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浙江农林大学学报 2017年第2期34卷 326-331页

作者：程敏徐秋芳浙江农林大学浙江省森林生态系统碳循环与固碳减排重点实验室浙江临安311300

葡萄座腔菌Botryosphaeria dothidea引起的山核桃Carya cathayensis干腐病是导致山核桃树发病甚至死亡的主要病害之一,对山核桃产业带来了严重威胁。通过平板对峙法成功筛选出1株对病原菌有明显抑制效果的解淀粉芽孢杆菌植物亚种Bacillu... 详细信息

葡萄座腔菌Botryosphaeria dothidea引起的山核桃Carya cathayensis干腐病是导致山核桃树发病甚至死亡的主要病害之一,对山核桃产业带来了严重威胁。通过平板对峙法成功筛选出1株对病原菌有明显抑制效果的解淀粉芽孢杆菌植物亚种Bacillus amyloliquefaciens ***(菌种保藏号:CGMCC 11640)。试图通过扫描电镜探究该菌株对山核桃干腐病菌的抑制机制。对峙培养4,6和7 d后,比较菌丝和孢子形态,发现病原菌菌丝出现萎缩干瘪现象,培养时间越长,菌丝萎缩干瘪程度越大;对峙培养4 d时病原菌孢子正常,而到第6天时部分病原菌孢子表现出凹陷、萎缩现象,第7天异常孢子数量增加。用CGMCC 11640发酵上清液与水分别按V(上清液)∶V(水)=1∶9,2∶8,5∶5的比例配制成的马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)混合培养基培养病原菌,结果发现病原菌菌丝抑制率分别为75.81%,88.84%和94.30%,说明灭菌发酵上清液对病原菌有抑制作用。电镜观察发现,病原菌菌丝在含有灭菌发酵上清液的PDA混合培养基上出现萎缩干瘪现象。通过扫描电镜观察,推测CGMCC 11640菌株及其代谢物对病原菌的抑制作用主是通过破坏菌丝和孢子细胞壁和细胞膜,使细胞内原生质泄露,从而导致菌丝和孢子萎缩,最终杀死病原菌细胞。

关键词：森林保护学山核桃干腐病解淀粉芽孢杆菌植物亚种抑菌机制扫描电镜

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产褐藻胶裂解酶菌株HB12274的鉴定和发酵优化

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基因组学与应用生物学 2018年第10期37卷 4365-4371页

作者：高王宇黄惠琴刘敏朱军鲍时翔海南大学热带农林学院海口570228 中国热带农业科学院热带生物技术研究所海口571101

鉴定一株从红树林土壤中分离的产褐藻胶裂解酶菌株HB12274,并优化其培养条件使之产生高活性的胞外褐藻胶裂解酶。依据形态学、生理生化特性和16S rDNA序列分析对菌株HB12274进行鉴定;设计单因素和正交试验优化菌株HB12274产胞外褐藻胶... 详细信息

鉴定一株从红树林土壤中分离的产褐藻胶裂解酶菌株HB12274,并优化其培养条件使之产生高活性的胞外褐藻胶裂解酶。依据形态学、生理生化特性和16S rDNA序列分析对菌株HB12274进行鉴定;设计单因素和正交试验优化菌株HB12274产胞外褐藻胶裂解酶的培养条件。菌株HB12274鉴定为解淀粉芽孢杆菌植物亚种Bacillus amyloliquefaciens subsp. plantarum;菌株HB12274产褐藻胶裂解酶的最适发酵条件为：褐藻酸钠5.0 g/L、蛋白胨6.0 g/L、Na Cl 15.0 g/L、CaCl21.0 g/L、初始pH6.0,30℃发酵培养42 h。在最优培养条件下,菌株HB12274最大酶活性可达721.2 U/mL,与优化前酶活力相比提高了2.95倍。本研究获得菌株Bacillus amyloliquefaciens HB12274的最适产酶条件,为该菌的进一步研究应用提供参考。

关键词：褐藻胶裂解酶解淀粉芽孢杆菌植物亚种鉴定发酵优化

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山核桃干腐病抑制菌的筛选鉴定及抑制机理的探究

山核桃干腐病抑制菌的筛选鉴定及抑制机理的探究

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作者：程敏浙江农林大学

学位级别：硕士

山核桃干腐病是导致山核桃树病害甚至死亡的病原菌之一,给我国山核桃发展带来了严重的威胁,目前危害面积还在持续扩大。山核桃干腐病病原菌为葡萄座腔菌Botryosphaeria dothidea。本论文以天目山雷竹林土壤中分离纯化得到的103株菌株为... 详细信息

山核桃干腐病是导致山核桃树病害甚至死亡的病原菌之一,给我国山核桃发展带来了严重的威胁,目前危害面积还在持续扩大。山核桃干腐病病原菌为葡萄座腔菌Botryosphaeria dothidea。本论文以天目山雷竹林土壤中分离纯化得到的103株菌株为材料,通过平板对峙法筛选对山核桃干腐病病原菌具有抑制作用的生防菌,鉴定其菌种以及活性代谢物质的名称。主要结果如下:(1)抑制菌筛选。平板对峙法筛选出一株对病原菌有明显抑制效果的芽孢杆菌,命名为WK1。通过菌体表型特征分析、生理生化特征分析及16S rDNA基因序列系统发育学分析方法鉴定了WK1的分类学地位。结果表明WK1菌株属于芽孢杆菌属,为解淀粉芽孢杆菌植物亚种*** ***。(2)抑制机理的探究。通过扫描电镜探究WK1菌株对山核桃干腐病病原菌的抑制机理。与抑制菌WK1对峙培养4d、6d和7d后,比较病原菌***菌丝和孢子形态,发现病原菌菌丝出现萎缩干瘪现象,且培养时间越长,菌丝萎缩干瘪程度越大;对峙培养4d时病原菌孢子正常,而到第6d时部分病原菌孢子表现出凹陷、萎缩现象,第7d异常孢子数量增加。将灭菌发酵上清液与水分别按V(上清液)∶V(水)=1∶9,2∶8,5∶5的比例配制成的PDA混合培养基培养病原菌,结果病原菌菌丝抑制率分别62.53%、77.29%和90.45%,说明灭菌发酵上清液对病原菌有抑制作用。电镜观察发现,病原菌菌丝在含有灭菌发酵上清液的PDA混合培养基上出现萎缩干瘪现象。因此,WK1菌体及其代谢产物均通过破坏菌丝和孢子细胞壁和细胞膜,使细胞内原生质泄露,从而导致菌丝和孢子萎缩。(3)抑制活性物质的鉴定。利用HPLC、LC-MS技术对WK1脂肽粗提物进行定性定量分析,发现WK1含有surfactin,iturin,fengycin三大类脂肽,且在fengycin区域相对含量较高。对fengycin区域6个主要峰进行LC-MS单一质谱峰解析表明,WK1脂肽粗提物的fengycin区域主要成分是C15-C18 Fengycin A。(4)抑制活性物质广谱抗真菌性检测。通过纸片琼脂扩散法对WK1脂肽粗提物的抑菌谱进行测定,证明脂肽粗提物对杉木枯萎病、棉花黄病、哈密瓜枯萎病、黄瓜枯萎病、立枯丝核菌、蔬菜根腐病、茄子辣椒根腐病这7种病原菌菌丝生长有抑制作用。抑制效果在实验范围内随粗提物浓度的增加而增强。在脂肽粗提物为0.625mg/ml浓度下,可对杉木枯萎病、黄瓜枯萎病、茄子辣椒根腐病病原菌产生抑菌圈。在脂肽粗提物为10 mg/ml浓度下对黄瓜枯萎病的抑菌效果最好,抑菌圈达21mm;对立枯丝核菌和蔬菜根腐病的抑菌效果较差,抑菌圈分别为14.16 mm和13.65 mm。

关键词：解淀粉芽孢杆菌植物亚种山核桃干腐病抑菌物质脂肽

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柑橘酸腐病拮抗菌的筛选及其对柑橘品质的影响

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安徽农业科学 2019年第8期47卷 186-191页

作者：李登勇王建国支胡钰王勇吴日章珠海真绿色技术有限公司广东珠海519060 国家农产品保鲜工程技术研究中心广东珠海519060

[目的]筛选一株柑橘酸腐病拮抗菌,用于柑橘采后酸腐病的防治。[方法]筛选一株对柑橘酸腐病具有高效拮抗作用的生防菌,并研究其对柑橘可溶性固形物、可滴定酸、抗坏血酸及挥发性物质含量的影响。[结果]筛选出的拮抗菌株在平板上对白地霉(... 详细信息

[目的]筛选一株柑橘酸腐病拮抗菌,用于柑橘采后酸腐病的防治。[方法]筛选一株对柑橘酸腐病具有高效拮抗作用的生防菌,并研究其对柑橘可溶性固形物、可滴定酸、抗坏血酸及挥发性物质含量的影响。[结果]筛选出的拮抗菌株在平板上对白地霉(Geotrichum candidum Link)的抑菌率为82.58%。当柑橘酸腐病发病率为96.67%时,接种10~8 CFU/mL生防菌能有效降低柑橘酸腐病发病率至13.89%。经鉴定发现拮抗菌为解淀粉芽孢杆菌植物亚种(Bacillus amyloliqufaciens ***),其能延缓柑橘贮藏过程中抗坏血酸含量的下降,保持柑橘果实中可溶性固形物和可滴定酸的含量,延缓果实衰老,提高多种香味物质,特别是柠檬烯、月桂烯、沉香醇及奎醛等的含量,同时延缓正己醛和反式-2-己烯醛等挥发性物质的降解,从而有效延长柑橘的贮藏期,保证柑橘贮藏期内良好的果实风味、食品品质和营养价值。[结论]该研究可推动柑橘采后生物保鲜产业的发展。

关键词：酸腐病拮抗菌解淀粉芽孢杆菌植物亚种挥发性物质

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