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北细辛丁香酚合成酶基因克隆及其表达分析

西北植物学报 2021年第3期41卷 368-376页

作者：梁岩岩王亚男张银萍王鹰李强吴秀菊东北农业大学生命科学学院哈尔滨150030

丁香酚合成酶(eugenol synthase,EGS)是北细辛(Asarum heterotropoides)主要活性成分甲基丁香酚体内合成途径中的关键酶之一。该研究根据北细辛转录组数据库中筛选到的序列设计特异引物,以RT-PCR法扩增获得北细辛丁香酚合成酶基因(AhEGS... 详细信息

丁香酚合成酶(eugenol synthase,EGS)是北细辛(Asarum heterotropoides)主要活性成分甲基丁香酚体内合成途径中的关键酶之一。该研究根据北细辛转录组数据库中筛选到的序列设计特异引物,以RT-PCR法扩增获得北细辛丁香酚合成酶基因(AhEGS)的开放阅读框(ORF)序列,进行了相应的生物信息学分析。同时运用实时定量PCR法分析AhEGS在不同发育时期(幼叶期、花期、果期)和不同组织部位(叶、根茎、根)中的表达谱,并进行原核表达分析。结果显示:(1)AhEGS基因ORF序列长为951 bp,编码316个氨基酸,理论分子量为34.93 kD,等电点为6.19,AhEGS蛋白为亲水性蛋白,无跨膜结构,无信号肽序列;同源序列比对发现,北细辛AhEGS与月季RcEGS(AFQ98278.1)同源性最高。(2)实时定量PCR分析表明,AhEGS基因在北细辛幼叶期的根中表达量最高。(3)成功构建了原核表达载体pET28a-AhEGS-BL21,经pET28a-AhEGS重组子转化*** BL21(DE3),SDS-PAGE检测显示在大肠杆菌(Escherichia coli,***)中诱导产生了35 kD左右的特异性蛋白,与理论分子量一致;最佳诱导条件为16℃、14 h,IPTG浓度为0.2 mmol/L。该研究首次克隆了北细辛的EGS基因,构建了原核表达载体,筛选出该蛋白最佳诱导条件,研究结果为北细辛甲基丁香酚代谢工程的应用奠定基础。

关键词：北细辛丁香酚合成酶基因序列分析原核表达诱导条件

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差减抑制杂交技术在植物研究中的应用

植物学通报 2005年第B8期22卷 91-98页

作者：姜淑梅吕晓梅胡赞民中国科学院遗传与发育生物学研究所北京100101

差减抑制杂交技术在医学研究中应用较多,而在植物研究中的应用较少,近几年有所增加。本文介绍了目前差减抑制杂交技术在植物发育、逆境胁迫或人为诱导条件下差异基因表达以及不同组织中差异基因表达和突变等研究方面的应用。随着研究的... 详细信息

差减抑制杂交技术在医学研究中应用较多,而在植物研究中的应用较少,近几年有所增加。本文介绍了目前差减抑制杂交技术在植物发育、逆境胁迫或人为诱导条件下差异基因表达以及不同组织中差异基因表达和突变等研究方面的应用。随着研究的不断深入,差减抑制杂交技术将在植物新基因的发现和克隆中发挥更大作用。

关键词：差减抑制杂交差异表达基因克隆杂交技术植物研究基因表达医学研究植物发育诱导条件

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棉花离体培养纤维的研究进展

植物学通报 2005年第4期22卷 471-477页

作者：亓毅飞詹少华林毅蔡永萍安徽农业大学生命科学学院合肥230036

从试管棉纤维的诱导条件、影响试管棉纤维分化和伸长的因子以及其发育机制等方面进行了综述。试管棉纤维主要是通过胚珠及愈伤组织诱导形成,其影响因子主要是植物生长调节物质及外界环境。同时总结了目前棉花离体培养纤维中存在问题,并... 详细信息

从试管棉纤维的诱导条件、影响试管棉纤维分化和伸长的因子以及其发育机制等方面进行了综述。试管棉纤维主要是通过胚珠及愈伤组织诱导形成,其影响因子主要是植物生长调节物质及外界环境。同时总结了目前棉花离体培养纤维中存在问题,并展望了棉花离体培养的前景和应用价值。

关键词：棉花试管纤维棉纤维发育发育机制试管棉纤维离体培养棉花研究进展植物生长调节物质影响因子诱导条件

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人脐带间充质干细胞的特征及其临床应用前景

中国免疫学杂志 2010年第1期26卷 82-84页

作者：徐若男施明王福生解放军第三○二医院生物治疗研究中心北京100039

1966年间充质干细胞首先由Friedenstein[1]从骨髓中发现,传统理论认为这群细胞在特定诱导条件下可向中胚层细胞即骨、软骨和脂肪细胞分化.

关键词：间充质干细胞临床应用前景人脐带脂肪细胞分化骨髓基质心肌细胞诱导条件分化发育

大鼠骨髓基质干细胞的培养鉴定及向成骨细胞诱导分化的实验研究

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中华物理医学与康复杂志 2005年第3期27卷 138-140页

作者：程雷聂林谢青汤继文山东大学齐鲁医院骨创伤科济南250012 山东大学齐鲁医院药学部济南250012

目的研究体外培养大鼠骨髓基质干细胞的方法及其生长特点和成骨能力. 方法通过贴壁培养法和密度梯度离心法分离成年大鼠骨髓基质干细胞,应用含维生素C、地塞米松、β-甘油磷酸钠的诱导分化培养液定向诱导传代细胞向成骨细胞分化,检测碱... 详细信息

目的研究体外培养大鼠骨髓基质干细胞的方法及其生长特点和成骨能力. 方法通过贴壁培养法和密度梯度离心法分离成年大鼠骨髓基质干细胞,应用含维生素C、地塞米松、β-甘油磷酸钠的诱导分化培养液定向诱导传代细胞向成骨细胞分化,检测碱性磷酸酶活性和细胞矿化作用. 结果原代培养基质干细胞首先形成细胞集落,14 d时集落间接近融合;传代细胞体积变大,约5～7 d传代一次.诱导条件下, 细胞碱性磷酸酶活性明显增高, 并出现了矿化结节. 结论骨髓基质干细胞易于体外分离培养及扩增, 成骨能力较强, 可作为骨组织工程的种子细胞.

关键词：骨髓基质干细胞大鼠诱导分化集落培养鉴定成骨能力成骨细胞传代细胞诱导条件体外分离

酵母来源α-1,2甘露糖转移酶Alg11的异源表达、纯化和活性分析

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中国生物工程杂志 2018年第6期38卷 26-33页

作者：李庆猛李盛陶王宁高晓冬江南大学生物工程学院糖化学与生物技术教育部重点实验室

糖基转移酶Alg11作为N-糖基化途径中一个重要蛋白,功能为催化将甘露糖转移到底物DPGn2M3（Dolichyl-pyrophosphate-Glc NAc2Mannose3）上进而生成DPGn2M4和DPGn2M5这两种多萜醇寡糖前体的反应。在本研究中,首先通过对酿酒酵母Alg11的蛋... 详细信息

糖基转移酶Alg11作为N-糖基化途径中一个重要蛋白,功能为催化将甘露糖转移到底物DPGn2M3（Dolichyl-pyrophosphate-Glc NAc2Mannose3）上进而生成DPGn2M4和DPGn2M5这两种多萜醇寡糖前体的反应。在本研究中,首先通过对酿酒酵母Alg11的蛋白质结构进行分析,设计了去除跨膜域的蛋白Alg11（45-548）并成功在大肠杆菌中表达,进而对诱导时间、诱导剂浓度进行了产量最大化的优化,最终得到了纯化蛋白。以PPGn2（Phytanyl-pyrophosphate-Glc NAc2）为底物,利用体外表达的重组蛋白Alg1ΔTM和Trx-Alg2以酶法合成出Alg11的天然底物类似物PPGn2M3。用纯化的Alg11（45-548）蛋白催化转糖基反应,并通过液质联用（LC-MS）的方法检测产物,证实Alg11（45-548）蛋白具有催化PPGn2M3生成PPGn2M4和PPGn2M5的糖基转移酶活性。产物PPGn2M5通过不同的甘露糖苷酶酶切反应,验证了两个新加上的甘露糖以α-1,2糖苷键的形式连接到底物PPGn2M3上。底物特异性实验表明Alg11（45-548）可以特异性识别底物PPGn2M3,而其他N-糖基化中间体类似物如PPGn2和PPGn2M1无法被识别,且底物中的脂肪链结构也对酶的识别具有重要作用。Alg11的底物特异性保证了多萜醇寡糖前体的有序合成,具有重要的生理意义。

关键词： N-糖基化糖基转移酶Alg11 液质联用(LC-MS) 诱导条件

南极衣藻(Chlamydomonas ***-L)谷胱甘肽还原酶基因的原核表达及其条件优化

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海洋与湖沼 2011年第6期42卷 817-821页

作者：刘莹丁燏简纪常吴灶和缪锦来广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室湛江524025 国家海洋局第一海洋研究所海洋生物活性物质重点实验室青岛266061

采用RT-PCR技术克隆南极衣藻GR基因ORF全长cDNA,然后经酶切、连接等步骤构建其原核表达载体;并对其表达的诱导时间、IPTG浓度、温度进行了优化,以期获得较大量的酶蛋白。结果表明,将构建的原核表达载体pET-GR导入大肠杆菌BL21,可以高效... 详细信息

采用RT-PCR技术克隆南极衣藻GR基因ORF全长cDNA,然后经酶切、连接等步骤构建其原核表达载体;并对其表达的诱导时间、IPTG浓度、温度进行了优化,以期获得较大量的酶蛋白。结果表明,将构建的原核表达载体pET-GR导入大肠杆菌BL21,可以高效表达融合蛋白;且表达的蛋白均以包涵体的形式存在;经SDS-PAGE电泳结果显示,获得的目的蛋白分子量为52.2kDa,符合预期分子量;GR蛋白在大肠杆菌中诱导表达优化条件为,1.0mmol/L的IPTG,28℃诱导3h。这些结果为进一步深入研究该基因的特性与功能奠定了基础。

关键词：南极衣藻Chlamydomonas sp.ICE-L 谷胱甘肽还原酶原核表达诱导条件冰藻

重组降血压肽发酵培养基及发酵条件的优化实验研究

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食品工业科技 2012年第3期33卷 156-159,336页

作者：李云亮马海乐何华纲黄六容江苏大学食品与生物工程学院江苏镇江212013 河南科技大学食品与生物工程学院河南洛阳471039 江苏省农产品生物加工与分离工程技术研究中心江苏镇江212013

以纯化的融合蛋白包涵体表达量为考核指标,对重组降血压肽发酵培养基的组成和发酵条件进行了优化实验研究。以富含疏水性氨基酸的麦胚水解物为基础培养基,通过正交实验,优化得到大肠杆菌BL21-MF3A3制备重组降血压肽的麦胚培养基配方为:... 详细信息

以纯化的融合蛋白包涵体表达量为考核指标,对重组降血压肽发酵培养基的组成和发酵条件进行了优化实验研究。以富含疏水性氨基酸的麦胚水解物为基础培养基,通过正交实验,优化得到大肠杆菌BL21-MF3A3制备重组降血压肽的麦胚培养基配方为:酵母粉0.5%、麦胚酶解物C2.0%、葡萄糖0.5%和NaCl0.5%。对发酵过程中的诱导条件进行正交优化实验,得到最佳的诱导条件为诱导温度32℃、诱导起始OD6001.4和诱导时间10h,在此条件下包涵体表达量可达到535mg·L-1。

关键词：重组降血压肽培养基发酵诱导条件

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牙髓干细胞生物学特性影响因素的研究进展

口腔疾病防治 2019年第4期27卷 268-272页

作者：胡慧婷于凤麟赵月萍暨南大学口腔医学院广东广州510632 暨南大学生命科学技术学院广东广州510632

牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSCs)是一种来源于牙髓组织的具有自我更新、高度增殖能力及多向分化潜能的间充质干细胞。在适当的诱导条件下,可以分化为成骨细胞、成牙本质细胞、软骨细胞、脂肪细胞、神经元性细胞等多种细胞,目... 详细信息

牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSCs)是一种来源于牙髓组织的具有自我更新、高度增殖能力及多向分化潜能的间充质干细胞。在适当的诱导条件下,可以分化为成骨细胞、成牙本质细胞、软骨细胞、脂肪细胞、神经元性细胞等多种细胞,目前已逐渐应用于临床试验及临床前期研究,是口腔组织工程与再生医学领域重要的种子细胞之一。本文结合近年来国内外文献对影响DPSCs生物学特性的因素作一综述。文献综述结果表明,组织来源、培养方法、不同环境及诱导条件等多种因素可以影响DPSCs生物学特性,这对牙髓干细胞的研究及应用具有指导意义。

关键词：牙髓干细胞生物学特性影响因素诱导条件分化组织工程再生医学