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内质网应激反应蛋白在光照损伤诱导视网膜变性中的作用

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北京大学学报（医学版） 2008年第4期40卷 425-430页

作者：吴乐萌郭秀娟曹安民杨丽萍北京大学第三医院眼科北京大学眼科中心北京100083

目的：探讨在光照损伤诱导视网膜感光细胞变性凋亡中,内质网应激反应蛋白的表达变化。方法：取4 -5周龄的Balb/cJ雄性小鼠189只,随机分为7组（每组n=27）,其中1组（27只）作为对照组,6组（162只）作为实验组。将实验组Balb/cJ小鼠暗适... 详细信息

目的：探讨在光照损伤诱导视网膜感光细胞变性凋亡中,内质网应激反应蛋白的表达变化。方法：取4 -5周龄的Balb/cJ雄性小鼠189只,随机分为7组（每组n=27）,其中1组（27只）作为对照组,6组（162只）作为实验组。将实验组Balb/cJ小鼠暗适应48h后暴露于光照损伤（波长490 -580nm,光照度3500lx）24h。分别于暗恢复后0h,3h,6h,24h,3d以及7d处死小鼠,摘取眼球。用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（terminal transferase-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL）检测感光细胞的凋亡;Western blot检验视网膜中内质网应激反应蛋白（GRP78/BiP,procaspase-12和cleaved caspase-12,p-PERK,p-eIF2α）的表达变化;免疫荧光染色共聚焦显微镜观测内质网应激反应蛋白在视网膜中的表达。结果：（1）光照损伤后视网膜外核层中出现TUNEL染色阳性细胞,并且在暗恢复24h后阳性染色细胞数达到高峰;（2）伴随光照损伤诱导的视网膜变性过程,Western blot检测结果显示内质网应激反应蛋白的表达上调,与正常对照组之间的差异具有统计学意义（P〈0.01）;（3）免疫荧光染色结果显示内质网应激反应蛋白主要表达于视网膜感光细胞的内节和感光细胞核中。结论：在光照损伤诱导的视网膜感光细胞变性凋亡中,内质网应激反应蛋白的激活对于感光细胞的变性凋亡可能具有重要作用。应用内质网应激反应调节剂可能对此类疾病起到有效治疗作用。

关键词：视网膜变性内质网细胞凋亡光刺激

视网膜变性对RCS-P^+大鼠γ-氨基丁酸及其合成酶谷氨酸脱羧酶65表达的影响

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第三军医大学学报 2013年第5期35卷 390-393页

作者：何建荣陈丽峰李瑶琛第三军医大学西南医院全军眼科中心重庆400038

目的观察视网膜变性过程中γ-氨基丁酸(γ-amino butyric acid,GABA)及合成酶谷氨酸脱羧酶65(glutamicacid decarboxylase 65,GAD65)的表达变化。方法选择出生后15、30、60、90 d的RCS-P+和同年龄的RCS-rdy+-P+大鼠,采用免疫荧光(IF)和免疫印迹法(Western blot)观察两种大鼠出生后15、30、60、90 d GABA和GAD65的表达差异。结果视网膜中GABA和GAD65主要表达于内核层、内从状层和节细胞层。随着天龄的增加,RCS-rdy+-P+大鼠中GABA阳性细胞逐渐减少。RCS-P+变性鼠在出生后15～60 d GABA阳性细胞随天龄增加逐渐减少,在出生后60～90 d(即视网膜变性中晚期)GABA阳性细胞大量增加,GABA表达明显高于RCS-rdy+-P+大鼠(P视网膜色素变性过程中,GABA、GAD65在视网膜内层的表达均有显著的升高,提示输入剥夺后GABA能无长突细胞未见损伤,其活性甚至略有增高。

关键词：视网膜变性 γ-氨基丁酸 GAD65

兔眼视网膜下注射N-甲基右旋天冬氨酸诱导视网膜变性的组织病理学研究

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中华眼科杂志 2007年第10期43卷 922-927页

作者：张纯徐永胜王薇曹安民北京大学第三医院北京大学眼科中心 100083

目的研究视网膜下注射兴奋性氨基酸N-甲基右旋天冬氨酸（NMDA）对神经细胞变性的作用。方法取12只1个月龄有色家兔，视网膜下注射10μl（30mmol／L）NMDA（溶剂为DMEM-F12），形成视网膜隆起，在注射12、24、48h及1周后分别处死家兔，... 详细信息

目的研究视网膜下注射兴奋性氨基酸N-甲基右旋天冬氨酸（NMDA）对神经细胞变性的作用。方法取12只1个月龄有色家兔，视网膜下注射10μl（30mmol／L）NMDA（溶剂为DMEM-F12），形成视网膜隆起，在注射12、24、48h及1周后分别处死家兔，取其视网膜组织进行免疫组织化学检测和电镜观察。应用抗Calretinin、Calbindin、PKCα抗体，分别标记视网膜无长突细胞、水平细胞及视杆双极细胞；采用原位缺口末端标记技术（TUNEL）技术标记凋亡细胞。结果损伤早期（12～24h），实验组视网膜可见散在细胞核固缩浓染的光感受器细胞，并有无长突细胞和神经节细胞的早期严重变性；中期（48h）视网膜各层神经元均出现病理性改变；损伤晚期（1周）视网膜各层细胞数目明显减少。损伤早期，TUNEL技术标记的阳性细胞位于视网膜各层。免疫组织化学和形态学计量资料显示视网膜下注射NMDA后，水平细胞、无长突细胞及神经节细胞数目明显减少，视杆双极细胞数目基本无变化。超微结构观察显示有凋亡、坏死、水肿变性及混合型细胞死亡等多种变性形式。结论视网膜下聚集NMDA时，光感受器细胞、水平细胞、视杆双极细胞、无长突细胞及神经节细胞均表现为视网膜兴奋性毒性反应，与以往体内及体外研究结果显示的仅有内核层神经元死亡情况不同。

关键词：视网膜变性 N-甲基天冬氨酸注射,病灶内

基于肾精与干细胞的关系阐释补肾益精法在视网膜变性治疗中的作用机理

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北京中医药大学学报 2023年第9期46卷 1301-1306页

作者：李佳贤梁丽娜许凯金昱中国中医科学院眼科医院眼功能实验室北京100040

干细胞作为一类具有自我更新、高度增殖和多向分化潜能的细胞群体,在视网膜变性治疗领域展现出广阔的前景。中医学肾精与干细胞在繁衍生殖、生长发育、生髓化血、濡养脏腑等生理功能及先天与后天来源等方面存在诸多相似性,尤其是先天之... 详细信息

干细胞作为一类具有自我更新、高度增殖和多向分化潜能的细胞群体,在视网膜变性治疗领域展现出广阔的前景。中医学肾精与干细胞在繁衍生殖、生长发育、生髓化血、濡养脏腑等生理功能及先天与后天来源等方面存在诸多相似性,尤其是先天之精与干细胞之间可能存在着理论同一性的关系。视网膜变性的中医病机归结于肾虚精亏,目窍失养,治宜补肾益精为法。间充质干细胞属于干细胞的一类,补肾益精法对骨髓来源间充质干细胞的迁移、归巢、分化及旁分泌有明显的促进作用。本文以此为切入点,探讨补肾益精法在视网膜变性治疗中的潜在机理,为今后开展相关研究提供新的思路及理论依据。

关键词：肾精干细胞补肾益精法视网膜变性

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视网膜变性疾病的动物模型和治疗研究进展

中华眼底病杂志 2000年第2期16卷 130-132页

作者：费一坚 Dept.Ophthalmology&VisualScience SchoolofMedicineYaleUniversityBML412330CedarSt.NewHavenCT06520

1 视网膜变性疾病的动物模型1.1 自发视网膜变性动物模型视网膜细胞的分化和发育的基本机制及视觉传导的光电转化反应从无脊椎动物到脊椎动物都很相似,所涉及的基因和蛋白在不同种类的动物,低到果蝇高到人类,大多高度保守.

关键词：视网膜变性动物模型治疗

活血益气明目胶囊对视网膜变性性疾病的防治作用

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中药材 2009年第12期32卷 1874-1877页

作者：王延东唐细兰朱晓波唐仕波中山大学中山眼科中心广东广州510060

目的:探讨活血益气明目胶囊对视网膜变性性疾病的防治作用。方法:SD大鼠60只,随机分为阴性对照组、光化学损伤模型组、活血益气明目胶囊组。视网膜变性动物模型采用光化学损伤模型,光照后分别给予等量生理盐水或活血益气明目胶囊灌胃,1... 详细信息

目的:探讨活血益气明目胶囊对视网膜变性性疾病的防治作用。方法:SD大鼠60只,随机分为阴性对照组、光化学损伤模型组、活血益气明目胶囊组。视网膜变性动物模型采用光化学损伤模型,光照后分别给予等量生理盐水或活血益气明目胶囊灌胃,14 d后,观察视网膜电图的改变,检测视网膜组织中超氧化物歧化酶(SOD)的活性内丙二醛(MDA)的含量,并进行视网膜透视电子显微镜和光学显微镜的组织学观察。结果:治疗后14 d,活血益气明目胶囊对实验大鼠光化学损伤后ERG a波及b波振幅的降低均有提高作用,活血益气明目胶囊组动物视网膜中SOD的活性显著高于光化学损伤模型组(P视网膜透视电子显微镜和光学显微镜的组织学观察显示,活血益气明目胶囊组动物的病理组织学损害较光化学损伤模型组明显减轻。结论:活血益气明目胶囊是一种治疗视网膜变性性疾病的有效中药复方制剂。

关键词：活血益气明目胶囊视网膜变性光化学损伤

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视网膜变性疾病基因治疗的研究进展

中华眼底病杂志 1999年第4期15卷 268-270页

作者：邱观婷唐仕波中山医科大学中山眼科中心广州510060

分子生物学的进展为基因治疗视网膜变性疾病开拓了良好的应用前景，但目的基因的有效转染和长期表达等问题亟待解决，对有丝分裂后的视网膜感光细胞，解决这一问题就显得更为迫切。

关键词：视网膜变性基因治疗感光细胞神经前体细胞

rd小鼠遗传性视网膜变性中内质网应激蛋白的激活

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中华眼科杂志 2008年第9期44卷 807-812页

作者：吴乐萌曹安民朱秀安郭秀娟杨丽萍北京大学第三医院北京大学眼科中心 100083

目的探讨rd小鼠遗传性视网膜变性光感受器细胞变性凋亡中内质网应激反应蛋白的表达变化。方法实验研究。取出生后8、10、12、14、24d的rd小鼠和同年龄段的正常对照C3B小鼠。免疫印迹法检验视网膜中GRP78／BiP、半胱天冬酶-12酶原（proca... 详细信息

目的探讨rd小鼠遗传性视网膜变性光感受器细胞变性凋亡中内质网应激反应蛋白的表达变化。方法实验研究。取出生后8、10、12、14、24d的rd小鼠和同年龄段的正常对照C3B小鼠。免疫印迹法检验视网膜中GRP78／BiP、半胱天冬酶-12酶原（procaspase-12）和活性caspase-12、p-PERK、p-eIF2a蛋白表达变化。免疫荧光染色共聚焦显微镜观测GRP78／BiP、caspase-12、p-PERK和p-eIF2a的表达部位及表达量的变化。用SPSS单因素方差分析对数据进行统计学分析，以P〈0．01为差异有统计学意义。结果伴随rd小鼠遗传性视网膜变性过程免疫印迹结果显示GRP78／Bip、半胱天冬酶-12酶原和活性caspase-12、p-PERK、P—eIF2a蛋白的表达上调，与正常对照组之间的差异具有统计学意义（F=65．82，55．76，152．29，50．54，20．91；P〈0．05）；免疫荧光染色结果显示GRP78／Bip、caspase-12、p-PERK和p-eIF2a主要表达于视网膜光感受器细胞的内节和光感受器细胞核中。结论在rd小鼠遗传性视网膜变性光感受器细胞变性凋亡中，内质网应激反应蛋白的激活对于光感受器细胞的凋亡具有重要作用。应用内质网应激反应调节剂可能对此类疾病起到有效治疗作用。

关键词：视网膜变性细胞凋亡内质网热休克蛋白质类小鼠

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多潜能干细胞在视网膜变性疾病中的研究现状

中华眼科杂志 2012年第4期48卷 374-378页

作者：朱佳丽郑钦象李文生温州医学院附属眼视光医院 325027

视网膜变性疾病是一组由视网膜光感受器细胞变性、凋亡所致的严重致盲性眼病，至今仍无彻底的根治方法。多潜能干细胞是一种通过将体细胞重编程为类似胚胎干细胞的多潜能细胞，具有无限增殖、多向分化潜能和记忆能力等特点。目前有不少... 详细信息

视网膜变性疾病是一组由视网膜光感受器细胞变性、凋亡所致的严重致盲性眼病，至今仍无彻底的根治方法。多潜能干细胞是一种通过将体细胞重编程为类似胚胎干细胞的多潜能细胞，具有无限增殖、多向分化潜能和记忆能力等特点。目前有不少研究者将多潜能干细胞诱导分化为视网膜细胞，并应用于视网膜疾病的细胞移植治疗、发病机制研究及药物毒性评价等方面，这将为视网膜变性疾病的治疗提供新的研究思路和方法。

关键词：视网膜变性多潜能干细胞细胞移植药物评价