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首都医科大学学报 2021年第5期42卷 776-782页

作者：高歌查旭刘伟进杨慧首都医科大学基础医学院神经生物系北京脑重大疾病研究院帕金森病研究所北京市神经再生修复重点实验室神经变性病教育部重点实验室北京100069

目的建立解离-增强镧系荧光免疫分析(dissociation enhanced lanthanide fluorescent immunoassay,DELFIA)检测129位丝氨酸磷酸化α-突触核蛋白的方法及初步应用。方法使用体外蛋白重组技术纯化得到人源α-syn蛋白单体(α-syn),用Polo... 详细信息

目的建立解离-增强镧系荧光免疫分析(dissociation enhanced lanthanide fluorescent immunoassay,DELFIA)检测129位丝氨酸磷酸化α-突触核蛋白的方法及初步应用。方法使用体外蛋白重组技术纯化得到人源α-syn蛋白单体(α-syn),用Polo样激酶催化α-syn获得磷酸化α-syn单体(phosphorylatedα-syn monomer,p-α-syn),用4-氧代壬烯醛制备α-syn聚集体(aggregates ofα-syn,OW)及磷酸化α-syn聚集体(aggregates of p-α-syn,OP)。使用Western blotting法和间接ELISA方法验证本实验室前期制备的识别α-syn蛋白N端的多克隆抗体SN16和识别129位丝氨酸磷酸化α-syn蛋白的单克隆抗体C140S。使用SN16作为捕获抗体,C140S作为检测抗体的双抗夹心DELFIA法建立检测OP的标准曲线,并检测Thy 1-α-SYN转基因小鼠血浆内OP的变化。结果考马斯亮蓝染色和Western blotting法检测结果显示体外纯化的人源α-syn蛋白单体(17000)纯度高,并通过催化获得了p-α-syn、OW和OP纯蛋白,均可用作建立标准曲线的标准抗原。Western blotting和酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)结果显示SN16对α-syn、p-α-syn、OW、OP这4种形式的蛋白均可识别,C140S可以识别p-α-syn和OP,说明SN16和C140S可以用作双抗夹心法的配对抗体。间接DELFIA检测结果显示C140S对OP的识别效率更好。双抗夹心DELFIA检测结果显示,SN16-C140S作为配对抗体检测标准抗原的范围为:0.625~20 ng/mL,并建立了检测OP的标准曲线。Wt及Tg组小鼠血浆中OP在12月龄均较6月龄有所增加(P0.05)。结论本文建立的SN16-C140S配对的双抗夹心DELFIA体系可以检测Thy1-α-SYN转基因小鼠血浆中聚集的磷酸化α-syn变化情况。

关键词：帕金森病 α-突触核蛋白磷酸化α-突触核蛋白解离-增强镧系荧光免疫分析

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ECLIA与DELFIA测定甲状腺激素的对比及差异的校正方法

引用

标记免疫分析与临床 2005年第4期12卷 237-238页

作者：刘英邓智勇李进前安振梅四川大学华西医院实验医学科激素检测室四川成都610041

进行全自动电化学发光免疫分析(ECLIA)与解离-增强镧系荧光免疫分析(DELFIA)测定甲状腺激素结果对比并建立差异校正的方法。收集77份血清样本,分别用E170ECLIA和Auto DELFIA 1235测定T3、T4、TSH、 FT3和FT4,建立每日室内质量控制。对... 详细信息

进行全自动电化学发光免疫分析(ECLIA)与解离-增强镧系荧光免疫分析(DELFIA)测定甲状腺激素结果对比并建立差异校正的方法。收集77份血清样本,分别用E170ECLIA和Auto DELFIA 1235测定T3、T4、TSH、 FT3和FT4,建立每日室内质量控制。对两台仪器的测定结果分别进行配对t检验:提示测定T3、T4、FT3和 FT4的结果有显著性差异(P0．05)。对两台仪器的测定结果进行线性回归分析,两者测定T3、T4、TSH、FT3、FT4的相关系数(r)均大于0．970,相关性良好(P<0．05)。两种方法检测T3、 T4、FT3和FT4存在差异,而TSH结果一致。提出建立标准化是消除不同仪器、方法所致结果差异的最佳方法。

关键词：电化学发光免疫分析解离-增强镧系荧光免疫分析甲状腺激素对比

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