGBKT7通过双酶切定向重组,构建诱饵质粒pGBKT7-GhROP1,并成功的转入到Y187酵母菌通过缺陷性培养基培养进行毒性和自激活检测。结果表明,成功克隆棉花GhROP1基因,该基因开放阅读框共有591 bp。双杂交诱饵表达载体pGBKT7-GhROP1构建成功,并成功转化酵母菌Y187;结果显示含表达载体的酵母菌Y187在SD/-Trp平板上长势良好,说明表达蛋白对酵母菌无毒害作用。在SD/-Leu,SD/-Trp-Leu,SD/-Trp-Leu-His-Ade平板上则没有生长,说明转化pGBKT7-GhROP1质粒后的Y187酵母菌无自激活发生。本研究结果为下一步利用酵母杂交系统筛选GhROP1蛋白相互作用的蛋白提供理论参考。

关键词： GhROP1基因酵母双杂交诱饵表达载体自激活检测

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E2F-1截短体的诱饵载体的构建及检测

广东医学 2011年第20期32卷 2635-2637页

作者：孔凡彪王晓通谢玉波肖强广西医科大学第一附属医院胃肠腺体外科南宁530021 广西医科大学第一附属医院麻醉科南宁530021

目的构建E2F-1截短体的诱饵载体,并进行自激活活性和诱饵蛋白毒性检测,为应用酵母双杂交系统筛选与E2F-1相互作用蛋白建立实验基础。方法设计引物,PCR扩增E2F-1截短体,引入酶切位点EcoRⅠ和BamHⅠ,将E2F-1截短体连接至载体pGBKT7中,将... 详细信息

目的构建E2F-1截短体的诱饵载体,并进行自激活活性和诱饵蛋白毒性检测,为应用酵母双杂交系统筛选与E2F-1相互作用蛋白建立实验基础。方法设计引物,PCR扩增E2F-1截短体,引入酶切位点EcoRⅠ和BamHⅠ,将E2F-1截短体连接至载体pGBKT7中,将构建成功的诱饵表达载体pGBKT7-E2F-1截短体转化到酵母菌AH 109中,采用选择性培养皿和β-半乳糖苷酶分析等方法分析检测重组质粒的自激活活性和细胞毒性。结果成功扩增了E2F-1截短体,并连接至载体pGBKT7中,测序比对结果正确,成功转化到酵母菌AH 109中,经检测无自激活活性和细胞毒性。结论成功构建了E2F-1截短体的诱饵载体,经检测无自激活活性和细胞毒性,可应用于酵母双杂交系统筛选与E2F-1相互作用的蛋白。

关键词： E2F-1截短体诱饵表达载体酵母双杂交自激活

拟南芥AtCYS6基因酵母双杂交诱饵载体的构建及鉴定

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分子植物育种 2020年第10期18卷 3246-3250页

作者：郭坤元张欣欣林先明湖北省农业科学院中药材研究所国家中药材产业技术体系恩施综合试验站恩施445000 东北林业大学盐碱地生物资源环境研究中心东北盐碱植被恢复与重建教育部重点实验室哈尔滨150040

为了筛选与拟南芥半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因AtCYS6相互作用的蛋白,构建其酵母双杂交诱饵表达载体。本研究利用PCR方法扩增得到拟南芥AtCYS6的基因片段,与诱饵载体pGBKT7连接构建诱饵表达载体,经双酶切以及测序检测验证重组载体构建成功... 详细信息

为了筛选与拟南芥半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因AtCYS6相互作用的蛋白,构建其酵母双杂交诱饵表达载体。本研究利用PCR方法扩增得到拟南芥AtCYS6的基因片段,与诱饵载体pGBKT7连接构建诱饵表达载体,经双酶切以及测序检测验证重组载体构建成功后,通过醋酸锂法将诱饵表达载体pGBKT7-AtCYS6与空载体pGBKT7分别转化到Y2HGold酵母菌株,检测其是否有自激活能力以及对宿主酵母菌株是否有毒性作用。结果表明:经PCR扩增后得到了AtCYS6基因,成功构建了无自激活和没有毒性的诱饵表达载体pGBKT7-AtCYS6。本研究结果可进一步为筛选与AtCYS6相互作用的蛋白质及功能研究提供科学依据。

关键词：拟南芥(Arabidopsis thaliana) 半胱氨酸蛋白酶抑制剂酵母双杂交诱饵表达载体

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蒺藜苜蓿MtUFO基因克隆及自激活检测

中国草地学报 2020年第5期42卷 8-13页

作者：马翠娜刘晋囡晁跃辉北京林业大学草业与草原学院北京100083

以蒺藜苜蓿品种R108为材料,采用RT-PCR技术成功克隆了蒺藜苜蓿MtUFO基因,其开放阅读框共1128bp。生物信息学分析显示,MtUFO基因编码375个氨基酸,蒺藜苜蓿UFO蛋白与鹰嘴豆的亲缘关系最为接近。双杂交诱饵表达载体pGBKT7-MtUFO构建成功,... 详细信息

以蒺藜苜蓿品种R108为材料,采用RT-PCR技术成功克隆了蒺藜苜蓿MtUFO基因,其开放阅读框共1128bp。生物信息学分析显示,MtUFO基因编码375个氨基酸,蒺藜苜蓿UFO蛋白与鹰嘴豆的亲缘关系最为接近。双杂交诱饵表达载体pGBKT7-MtUFO构建成功,并在酵母细胞中正常表达,表达产物对报告基因无自激活作用。

关键词：蒺藜苜蓿 MtUFO基因诱饵表达载体自激活检测酵母双杂交

大叶落地生根(Kalanchoe daigremontiana)KdSOC1基因的克隆及自激活检测

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分子植物育种 2019年第13期17卷 4267-4273页

作者：王梦迪许立新董笛赵方东晁跃辉曾会明北京林业大学草坪研究所

大叶落地生根(Kalanchoe daigremontiana)为景天科多年生肉质草本植物,是研究无性繁殖的模式植物。SOC1 (Suppressor of overexpression of constans 1)基因是植物成花过程中MADS-box基因家族中的关键转录因子。为深入研究大叶落地生根K... 详细信息

大叶落地生根(Kalanchoe daigremontiana)为景天科多年生肉质草本植物,是研究无性繁殖的模式植物。SOC1 (Suppressor of overexpression of constans 1)基因是植物成花过程中MADS-box基因家族中的关键转录因子。为深入研究大叶落地生根KdSOC1基因的功能,于大叶落地生根中克隆KdSOC1基因,进行生物信息学分析,构建酵母双杂交诱饵表达载体pGBKT7-KdSOC1,并采用LiAc法将重组质粒pGBKT7-KdSOC1转化至Y2HGold酵母菌株中,通过营养缺陷型培养基培养进行自激活检测。结果表明,成功克隆了KdSOC1基因,该基因开放阅读框共有684 bp。生物信息学分析结果显示,Kd SOC1蛋白共有227个氨基酸残基,分子量为25.88 kD,大叶落地生根SOC1蛋白与牡丹的亲缘关系最为接近。双杂交诱饵表达载体pGBKT7-KdSOC1构建成功,并在酵母细胞中正常表达,表达产物对报告基因无自激活作用。本研究为筛选大叶落地生根中与其互作的蛋白及后续实验提供了帮助。

关键词：大叶落地生根 KdSOC1基因酵母双杂交诱饵表达载体自激活检测