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花背蟾蜍蝌蚪变态期角膜发育过程中Ⅰ型胶原的免疫组化彩色图像分析

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实验动物科学与管理 2005年第4期22卷 6-9页

作者：刘怀金张丽王子仁甘肃农业大学动物科学技术学院兰州730070 兰州大学生命科学学院兰州730000

应用彩色图像分析技术对Ⅰ型胶原的免疫组化彩色图像分析可以弥补单纯应用定性指标或形态学指标的不足。花背蟾蜍蝌蚪在变态期角膜发育过程中随着Ⅰ型胶原的增多,内、外角膜逐渐愈合。Ⅰ型胶原的表达存在增龄变化,可以推测Ⅰ型胶原是构... 详细信息

应用彩色图像分析技术对Ⅰ型胶原的免疫组化彩色图像分析可以弥补单纯应用定性指标或形态学指标的不足。花背蟾蜍蝌蚪在变态期角膜发育过程中随着Ⅰ型胶原的增多,内、外角膜逐渐愈合。Ⅰ型胶原的表达存在增龄变化,可以推测Ⅰ型胶原是构成角膜基质的主要成分,对建立和维持角膜支架有重要作用。

关键词：花背蟾蜍蝌蚪角膜发育 Ⅰ型胶原免疫组化图像分析

线粒体融合蛋白2在小鼠角膜形态发育中的作用

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线粒体融合蛋白2在小鼠角膜形态发育中的作用

作者：张娇中国医科大学

学位级别：硕士

目的:线粒体融合蛋白2(mitofusin 2)定位于线粒体外膜和线粒体相关的内质网膜中,参与调节线粒体形态和功能。Mfn2也被称为肿瘤抑制基因(HSG),该基因无论在体内还是体外在控制细胞增殖和细胞凋亡方面都具有主要作用。研究表明参与线粒体... 详细信息

目的:线粒体融合蛋白2(mitofusin 2)定位于线粒体外膜和线粒体相关的内质网膜中,参与调节线粒体形态和功能。Mfn2也被称为肿瘤抑制基因(HSG),该基因无论在体内还是体外在控制细胞增殖和细胞凋亡方面都具有主要作用。研究表明参与线粒体融合和分裂的蛋白也广泛参与细胞过程,如线粒体代谢,氧化还原信号转导,维持mtDNA完整性和细胞死亡。眼科中的许多疾病,如白内障、青光眼、视网膜病变、角膜病变等都与细胞的增殖凋亡、线粒体功能改变相关。本研究旨在探讨在表面外胚层条件性敲除Mfn2基因引起小鼠角膜发育不良的形成原因。研究方法:1.使用Le-Cre转基因小鼠构建了基于loxp系统的Mfn2条件基因敲除小鼠(Mfn2 CKO),在晶状体、角膜和眼睑等表皮外胚层选择性地敲除Mfn2基因。PCR进行基因型分析及确定。对选择携带Le-Cre;Mfn2基因的雄鼠与Mfn2的雌鼠交配,将子代中Le-Cre;Mfn2(Mfn2 CKO)和Mfn2(Mfn2 WT)的鼠分别作为实验组与对照组。2.用大体解剖、免疫组织化学和HE染色观察Mfn2 CKO鼠与Mfn2 WT鼠角膜形态发育差异。3.用BrdU标记法及TUNEL法检测鼠角膜在胚胎期及生后的增殖凋亡情况。4.实时定量PCR用于检测的角膜标记物(K12、Col1α1,Pax6,keratocan和NSE)的mRNA水平表达量。结果:***2 CKO鼠表现为从E15.5到生后2月明显的小眼球畸形,并伴有角膜增厚,晶体减小。其中角膜增厚主要以角膜基质层的胶原纤维增多为主。2.在胚胎期,基因敲除鼠的角膜细胞增殖数量较对照组减少。生后实验组对照组角膜均未见明显细胞增殖。角膜凋亡细胞数在实验组较对照组增多。3.实验组鼠角膜中K12和Pax6的表达量减少,而Col1α1表达量增多,在免疫荧光中也得到相应证实。结论:1.利用Cre-Loxp系统进行条件性基因剔除,可以使Mfn2基因于小鼠胚胎早期在表面外胚层条件性敲除,而其他组织中Mfn2表达不受影响。***2基因条件性敲除后,眼前节可有角膜增厚,角膜虹膜黏连的表现。***2基因缺失在一定程度上影响角膜的发育,尤其导致角膜基质中胶原纤维的增生。

关键词： Mfn2 角膜发育线粒体增殖凋亡

花背蟾蜍角膜早期发育中氨基多糖的电镜细胞化学研究

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实验生物学报 1989年第4期22卷 393-405页

作者：杨涛仝允栩兰州大学生物学系

本文用钌红显示氨基多糖的电镜细胞化学方法,较细致地研究了花背蟾蜍(Bufo raddeiStrauch)胚胎发育过程中(16—25期,即神经管至鳃盖完全封闭期)氨基多糖(GAG)在角膜早期发育中的变化。结果表明:GAG的合成由非硫酸化向硫酸化转变,且随着... 详细信息

本文用钌红显示氨基多糖的电镜细胞化学方法,较细致地研究了花背蟾蜍(Bufo raddeiStrauch)胚胎发育过程中(16—25期,即神经管至鳃盖完全封闭期)氨基多糖(GAG)在角膜早期发育中的变化。结果表明:GAG的合成由非硫酸化向硫酸化转变,且随着角膜的发育其含量逐渐增加。角膜各部位的HA在16—21期(胚胎开口期),其含量逐渐增加,且20(鳃血循环期)-21期达最高水平,此后含量下降,同时DS、CS、HS和Hep的含量上升。据分析,HA、HS和胶原与间充质细胞迁移有关,HA还可促使基质的膨胀和水化。硫酸化GAG在角膜的脱水、致密、细胞密度及角膜透明中起作用。胶原纤维间的硫酸化GAG能调节胶原纤维的规则化,故也有助于角膜的透明。

关键词：花背蟾蜍角膜发育氨基多糖胶原

计算机辅助分析两栖类角膜诱导中胶原免疫组化研究

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计算机辅助分析两栖类角膜诱导中胶原免疫组化研究

作者：刘怀金甘肃农业大学

学位级别：硕士

本文以花背蟾蜍(Bufo raddei Strauch)后肢芽期蝌蚪为实验材料,通过免疫组织化学SP法检测了花背蟾蜍蝌蚪变态期角膜发育和角膜诱导过程中Ⅰ、Ⅲ和Ⅳ型胶原在角膜各部分分布及变化情况,并应用计算机辅助图像分析系统对Ⅰ、Ⅲ和Ⅳ型胶原... 详细信息

本文以花背蟾蜍(Bufo raddei Strauch)后肢芽期蝌蚪为实验材料,通过免疫组织化学SP法检测了花背蟾蜍蝌蚪变态期角膜发育和角膜诱导过程中Ⅰ、Ⅲ和Ⅳ型胶原在角膜各部分分布及变化情况,并应用计算机辅助图像分析系统对Ⅰ、Ⅲ和Ⅳ型胶原进行光密度分析。同时还用透射电镜观察了Ⅰ型胶原在角膜诱导过程中的变化。结果发现: (1)在角膜正常发育组中,Ⅰ型胶原在完全变态期角膜基质中有较高的表达,而Ⅲ型胶原除在上皮层有较强表达外,在基质层与内皮层也均有表达,Ⅳ型胶原在前肢芽期Bowman′s膜中有较强表达,也在Descement′s膜、上皮下基底膜、角膜基质中均有表达,只是较Ⅰ型胶原在完全变态期角膜基质中的表达弱;(2)在角膜移植组中,Ⅰ型胶原在角膜移植后30d,Ⅲ型胶原在22d表达较高,上皮下胶原纤维排列较整齐,移植片开始透明;到了移植后40d,Ⅰ、Ⅲ型胶原表达达到最大值。此时,角膜已基本透明;而Ⅳ型胶原在整个透明过程中的表达趋于稳定,只是在移植后46d略高一些。对Ⅰ型胶原免疫细胞化学研究表明,在移植后16d,上皮中黑色素颗粒较多,与阴性对照相比,免疫反应较弱;移植后30d,免疫反应较强;而到了移植后40d,移植片中黑色素减少,角膜基本透明,与阴性对照相比,免疫反应很强,这与免疫组织化学染色结果相一致。因此,根据Ⅰ、Ⅲ和Ⅳ型胶原在角膜发育和角膜诱导过程中的表达变化以及胶原在角膜发育和角膜诱导的形态学变化过程中所起作用的有关报道,我们推测: (1)在角膜正常发育组中,随着胶原等细胞外基质的增多,内、外角膜开始愈合,增多的胶原中,主要为Ⅰ型胶原,它是构成角膜基质的主要成分。Ⅲ型胶原除在上皮表达外,与Ⅰ型胶原同时存在,只是表达比例不同。Ⅳ型胶原是基底膜的主要成分,同时在角膜基质中也有表达,角膜基质的构建可能部分取决于不同类型胶原蛋白表达比例。(2)角膜移植组,随着表皮移植片的透明,Ⅰ、Ⅲ型胶原表达逐渐增加,到基本透明时,Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达达到最大值,Ⅰ、Ⅲ型胶原可能在表皮移植片透明为角膜过程起一定作用。而Ⅳ型胶原在表皮移植

关键词： Ⅰ、Ⅲ和Ⅳ型胶原免疫组织化学免疫细胞化学角膜诱导角膜发育花背蟾蜍计算机辅助图像分析

骨形态发生蛋白-2及转化生长因子-β2在大鼠角膜成长过程中的表达

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兰州大学学报（医学版） 2008年第3期34卷 25-29页

作者：王海燕詹玉蕊黎小军兰州大学第一医院眼科甘肃兰州730000

目的探讨转化生长因子-β(TGF-β)超家族成员骨形态发生蛋白-2(BMP-2)及转化生长因子-β2(TGF-β2)在正常大鼠角膜生长发育过程中的表达及作用。方法用免疫组织化学方法观察TGF-β超家族成员BMP-2及TGF-β2分别在大鼠胚胎17d,出生当天,... 详细信息

目的探讨转化生长因子-β(TGF-β)超家族成员骨形态发生蛋白-2(BMP-2)及转化生长因子-β2(TGF-β2)在正常大鼠角膜生长发育过程中的表达及作用。方法用免疫组织化学方法观察TGF-β超家族成员BMP-2及TGF-β2分别在大鼠胚胎17d,出生当天,出生后4、7、10 d和11周角膜蛋白水平的表达。结果BMP-2和TGF-β2在大鼠胚胎17 d时有表达,于出生当天至出生后10 d及成年鼠角膜生长发育过程中呈动态变化过程。结论TGF-β超家族成员BMP-2及TGF-β2在鼠角膜的表达随着角膜的生长发育而调节,BMP-2可能与角膜的生长发育及维持出生后角膜的动态平衡有关。

关键词：骨形态发生蛋白-2 角膜发育转化生长因子-β2 免疫组织化学

角膜中Wnt/β-catenin信号通路研究进展

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生命的化学 2021年第8期41卷 1824-1828页

作者：谭亭伍满但婧王平三峡大学附属仁和医院宜昌443000

Wnt信号传导途径在机体生长、发育、代谢等生物学过程中起着重要作用。人体各组织器官的发生发展与Wnt信号传导途径有着密切关系,通路的异常活化参与了人体多种疾病的发展过程。Wnt信号通路以其经典的Wnt/β-catenin信号通路研究最为广... 详细信息

Wnt信号传导途径在机体生长、发育、代谢等生物学过程中起着重要作用。人体各组织器官的发生发展与Wnt信号传导途径有着密切关系,通路的异常活化参与了人体多种疾病的发展过程。Wnt信号通路以其经典的Wnt/β-catenin信号通路研究最为广泛,Wnt/β-catenin信号通路在角膜发育过程中发挥了至关重要的作用,同时,其异常激活也会导致角膜相关疾病的发生。本文对近年来各学者对Wnt/β-catenin信号通路与角膜发育及其相关疾病的研究进行综述,以期能全面了解Wnt/β-catenin信号通路与角膜发育及疾病发生的关系。

关键词： Wnt/β-catenin信号通路角膜发育角膜疾病