检索结果-南通市图书馆

中华眼底病杂志 2017年第3期33卷 281-285页

作者：张惟姜鉴洪陈松惘产墀杨婧马映雪陈莉宋建天津市眼科医院天津市眼科学与视觉科学重点实验室天津市眼科研究所天津医科大学眼科临床学院 300020

目的观察精氨酸酶（Arg）抑制剂N羟基-正-Ｌ精氨酸（nor-NOHA）对体外高糖培养的恒河猴视网膜微血管内皮细胞（RF/6A细胞）的保护作用。方法体外培养RF/6A细胞，并将其分为正常对照组（A组）、高糖对照组（B组）、高糖＋nor-NOHA处... 详细信息

目的观察精氨酸酶（Arg）抑制剂N羟基-正-Ｌ精氨酸（nor-NOHA）对体外高糖培养的恒河猴视网膜微血管内皮细胞（RF/6A细胞）的保护作用。方法体外培养RF/6A细胞，并将其分为正常对照组（A组）、高糖对照组（B组）、高糖＋nor-NOHA处理组（C组）、高糖＋二甲基亚砜（DMSO）对照组（D组）。A组细胞以5.5 mmol/L葡萄糖继续培养；B～D组以25.0 mmol/L葡萄糖继续培养，C、D组分别加入125 mg/L的nor-NOHA及1%DMSO。采用噻唑蓝比色法、Transwell小室法和体外成管实验分别检测各组RF/6A细胞增生、迁移和管腔形成能力。采用荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测各组RF/6A细胞中ArgⅠ、内皮型一氧化氮（NO）合酶（eNOS）、诱导型NO合酶（iNOS）的mRNA相对表达量。采用酶链免疫吸附测定试验（ELISA）检测各组RF/6A细胞培养上清液中NO和白细胞介素（IL）-1b的分泌量。结果 B组RF/6A细胞增生、凋亡及管腔形成能力较A组明显降低，差异有统计学意义（t=2.367、5.633、7.045，P＜0.05）；C组RF/6A细胞增生、凋亡及管腔形成能力较B组提高，差异有统计学意义（t=5.260、6.952、8.875，P＜0.05）。RT-PCR检测结果显示，与A组比较，B组RF/6A细胞中ArgⅠ、iNOS mRNA相对表达量升高（t=6.836、3.342），C组RF/6A细胞中ArgⅠ、iNOS mRNA相对表达量降低（t=4.904、7.192），差异均有统计学意义（P＜0.05）；B组RF/6A细胞中eNOS mRNA相对表达量降低（t=4.165），C组RF/6A细胞中eNOS mRNA相对表达量升高（t=6.594），差异均有统计学意义（P＜0.05）。ELISA检测结果显示，与A组比较，B组RF/6A细胞培养上清液中NO分泌量减少（t=4.925），C组RF/6A细胞培养上清液中NO分泌量增多（t=5.368），差异均有统计学意义（P＜0.05）；B组RF/6A细胞培养上清液中IL-1b分泌量增多（t=5.032），C组RF/6A细胞培养上清液中IL-1b分泌量减少（t=7.792），差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 nor-NOHA对体外高糖培养的RF/6A细胞有保护作用，可提高其增生、迁移及管腔形成能力；其机制可能是通过平衡Arg/NOS的表达从而抑制氧化应激反应。

关键词：精氨酸酶/拮抗剂和抑制剂视网膜血管/细胞学内皮细胞/生理学细胞,培养的

来源：

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

高糖缺氧环境下转甲状腺素蛋白对视网膜血管内皮细胞的影响

引用

中华眼底病杂志 2016年第2期32卷 159-162页

作者：邵琚姚勇南京医科大学附属无锡市人民医院眼科 214023

目的观察高糖缺氧环境下转甲状腺素蛋白（TTR）对人视网膜血管内皮细胞（hREC）的影响。方法分别于5．5mmol／L葡萄糖（低糖，LG）、25．0mmol／L葡萄糖（高糖，HG）以及200μmol／LCoCl2诱导的缺氧环境中培养hREC、人视网膜色素上皮细... 详细信息

目的观察高糖缺氧环境下转甲状腺素蛋白（TTR）对人视网膜血管内皮细胞（hREC）的影响。方法分别于5．5mmol／L葡萄糖（低糖，LG）、25．0mmol／L葡萄糖（高糖，HG）以及200μmol／LCoCl2诱导的缺氧环境中培养hREC、人视网膜色素上皮细胞（hRPEC），并据此分为LG组、LG缺氧组、HG组、HG缺氧组。实时无标记细胞功能分析仪检测细胞培养初始时间（Oh）及培养后4、8、16、24、36、48、60、72h的细胞生长指数。分别在LG组、LG缺氧组、HG组、HG缺氧组细胞培养基中添加4tLmol／LTTR，即LG组＋TTR、LG缺氧组＋TTR、HG组＋TTR、HG缺氧组＋TTR，观察TTR对hREC和hRPEC的作用以及hRPEC对hREc生长的影响。Transwell共培养体系观察hPEPC对hREC生长影响。结果培养后72h，LG组hREc、hRPEC生长指数明显高于LG缺氧组、HG组，差异均有统计学意义（hREC：F=17．098、22．970，P〈0．05；hRPEC：F=45．442、9．011，P〈0．05）；HG组、HG缺氧组hREC、hRPEC生长指数显著降低，差异均有统计学意义（hREC：F=146．184，P〈0．05；hRPEC：F=27．907，P〈0．05）。HG组＋TTR、HG缺氧组＋TTRhREC生长指数显著低于HG组、HG缺氧组，两组hREC生长指数比较，差异有统计学意义（F=161．430、24．106，P〈0．05）；LG组＋TTR、LG缺氧组＋TTRhREC生长指数高于LG组，LG缺氧组，两组hREC生长指数比较，差异有统计学意义（F=200．486、48．662，P〈0．05）。LG组＋TTR、LG缺氧组＋TTR、HG组＋TTR、HG缺氧组＋TTRhRPEC生长指数均较LG组、LG缺氧组、HG组、HG缺氧组略高，但差异无统计学意义（P〉0．05）。共培养与单独生长细胞相比，共培养hRPEC对hREC生长有显著抑制作用，差异有统计学意义（LG组：F=15．711，P〈0．05；LG缺氧组：F=45．659，P〈0．05；HG组：F=7．857，P〈0．05；HG缺氧组：F=6．348，P〈0．05）。绪论高糖缺氧环境下TTR对hREC生长有抑制作用。

关键词：视网膜血管/细胞学内皮细胞/生理学前白蛋白/药物作用

来源：

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

高糖状态下视网膜血管内皮细胞基因表达谱的RNA-Seq分析

引用

中华眼底病杂志 2018年第4期34卷 377-381页

作者：张哲刘巨平东莉洁刘竹青黄亮瑜苏睿虹赵今稚张晓敏李筱荣天津医科大学眼科医院天津医科大学眼科研究所天津医科大学眼视光学院 300384

目的观察高糖状态下视网膜血管内皮细胞基因表达谱的RNA-Seq分析结果。方法体外培养视网膜血管内皮细胞，取对数生长期细胞用于实验。将细胞分为对照组、高糖组，两组细胞分别采用5、25 mmol/L的葡萄糖持续培养48 h。应用RNA-Seq技术对... 详细信息

目的观察高糖状态下视网膜血管内皮细胞基因表达谱的RNA-Seq分析结果。方法体外培养视网膜血管内皮细胞，取对数生长期细胞用于实验。将细胞分为对照组、高糖组，两组细胞分别采用5、25 mmol/L的葡萄糖持续培养48 h。应用RNA-Seq技术对两组细胞进行全转录组测序，获得生物学大数据，并在此基础上分析差异表达基因；通过GO功能、Pathway显著性富集分析对差异基因的功能及所在的信号通路进行解释说明。结果对照组和高糖组之间共有449个差异表达基因。其中，上调基因297个，下调基因152个。差异基因功能涉及分子生物学过程调控以及细胞的能量代谢、蛋白合成等诸多方面，其中ITGB1BP2、NCF1、UNC5C等与炎症的产生相关；AKR1C4、ATP1A3、CHST5、LCTL等与细胞的能量代谢相关；DAB1、PRSS55等与蛋白合成相关；SMAD9、BMP4等与细胞外基质的代谢相关。GO功能显著性富集分析结果显示，差异基因的功能主要可以划分为生物学行为调控，细胞组分形成以及分子功能三大板块，主要集中表现在生物学过程部分的系统形成和调节多细胞有机体的形成等。Pathway显著性富集分析前20条具有明显差异的通路，发现差异表达比较明显的是转化生长因子-β（TGF-β）信号通路、补体通路等，色氨酸、丝氨酸、氰氨酸等与氨基酸代谢相关的通路也受到了影响。其中，白细胞抑制因子9、骨形成蛋白4通过TGF-β信号通路发挥作用。结论高糖通过破坏视网膜血管内皮细胞的跨膜传导、细胞外基质代谢以及蛋白质的转录和翻译等，从而影响视网膜血管内皮细胞的功能。

关键词：视网膜血管/细胞学内皮细胞基因表达谱糖尿病视网膜病变/病因学

来源：

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

单分子成像研究视网膜血管内皮细胞膜上血管内皮生长因子受体2聚集状态

单分子成像研究视网膜血管内皮细胞膜上血管内皮生长因子受体2聚...

引用

作者：杨宋阳天津医科大学

学位级别：硕士

目的新生血管在多种不可逆视力损害性眼病中扮演重要角色,包括增生性糖尿病视网膜病变(proliferative diabetic retinopathy,PDR)、新生血管性年龄相关性黄斑变性(neovascular age-related macular degeneration,nAMD)等。广泛研究证实... 详细信息

目的新生血管在多种不可逆视力损害性眼病中扮演重要角色,包括增生性糖尿病视网膜病变(proliferative diabetic retinopathy,PDR)、新生血管性年龄相关性黄斑变性(neovascular age-related macular degeneration,nAMD)等。广泛研究证实血管新生是一个复杂而协调的过程,需要大量受体的有序激活,其中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及血管内皮生长因子受体(vascular endothelial growth factor receptor,VEGFR)发挥关键作用。VEGFR2磷酸化激活后主要诱导血管内皮细胞的增殖、迁移和存活等,是血管生成主要的关键限速步骤。VEGFR2的细胞外结构域(extracellular domains,ECD)与VEGF结合后由单体转变为二聚体,形成的二聚体复合物介导细胞内酪氨酸激酶结构域的活化,这一结构变化对于受体磷酸化至关重要。近年来抗VEGF治疗成为多种眼底疾病的一线用药,但是患者表现出不同的反应性,深入了解细胞膜表面VEGFR2与VEGF结合前后的聚集状态可以加深人们对VEGF信号通路的理解。方法1.构建VEGF对血管内皮细胞的作用模型通过加入不同浓度的VEGF,观察VEGF对恒河猴视网膜血管内皮细胞(RF/6A)增殖、迁移以及管腔形成能力的作用,模拟病理性新生血管过程中VEGF的促进血管生成作用;蛋白免疫印迹(Western blot)检测VEGF对VEGFR2及下游信号通路Erk、Akt的激活作用;酶联免疫吸附(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定各组中的 VEGF 浓度。2.构建单分子成像模型构建标记有绿色荧光蛋白(mNeonGreen)的VEGFR2重组质粒,转染血管内皮细胞后采用共聚焦显微镜观察绿色荧光蛋白的表达;实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative PCR,qPCR)、Western blot检测细胞中 VEGFR2 的mRNA和蛋白的表达。3.单分子成像观察细胞膜上VEGFR2聚集状态变化基于构建的单分子成像模型,采用全内反射荧光显微镜(total internal reflection fluorescence microscopy,TIRFM)记录细胞膜上单个 VEGFR2 分子加入VEGF前后的荧光强度分布和漂白步数,判断受体的寡聚或多聚状态变化。结果***对血管内皮细胞的促进作用加入不同浓度的VEGF后,RF/6A细胞的增殖、迁移和管腔形成功能均增强,较对照组差异有统计学意义(t=22.67、72.67、45.72,P学意义(t=8.589、4.089、10.01,P细胞转染 VEGFR2-mNeonGreen 质粒共聚焦显微镜观察发现,转染24 h后,质粒转染组细胞可见绿色荧光表达;qPCR检测结果显示质粒转染组细胞中VEGFR2、mNeonGreen mRNA表达较空白对照组显著升高,差异均有统计学意义(t=20.04、27.32,P细胞VEGFR2蛋白表达较空白对照组增强,差异有统计学意义(t=10.46,P细胞膜上VEGFR2聚集状态变化使用TIRFM对转染VEGFR2-mNeonGreen质粒的RF/6A进行成像,无配体刺激状态下,荧光强度分析显示受体的荧光强度分布呈四个高斯分布之和,其中78%为单体,19%为二聚体,2%为三聚体,1%为四聚体;光漂白步数分析受体中77.3%为单体,16.5%为二聚体,3.8%为三聚体,3.2%为四聚体。加入VEGF后,荧光强度分析受体中单体为51%,二聚体为34%,三聚体为7%,四聚体为8%;光漂白步数分析受体中47.8%为单体,30%为二聚体,11.4%为三聚体,9.7%为四聚体。结论无配体状态下,VEGFR2在细胞膜表面以单体和包括二聚体在内的多聚体形式共存,以单体为主;加入VEGF后,VEGFR2单体形式显著减少,二

关键词：单分子成像血管内皮生长因子受体2 二聚化动力学视网膜血管/细胞学

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

抗VEGF治疗后纤维化加剧分析及抑制内源性CTGF表达的慢病毒颗粒构建

抗VEGF治疗后纤维化加剧分析及抑制内源性CTGF表达的慢病毒颗粒构...

引用

作者：牛瑞天津医科大学

学位级别：硕士

目的:验证抗VEGF治疗后纤维化加剧作用因子,构建结缔组织生长因子（CTGF）重组干扰载体（shRNA）,观察其对视网膜血管内皮细胞内源性CTGF表达的抑制作用。方法:培养细胞分为空白对照组、高糖组及高糖联合抗VEGF组,以模拟临床中注射抗VEG... 详细信息

目的:验证抗VEGF治疗后纤维化加剧作用因子,构建结缔组织生长因子（CTGF）重组干扰载体（shRNA）,观察其对视网膜血管内皮细胞内源性CTGF表达的抑制作用。方法:培养细胞分为空白对照组、高糖组及高糖联合抗VEGF组,以模拟临床中注射抗VEGF药物治疗与否PDR患者体内细胞状态,应用实时定量PCR验证CTGF、FN、α-SMA、ColI表达,收集注射抗VEGF药物与否PDR患者纤维增殖膜,进行荧光半定量分析。构建带有mcherry红色荧光标记的人源CTGF重组干扰载体（CTGFshRNA）,应用三质粒包装系统获得高滴度的CTGFshRNA慢病毒颗粒,并感染视网膜血管内皮细胞,首先利用干扰载体中的红色荧光标记示踪并筛选慢病毒的最佳感染复数及起效时间,在此基础之上将细胞分为三组,分别为空白对照组,感染对照组及CTGF敲低组。通过Transwell实验观察细胞迁移能力的改变,经实时定量PCR联合Western blot方法量化CTGF的敲低效率及FN、α-SMA、ColI蛋白的表达。结果:高糖联合抗VEGF组中各因子表达量（CTGF:197.35±14.95,FN:3.08±0.47,α-SMA:4.50±1.07,ColI:2.14±0.06）较高糖组（CTGF:2.00±0.14,FN:1.54±0.10,α-SMA:2.24±0.35,ColI:1.97±0.08）明显上升,差异具有统计学意义（F=7.86、4.24、6.03、0.16,P=0.000、0.005、0.03、0.041）。增殖膜荧光结果与其相符。确定在实验体系中感染复数20及起效时间72h为CTGFshRNA慢病毒优化感染条件,可有效降低内源性CTGF表达水平。Transwell细胞迁移实验结果显示,CTGF敲低组穿过小孔细胞数（117.33±19.76）较空白对照组（268.00±30.05）及感染对照组（241.67±39.12）明显降低,差异均有统计学意义（F=20.64,P=0.002）。实时定量PCR实验结果显示:CTGF敲低组中相关因子表达量（CTGF:0.11±0.11,FN:0.14±0.13,α-SMA:0.10±0.09及ColI:0.09±0.04）与空白对照组相比差异具有统计学意义（F=128.83、124.44、144.76、1374.44,P=0.000、0.000、0.000、0.000）。Western blot结果显示:CTGF敲低组中相关蛋白表达量为（CTGF:0.96±0.07,FN:0.99±0.06,α-SMA:0.61±0.06及ColI:0.60±0.01）与空白对照组（CTGF:1.76±0.19,FN:1.72±0.15,α-SMA:1.30±0.16,ColI:1.19±0.08）相比差异具有统计学意义（F=22.55、41.60、25.73、161.68,P=0.002、0.000、0.001、0.000）。结论:抗VEGF药物引起视网膜血管内皮细胞中CTGF等相关因子表达上升,在临床组织中得到验证,成功制备可特异性敲低CTGF表达的CTGFshRNA慢病毒颗粒,初步证实CTGFshRNA慢病毒可有效下调内源性CTGF的表达,抑制细胞的迁移并下调FN、α-SMA、ColI表达,即CTGFshRNA慢病毒是抑制内源性CTGF表达的潜在分子工具。

关键词：血管内皮生长因子结缔组织生长因子慢病毒感染视网膜血管/细胞学内皮细胞

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

欢迎您,

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

欢迎您,

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：