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TGF-β1对高眼压大鼠视网膜神经节细胞Bcl-2蛋白表达的影响

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TGF-β1对高眼压大鼠视网膜神经节细胞Bcl-2蛋白表达的影响

作者：陶永健中国医科大学

学位级别：硕士

目的通过检测高眼压状态下和高眼压经TGF-β1干预状态下的大鼠视网膜神经节细胞抗凋亡基因Bcl-2的表达,探讨TGF-β1对大鼠视网膜神经节细胞抗凋亡基因Bcl-2的表达的影响。方法对54只108眼大鼠应用免疫组化S P法检测正常眼压组6只12眼、... 详细信息

目的通过检测高眼压状态下和高眼压经TGF-β1干预状态下的大鼠视网膜神经节细胞抗凋亡基因Bcl-2的表达,探讨TGF-β1对大鼠视网膜神经节细胞抗凋亡基因Bcl-2的表达的影响。方法对54只108眼大鼠应用免疫组化S P法检测正常眼压组6只12眼、普通高眼压组24只48眼、TGF-β1干预高眼压组24只48眼中的Bcl-2的表达情况,其中普通高眼压组、TGF-β1干预高眼压组分别于眼压恢复后4h、12h、24h、48h各6只12眼进行Bcl-2表达的检测。结果1、Bcl-2蛋白在正常眼压组、普通高眼压组、TGF-β1干预高眼压组的阳性表达率分别为8.3%(1/12)、41.7%(20/48)、79.2%(38/48)。正常眼压组、普通高眼压组、TGF-β1干预高眼压组之间两两比较均有显著差异,有统计学意义(P＜0.05)。2、Bcl-2蛋白在普通高眼压组眼压恢复后4h、12h、24h、48h的阳性表达率逐渐增强,呈时间依赖性关系。24h时达到高峰,持续维持至48h。4h、12h组和24h、48h组Bcl-2蛋白的表达有显著差异,有统计学意义(P＜0.05)。3、TGF-β1干预高眼压组眼压恢复后4h、12h、24h、48h的阳性表达率逐渐增强,呈时间依赖性关系。24h时达到高峰,持续维持至48h。4h、12h组和24h、48h组Bcl-2蛋白的表达有显著差异,有统计学意义(P＜0.05)。结论TGF-β1干预状态下的大鼠视网膜神经节细胞抗凋亡基因Bcl-2的表达明显增强,TGF-β1可以通过增加抗凋亡蛋白Bcl-2表达,起神经细胞保护作用,为临床青光眼的神经保护提供有效的治疗方法和途径。

关键词：青光眼 TGF-β1 Bcl-2 视神经保护

中医综合疗法防治青光眼视神经损害的临床观察

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中医综合疗法防治青光眼视神经损害的临床观察

作者：胡瑛中国中医科学院

学位级别：硕士

目的：通过回顾性病例总结,观察探讨中医综合疗法对眼压控制后的青光眼的视神经保护作用,分析中医证型规律。方法：以中国中医科学院眼科医院1997年-2010年门诊及住院的原发性开角型青光眼及原发性慢性闭角型青光眼患者为... 详细信息

目的：通过回顾性病例总结,观察探讨中医综合疗法对眼压控制后的青光眼的视神经保护作用,分析中医证型规律。方法：以中国中医科学院眼科医院1997年-2010年门诊及住院的原发性开角型青光眼及原发性慢性闭角型青光眼患者为研究对象,总结病例共83例（164眼）,其中中药治疗观察组病例49例（97眼）。对照组病例34例（67眼）。对比中药治疗观察组与对照组治疗前后视力及视野的改变,总结中药治疗观察组的证型分类及各证型之间治疗前后视力及视野的改变。结果： 1.视野变化。中药治疗观察组中好转18眼,稳定75眼,恶化4眼。对照组好转3眼,稳定51眼,恶化13眼。2组差异具有显著性意义（P＜0.01）。观察组中肝肾不足病例29例57眼,好转10眼,稳定44眼,恶化3眼,气虚血瘀病例15例30眼,好转6眼,稳定23眼,恶化1眼,肝郁气滞病例5例10眼,好转2眼,稳定8眼,恶化0眼。 2.视力变化：中药治疗观察组中视力提高≥2行10眼,视力下降≥2行3眼,介于其间84眼。对照组视力提高≥2行6眼,视力下降≥2行6眼,介于其间55眼。2组差异无统计学意义（P＞0.05）。观察组中肝肾不足病例29例57眼,好转7眼,稳定49眼,恶化1眼,气虚血瘀病例15例30眼,好转3眼,稳定27眼,恶化0眼,肝郁气滞病例5例10眼,好转0眼,稳定8眼,恶化2眼。结论：中医辨证治疗对眼压控制的青光眼患者的视野扩大有显著意义,具有保护视神经的功能。

关键词：青光眼视神经保护中医治疗

疏肝通窍法对青光眼视神经损害大鼠视网膜神经节细胞凋亡及视网膜、视神经超微结构的影响

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中华眼视光学与视觉科学杂志 2018年第8期20卷 461-468页

作者：樊晓瑞孙河庞国龙黑龙江中医药大学哈尔滨150040 黑龙江中医药大学附属第一医院眼科哈尔滨150040 山东省泰安市中心医院眼科 271000

目的:通过观察视网膜神经节细胞(RGCs)计数和视网膜、视神经超微结构及形态学变化,研究疏肝通窍法保护高眼压损害的视神经的作用机制,为开发保护青光眼视神经的有效中药方剂提供参考。方法:实验研究。以SD大鼠为实验动物,右眼前房注射... 详细信息

目的:通过观察视网膜神经节细胞(RGCs)计数和视网膜、视神经超微结构及形态学变化,研究疏肝通窍法保护高眼压损害的视神经的作用机制,为开发保护青光眼视神经的有效中药方剂提供参考。方法:实验研究。以SD大鼠为实验动物,右眼前房注射复方卡波姆溶液建立慢性高眼压模型(90只)。将不同时间窗(1周、2周、3周)的慢性高眼压大鼠模型分别分为模型组(5只)、阴性对照组(5只)、阳性对照组(5只)、低剂量通窍明目4号治疗组(低剂量治疗组)(10gkg-1d-1,5只)、中剂量治疗组(20gkg-1d-1,5只)和高剂量治疗组(40gkg-1d-1,5只),以具有疏肝通窍作用的通窍明目4号灌胃为干预手段,运用CMIAS系列数码医学图像分析系统观察RGCs计数,电镜观察视网膜、视神经超微结构,采用one-wayANOVA法和LSD法进行数据分析。结果:①RGCs计数:随着高眼压持续的时间延长,RGCs计数逐渐减少(F=87.67、29.69、33.38、38.03、33.67、23.36,P视神经轴突排列紊乱,密度降低,微丝溶解,空泡样变,细胞器肿胀破坏,髓鞘变性,各治疗组视神经髓鞘的水肿程度减轻,髓索的变性有所修复,线粒体的水肿程度也减轻。结论:通窍明目4号可以改善高眼压大鼠模型RGCs生存的微环境,保护未受损的细胞,修复轻度受损的RGCs,延缓或阻止部分受损细胞的下行性改变,减少高眼压大鼠模型RGCs的凋亡。疏肝通窍法对青光眼视神经损害具有保护作用。

关键词：青光眼视神经保护疏肝通窍法视网膜神经节细胞超微结构

补肾活血中药对大鼠慢性高眼压模型外侧膝状体脑源性神经营养因子表达的影响

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眼科新进展 2012年第10期32卷 918-921页

作者：李翔谢钊郭红建谢学军路雪婧王毅王超杨东梅王桃成都中医药大学附属医院眼科四川省成都市610072

目的观察补肾活血中药对大鼠慢性高眼压(elevated intraocular pressure,EIOP)模型外侧膝状体(lateral geniculate nu-cleus,LGN)脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophin factor,BDNF)的干预作用,探讨其作用机理。方法采用烙闭上巩膜静脉法,烙闭SD大鼠3支上巩膜静脉,建立大鼠慢性EIOP模型,将30只(30眼)大鼠随机分为空白组、模型组、给药组,每组各10只。连续灌胃8周,并于8周末处死大鼠,观察补肾活血法对EIOP大鼠眼压及BDNF表达的影响。结果造模后大鼠眼压均较造模前明显升高(均为P<0.01),在造模后8周眼压仍为造模前的2～3倍。造模后,模型组造模后即刻、造模后给药组8周眼压分别为(28.1400±7.3919)mmHg(1kPa=7.5mmHg)、(27.5800±6.3129)mmHg,给药组分别为(31.7400±8.3153)mmHg、(25.6400±5.5894)mmHg,与空白组相比,差异均有统计学意义(均为P<0.01)。LGN病理切片半定量分析表明:模型组BNDF表达总面积(168614±10724)μm2、平均光密度(3066±708)、积分光密度(44443±3721),与空白组的总面积(255985±31225)μm2、平均光密度(6070±609)、积分光密度(61174±6226)比较差异均有显著统计学意义(均为P<0.01)。给药组的BDNF表达总面积(211739±28336)μm2、积分光密度(55793±7608),与模型组比较差异均有显著统计学意义(均为P<0.01);给药组BDNF表达总面积与空白组比较差异有显著统计学意义(P<0.01)。结论补肾活血中药有助于增强EIOP大鼠LGN的BDNF表达。

关键词：青光眼补肾活血法视神经保护大鼠慢性高眼压模型外侧膝状体脑源性神经营养因子

补肾活血中药对大鼠慢性高眼压模型外侧膝状体病理改变的影响

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眼科新进展 2012年第1期32卷 20-23页

作者：李翔谢钊郭红建谢学军路雪婧王毅王超成都中医药大学附属医院眼科四川省成都市610072

目的观察补肾活血中药对大鼠慢性高眼压(elevated intraocular pressure,EIOP)模型外侧膝状体损伤的干预作用,探讨其作用机理。方法采用烙闭上巩膜静脉法建立大鼠慢性EIOP模型,随机分为3组:空白组、模型组、给药组,观察补肾活血中药对E... 详细信息

目的观察补肾活血中药对大鼠慢性高眼压(elevated intraocular pressure,EIOP)模型外侧膝状体损伤的干预作用,探讨其作用机理。方法采用烙闭上巩膜静脉法建立大鼠慢性EIOP模型,随机分为3组:空白组、模型组、给药组,观察补肾活血中药对EIOP大鼠眼压、外侧膝状体(lateral geniculate nucleus,LGN)病理形态学变化的影响。结果本实验采用的烙闭上巩膜静脉的造模方法使大鼠眼压明显升高,与造模前比较差异有显著统计学意义(P神经元细胞密度(51.14±10.52)μm-2、神经元剖面积密度(6.57±1.59)μm-2、有髓纤维密度(0.3556±0.1019)μm-2、Nissl小体积分光密度31826±3796,与空白组比较差异均有统计学意义(P神经元细胞密度(54.27±12.70)μm-2与空白组(60.95±13.35)μm-2比较差异有显著统计学意义(P<0.01),给药组有髓纤维密度(0.5611±0.1385)μm-2与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论补肾活血中药有助于EIOP大鼠LGN损伤的修复。

关键词：青光眼补肾活血中药视神经保护大鼠慢性高眼压模型外侧膝状体

左沙托烷眼用凝胶剂的制备、初步药效学-药动学研究及其机制探讨

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左沙托烷眼用凝胶剂的制备、初步药效学-药动学研究及其机制探讨

作者：于平上海交通大学

学位级别：硕士

青光眼是由于眼压升高引起的进行性视神经退行性疾病,是第二位的致盲性眼疾。其发病在全球及中国均呈增长趋势,是严重危害健康的多发病和常见病。开发具有降低眼内压同时又具有视神经保护作用的多靶点抗青光眼作用的新药,符合青光眼病... 详细信息

青光眼是由于眼压升高引起的进行性视神经退行性疾病,是第二位的致盲性眼疾。其发病在全球及中国均呈增长趋势,是严重危害健康的多发病和常见病。开发具有降低眼内压同时又具有视神经保护作用的多靶点抗青光眼作用的新药,符合青光眼病理特征和国际化新药开发趋势。左沙托烷是以丁公藤碱II为先导化合物定向合成并拆分而成的自主原创手性胆碱M受体激动剂,研究表明其具有良好的降低眼内压作用,为治疗青光眼的候选药。前期研究发现,左沙托烷的滴眼溶液制剂存在着药效持续时间短,生物利用度低等问题。近年来,凝胶制剂成为局部外用制剂的研究热点。凝胶剂具有吸收速度快、生物利用度高、良好的生物相容性、质地均匀、易于涂展和洗除并可制作缓控释制剂等特点。为此,本课题对眼用原位凝胶制剂进行了探讨。通过配制不同比例的泊洛沙姆188和泊洛沙姆407,筛选出符合要求的温度敏感型的左沙托烷眼用原位凝胶制剂并检测了其缩瞳和降眼压作用。研究结果表明,温度敏感型的左沙托烷原位凝胶制剂,在室温或冷藏等体外环境中能够保持流动性较好的溶液状态。而滴入眼内,随着眼球局部生理温度的升高,左沙托烷原位凝胶制剂发生相变而形成半固体凝胶状。其初步药效学评价的实验结果表明,与左沙托烷滴眼溶液制剂相比,左沙托烷温度敏感型原位凝胶制剂能够显著增强其缩瞳和降眼内压作用并显著地延长作用时间。表明左沙托烷温度敏感型原位凝胶制剂为理想的眼用制剂具有潜在应用价值。在左沙托烷原位凝胶制剂的药动学研究中,采用高效液相色谱质谱分析技术(High performance liquid chromatography mass spectrometry,HPLC-MS/MS),检测新西兰大白兔房水及耳缘静脉血中左沙托烷药物含量。发现,左沙托烷原位凝胶制剂在房水中的药物浓度及有效浓度的持续时间均显著高于其溶液型滴眼制剂。而在外周静脉血中未检测出左沙托烷药物。结果表明,左沙托烷温度敏感型原位凝胶制剂能显著提高眼球局部的药物浓度,延长其在房水中的滞留时间长,且全身吸收极少。虽然上述研究显示左沙托烷具有良好的缩瞳和降低眼内压作用,但是能否如同其他胆碱受体激动剂一样,对神经损伤尤其是视神经损伤具有保护作用?为此,在氯化钴(Cobalt Chloride,CoCl)诱导PC12和原代视网膜神经细胞低氧损伤模型及SD(Sprague Dawley)大鼠视网膜缺血再灌注(ischemia-reperfusion,I/R)损伤模型基础上分别进行探讨。实验表明,低氧和I/R能够引起神经细胞活性的降低及缺失、神经细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、caspase-3的异常表达及β淀粉样蛋白(β-Amyloid Protein,Aβ)生成增多等视网膜神经损伤。左沙托烷能够显著地改善由氯化钴及I/R引起的视网膜神经损伤,而此作用可被选择性胆碱M1受体抑制剂所阻断,表明左沙托烷可通过激活胆碱M1受体实现其对视网膜神经细胞的保护作用。

关键词：左沙托烷原位凝胶剂缩瞳眼内压视神经保护

中药覆盆子对体外培养视网膜神经节细胞保护作用的研究

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中药覆盆子对体外培养视网膜神经节细胞保护作用的研究

作者：李亘辽宁中医药大学

学位级别：硕士

目的:探讨中药覆盆子粗提物对视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells RGCs)的保护作用,研究其在过氧化氢(H202)诱导的细胞凋亡过程中对凋亡因子Bcl-2和Bax的蛋白表达情况,对覆盆子粗提物的有效组分进行筛选,为中药覆盆子进一步开发... 详细信息

目的:探讨中药覆盆子粗提物对视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells RGCs)的保护作用,研究其在过氧化氢(H202)诱导的细胞凋亡过程中对凋亡因子Bcl-2和Bax的蛋白表达情况,对覆盆子粗提物的有效组分进行筛选,为中药覆盆子进一步开发利用提供理论依据。材料与方法:主要仪器与试剂:SW-CJ-1F洁净工作台(中国江苏苏净集团苏州安泰空气技术有限公司),Forma 3111 CO2培养箱、MK3酶标定量测试仪(赛默飞世尔科技中国有限公司),倒置相差荧光显微(日本尼康公司),高速冷冻离心机(美国sigma公司),培养皿、96孔培养板(美国Life Technologies公司),-80℃超低温冰箱(美国Thermo公司),视网膜神经节细胞RGC-5细胞株(ATCC),覆盆子乙醇粗体物及不同乙醇浓度提取物组分覆盆子-20、覆盆子-40、覆盆子-70(沈阳药科大学),Bax抗体、Bcl-2抗体(美国Santa Cruz Biotechnology公司),辣根酶标记山羊抗小鼠Ig G(北京中杉金桥生物技术有限公司),高糖DMEM液体培养基、PBS、胰酶(赛默飞世尔生物化学制品北京有限公司),胎牛血清、MTS试剂盒、双抗(美国Life Technologies公司),体积分数为30%的过氧化氢溶液(国药集团化学试剂有限公司)。方法:体外培养大鼠视网膜神经节细胞株RGC-5,应用不同浓度的(100、50、25、15、5μmol/L)HO与RGC-5培养24h,用MTS比色法在酶标仪上检测,选择波长为492nm检测各孔的吸光值,计算出各组细胞存活率。根据相应量-效曲线确定HO模型的最佳作用浓度。将RGC-5分为正常对照性组,覆盆子粗提物浓度组(100、50、25、10、1、0.1ug/ml)培养24h后,采用MTS比色法在酶标仪上检测其吸光值,分析不同浓度的覆盆子粗提物对RGC-5的影响。将RGC-5分为正常对照组性组,HO组模型组,HO+覆盆子粗提物浓度组(100、50、25、10、1、0.1ug/ml),HO造模24小时后,给药24小时,采用MTS比色法检测其吸光值,分析不同浓度的覆盆子粗提物对HO诱导下氧化应激损伤RGC-5细胞的影响,同时在倒置相差显微镜下进行一般形态学观察。并采用Western blot方法检测不同浓度覆盆子粗提物(25、10、1、0.1ug/ml)在HO诱导的氧化应激损伤下,RGC-5调控凋亡相关基因Bcl-2和Bax的蛋白表达情况。将不同浓度乙醇提取物的组分:覆盆子-20(1.5、1.25、1、0.5、0.25、0.1ug/ml)、覆盆子-50(50、5、1、0.5、0.25、0.1ug/ml)、覆盆子-70(50、25、10、1、0.1、0.01ug/ml),重复上述MTS实验方法,筛选其中有效组分,确定有效组分中增殖和抗凋亡的最佳有效浓度。结果:1.HO损伤模型可以降低RGC-5细胞的存活率,并且HO对RGC-5的抑制作用会随着浓度的升高而加强。浓度为25μmol/L的HO作用于RGC-5细胞24小时,其存活率降为50.7%(P保护作用效果最佳。4.Western blot结果显示,与正常对照组相比较,HO模型组的Bax蛋白的表达明显上调,而Bcl-2蛋白的表达下降(P<0.01)。与模型组相比,浓度为1ug/ml和10ug/ml的覆盆子粗提物组明显抑制了Bax蛋白上调,使Bcl-2蛋白表达增高(P<0.05)。5.覆盆子粗体物有效组分的筛选:浓度为0.25ug/ml、0.5ug/ml的覆盆子-20药物组对RGC-5细胞有增殖作用,存活率分别为:111.93%、116.00%(P<0.05);浓度为0.25ug/ml、0.5ug/ml、1ug/ml、1.25ug/ml的药物浓度有显著性的抗凋亡作用,存活率分别为:70.93%、72.76%、66.98%、66.57%(P<0.05)。覆盆子-40各药物浓度组对RGC-5细胞的增殖作用没有显著性差异,同样其抗HO诱导的细胞抗凋亡作用也无显著性差异。覆盆子-70对RGC-5细胞的增殖作用不明显,但随着药物浓度的增加,其对细胞的毒性作用越明显。覆盆子-70有抵抗氧化损伤的

关键词：视神经保护覆盆子视网膜神经节细胞细胞凋亡细胞增殖

通窍明目Ⅳ号对闭角型青光眼性视神经萎缩重度视野缺损疗效的临床研究

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通窍明目Ⅳ号对闭角型青光眼性视神经萎缩重度视野缺损疗效的临床...

作者：刘娇黑龙江中医药大学

学位级别：硕士

目的：观察通窍明目Ⅳ号对闭角型青光眼视神经萎缩重度视野缺损阶段的治疗效果,评价通窍明目Ⅳ号治疗重度青光眼引起的视神经萎缩的疗效。方法：按照Elizabeth Hodapp1993年制定的青光眼视野缺损准则,采集重度视野缺损闭角... 详细信息

目的：观察通窍明目Ⅳ号对闭角型青光眼视神经萎缩重度视野缺损阶段的治疗效果,评价通窍明目Ⅳ号治疗重度青光眼引起的视神经萎缩的疗效。方法：按照Elizabeth Hodapp1993年制定的青光眼视野缺损准则,采集重度视野缺损闭角型青光眼视神经萎缩40例45眼的病例,手术或药物控制眼压在11～17mmHg范围内,按就诊先后顺序采用非盲、随机对照的研究方法分为治疗组与对照组,治疗组服用通窍明目Ⅳ号,对照组服用维生素B1,B6,B12,治疗30天,就视力、视野、视诱发电位进行治疗前后的比较及两组间的比较,进行统计学处理。结果： 1.治疗组治疗前后视力,视野,视诱发电位均有显著差异,有统计学意（P＜0.05）,对照组治疗前后视力,视野,视诱发电位比较有差异,无统计学意义（P＞0.05）。 2.两组治疗后视力,视野,视诱发电位比较均有显著差异,有统计学意义（P＜0.05）。治疗组视力及视野有较明显改善,视诱发电位潜伏期缩短;对照组各项指标无改善或有改善,总体疗效治疗组优于对照组。结论：中药复方通窍明目Ⅳ号治疗闭角型青光眼视神经萎缩重度视野缺损,能够提高视力,改善视野,缩短视诱发电位P100的潜伏时间,可能是使未完全凋亡的神经节细胞恢复部分功能,遏制其凋亡。提示闭角型青光眼视神经萎缩的严重阶段,仍应积极治疗;通窍明目Ⅳ号治疗重度青光眼性视神经萎缩有效。

关键词：通窍明目Ⅳ号闭角型青光眼视神经保护视野视诱发电位

青光眼性视神经萎缩中西医结合治疗规范的临床研究

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青光眼性视神经萎缩中西医结合治疗规范的临床研究

作者：王弘媛黑龙江中医药大学

学位级别：硕士

目的：观察青光眼性视神经萎缩中西医结合治疗规范的临床疗效。方法：对65例(120只眼)青光眼视神经萎缩患者随机分为治疗组和对照组两组，治疗组给予通窍明目汤，针刺，中药三七制剂和神经营养剂，对照组给予神经营养剂。在视力、视野... 详细信息

目的：观察青光眼性视神经萎缩中西医结合治疗规范的临床疗效。方法：对65例(120只眼)青光眼视神经萎缩患者随机分为治疗组和对照组两组，治疗组给予通窍明目汤，针刺，中药三七制剂和神经营养剂，对照组给予神经营养剂。在视力、视野、视觉诱发电位方面进行治疗前后的比较及两组间的比较。结果：(1)两组均可提高视力，但治疗组疗效显著优于对照组(P＜0.05)。(2)在视野检查中，治疗后治疗组的平均光敏度增加(P＜0.05)，平均缺损减少(P＜0.05)，治疗组在改善视野方面优于对照组。(3)视觉诱发电位结果分析中，治疗组前后P-VEP结果显示，P100波的振幅增加(P＜0.05)，潜伏期缩短(P＜0.05);N135波的振幅增加(P＜0.05);治疗后与对照组比较有显著性差异，说明治疗组在改善视神经生理功能上优于对照组。结论：采用通窍明目汤，针刺，中药三七制剂和神经营养剂治疗的中西医结合治疗规范对青光眼性视神经萎缩具有较好的临床疗效，显著优于单纯神经营养剂治疗，可以干预视神经萎缩进程，对视神经有保护作用。

关键词：青光眼性视神经萎缩中西医结合治疗规范视神经保护