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明胶/聚乳酸复合纤维膜的制备、表征及作为角膜细胞载体的评价

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高等学校化学学报 2012年第2期33卷 389-394页

作者：颜静高岩王清崔学军钟双玲王萍王洪艳吉林大学化学学院长春130012 吉林大学中日联谊医院长春130033 吉林农业大学资源与环境学院长春130118 吉林大学第一医院长春130021

利用静电纺丝技术制备了明胶与聚乳酸的复合纤维膜,研究了组分配比对复合膜的表面性能、孔隙结构和力学性能的影响,并以复合膜为组织工程支架进行兔角膜上皮细胞的体外培养.采用扫描电子显微镜、免疫荧光染色和噻唑蓝四氮唑溴化物(MTT)... 详细信息

利用静电纺丝技术制备了明胶与聚乳酸的复合纤维膜,研究了组分配比对复合膜的表面性能、孔隙结构和力学性能的影响,并以复合膜为组织工程支架进行兔角膜上皮细胞的体外培养.采用扫描电子显微镜、免疫荧光染色和噻唑蓝四氮唑溴化物(MTT)比色法综合评价了细胞在支架表面的黏附与增殖能力.结果表明,纺丝溶液的组分对纤维的直径分布和表面亲水性有显著影响,不同组分配比的复合纤维膜均具有高孔隙率的通孔结构;以明胶为基材可维持复合膜的细胞黏附性;与聚乳酸复合可以明显提高复合膜的力学性能.

关键词：明胶聚乳酸复合支架角膜细胞

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激光消融对角膜细胞的影响

中国激光 1993年第11期20卷 864-869页

作者：蓝之琳王康孙上海第二医科大学附属瑞金医院眼科上海200025

本文用计算机图像定量分析308nm准分子,193nm准分子和2.94μm Er∶YAG激光分别照射角膜后,角膜上皮细胞和内皮细胞的形态变化。结果表明:308nm激光对角膜上皮细胞有明显损伤;193nm对再生的上皮细胞无明显影响,而2.94μm对上皮细胞无影... 详细信息

本文用计算机图像定量分析308nm准分子,193nm准分子和2.94μm Er∶YAG激光分别照射角膜后,角膜上皮细胞和内皮细胞的形态变化。结果表明:308nm激光对角膜上皮细胞有明显损伤;193nm对再生的上皮细胞无明显影响,而2.94μm对上皮细胞无影响。但若使用2.94μm激光能量密度过高或切削过深,则对内皮细胞有影响。

关键词：激光消融角膜细胞激光手术

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人角膜细胞对单纯...

中华眼科杂志 1991年第4期27卷 235-237,T015页

作者：谢立信 Gebh.,BM 266033，青岛，山东省医学科学院眼科研究所 66033，青岛，山东省医学科学院眼科研究所美国路易斯安那州立大学眼科中心

报告人角膜3种原代培养细胞在体外对单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)Mckrae 株感染后的不同时相的敏感性实验研究,结果表明人角膜上皮细胞对感染最不敏感,内皮细胞次之,基质细胞最敏感。这种结果与人角膜3种细胞的自然防御功能相吻合,同时亦可... 详细信息

报告人角膜3种原代培养细胞在体外对单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)Mckrae 株感染后的不同时相的敏感性实验研究,结果表明人角膜上皮细胞对感染最不敏感,内皮细胞次之,基质细胞最敏感。这种结果与人角膜3种细胞的自然防御功能相吻合,同时亦可解释某些 HSK 患者的临床表现机制。

关键词：人疱疹病毒角膜细胞细胞培养

基于动态阈值选择和细化算法的角膜细胞轮廓抽取

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上海交通大学学报 1998年第9期32卷 67-69页

作者：赵立初施鹏飞上海交通大学图象处理与模式识别研究所

角膜细胞图象轮廓提取的关键是分隔出细胞与背景，生成二值图象．由于角膜细胞图象的光照不均匀，用单一域值无法兼顾亮区与暗区．提出了一种基于动态域值选择和细化算法的角膜细胞轮廓抽取算法．首先对处理图象进行灰度平均和中值滤波... 详细信息

角膜细胞图象轮廓提取的关键是分隔出细胞与背景，生成二值图象．由于角膜细胞图象的光照不均匀，用单一域值无法兼顾亮区与暗区．提出了一种基于动态域值选择和细化算法的角膜细胞轮廓抽取算法．首先对处理图象进行灰度平均和中值滤波平滑处理，消除细胞内部的不均匀性和保持细胞之间的边界；然后用动态域值选择算法分割细胞和背景；最后使用细化算法抽取细胞的轮廓．此算法应用于角膜细胞图象，处理结果证明了算法的有效性．

关键词：角膜细胞图象处理轮廓抽取角膜疾病诊断

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传代培养角膜细胞的染色体遗传变异率分析

上海交通大学学报（医学版） 2006年第1期26卷 76-77页

作者：马志敏金月娥任志华卢珞陆振虞大理学院遗传学教研室大理671000 上海交通大学基础医学院医学遗传学教研室

目的分析传代培养角膜细胞染色体数目的变异率。方法选择人角膜上皮细胞（HCE）、牛角膜内皮细胞（BCE）和兔角膜上皮细胞（RCE）细胞，采用直接法制备传代细胞染色体标本，常规Giemsa染色，1000倍光学显微镜下计数分裂相染色体数目... 详细信息

目的分析传代培养角膜细胞染色体数目的变异率。方法选择人角膜上皮细胞（HCE）、牛角膜内皮细胞（BCE）和兔角膜上皮细胞（RCE）细胞，采用直接法制备传代细胞染色体标本，常规Giemsa染色，1000倍光学显微镜下计数分裂相染色体数目，进行核型分析，统计染色体数目变异情况。结果 HCE染色体众数为56—65，为超二倍体；BCE染色体众数为27～34，为亚二倍体；RCE染色体众数为74～88，为超二倍体。与起源细胞相比，以上3种传代细胞染色体数目均发生了改变。结论该项核型分析为HCE、BCE和RCE的功能研究提供了重要的参考信息。

关键词：传代培养细胞染色体变异角膜细胞

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人角膜细胞的原代培养实验研究

中华眼科杂志 1991年第1期27卷 13-15页

作者：谢立信董晓光 266033，青岛，山东省医学科学院眼科研究所 66033，青岛，山东省医学科学院眼科研究所

报告人角膜细胞的体外培养技术,成功地建立了人角膜上皮、基质和内皮细胞的原代纯培养且形成良好的细胞单层。对培养的三种细胞的形态予以描述。可用于角膜组织细胞的体外实验研究,并讨论了在该项工作中获得成功的经验和注意事项。

关键词：角膜细胞细胞培养人

酮咯酸氨丁三醇对兔角膜细胞及纤连蛋白的影响

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中国实用眼科杂志 2007年第5期25卷 552-555页

作者：晏丕松杜之渝牟章兵重庆医科大学附属第二医院眼科中心重庆400010

目的探讨酮咯酸氨丁三醇（Ketorolac tromethamine 0.5%, Acular,安贺拉）对培养兔角膜细胞及细胞外基质纤连蛋白（Fibronectin,FN）的影响。方法选用原代及传代兔角膜细胞,实验组加入含不同浓度酮咯酸氨丁三醇的培养液,对照组加入等量... 详细信息

目的探讨酮咯酸氨丁三醇（Ketorolac tromethamine 0.5%, Acular,安贺拉）对培养兔角膜细胞及细胞外基质纤连蛋白（Fibronectin,FN）的影响。方法选用原代及传代兔角膜细胞,实验组加入含不同浓度酮咯酸氨丁三醇的培养液,对照组加入等量空白培养液,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测其对细胞增殖的抑制,倒置相差显微镜观察其对细胞的形态学改变,并进一步采用免疫细胞化学和ELISA研究其对角膜细胞分泌FN的影响。结果酮咯酸氨丁三醇浓度为50-175μg/ml时,作用24、48、72h均抑制角膜细胞的增殖（P均〈0.05）,并呈剂量依赖性。免疫细胞化学显示对照组可见胞浆着色及胞间丝状着色,而加药组仅见胞浆少量着色。ELISA结果显示低浓度时FN含量增加,而高浓度时其含量明显减少。结论酮咯酸氨丁三醇对角膜细胞的增殖有抑制效应,呈剂量依赖性,并且高浓度时可明显减少FN的含量。酮咯酸氨丁三醇可能通过抑制角膜细胞的增殖和减少细胞外基质,从而防止屈光术后的屈光回退。

关键词：酮咯酸氨丁三醇角膜细胞纤连蛋白

固有免疫在脂多糖、烟曲霉菌诱导的角膜细胞耐受中的作用

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现代免疫学 2010年第1期30卷 19-23页

作者：张小艳吴欣怡山东大学齐鲁医院眼科济南250012

研究烟曲霉菌(AF)、脂多糖(LPS)能否引起角膜细胞的耐受反应,增强角膜对病原体刺激的防御功能。小剂量AF、LPS分别预处理永生化人角膜上皮细胞(THCE)和永生化人角膜基质细胞(THSF),20 h后给予大剂量AF或LPS再次刺激。于再次刺激后4 h收... 详细信息

研究烟曲霉菌(AF)、脂多糖(LPS)能否引起角膜细胞的耐受反应,增强角膜对病原体刺激的防御功能。小剂量AF、LPS分别预处理永生化人角膜上皮细胞(THCE)和永生化人角膜基质细胞(THSF),20 h后给予大剂量AF或LPS再次刺激。于再次刺激后4 h收集细胞上清,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞因子IL-8的分泌,趋化实验检测LPS预处理引起THSF对PMN趋化的改变。于再次刺激后1 h收集细胞,实时RT-PCR检测细胞因子IL-8 mRNA和抗菌肽CCL20和LL-37 mRNA的表达。结果显示AF、LPS分别预处理THCE和THSF均可显著抑制IL-8的分泌。LPS预处理THSF抑制IL-8 mRNA的表达,增加CCL20和LL-37 mRNA的表达,并且抑制中性粒细胞(PMN)向角膜细胞的趋化。因此角膜细胞的耐受反应可避免过度的炎症反应,减轻角膜感染,在角膜炎症中起保护性作用。

关键词：角膜细胞耐受 LPS AF

准分子激光原位角膜磨镶术后角膜细胞凋亡的研究

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中国实用眼科杂志 2007年第9期25卷 1041-1044页

作者：陆勤康盛艳杨亚波王惠云童奇湖忻双华龚维坤宁波市鄞州人民医院眼科中心 315040 浙江大学医学院附属第二医院眼科中心 310009

目的了解准分子激光原位角膜磨镶术（laser in situ keratomileusis,LASIK）后早期角膜基质细胞凋亡的特点并探索LASIK术后角膜愈合反应程度与角膜刀的机械损伤、激光能量的相关性。方法 20只新西兰白兔,其中10只兔左眼为LASIK-4.0D组... 详细信息

目的了解准分子激光原位角膜磨镶术（laser in situ keratomileusis,LASIK）后早期角膜基质细胞凋亡的特点并探索LASIK术后角膜愈合反应程度与角膜刀的机械损伤、激光能量的相关性。方法 20只新西兰白兔,其中10只兔左眼为LASIK-4.0D组、右眼为LASIK-8.0D组、另10只兔左眼为单纯角膜瓣组、右眼作为空白对照组,在术后4小时处死兔取角膜制作病理切片,行透射电镜检查,用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标法（terminal-deoxynucleotidyl transferase medi-ated dUTP nick end labeling,TUNEL）原位显示凋亡细胞,激光扫描共聚焦显微镜观察凋亡细胞形态,定量统计比较凋亡水平差别。结果三个手术组中角膜基质中均出现凋亡细胞,主要分布于角膜瓣和基质床交接面两侧50μm范围内的基质层中;瓣缘的凋亡水平高于中央部。而空白对照组中,凋亡细胞仅出现在表层上皮,角膜基质细胞未见凋亡。三个手术组的TUNEL阳性细胞计数进行方差分析,三组之间差异无显著意义（F=1.008,P〉0.05）;每组不同个体的TUNEL阳性细胞计数存在明显的差异。结论正常角膜基质细胞不发生凋亡。角膜基质细胞凋亡与角膜损伤有关。LASIK术后早期即可出现角膜基质细胞的凋亡表达,该表达与角膜瓣的制作有关,与激光切削的深度、能量无明显的相关性。

关键词：凋亡角膜细胞角膜基质准分子激光原位角膜磨镶术 TUNEL