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超声波-酶协同提取西藏猫乳总黄酮工艺及抗氧化活性

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北方园艺 2023年第14期 86-96页

作者：次仁德吉岗尖俄日郑瑞范成德黄山西藏藏医药大学藏医系西藏拉萨850000 青岛科技大学化工学院山东青岛266042

以西藏猫乳茎枝为试材,采用超声波-酶协同法提取其中的总黄酮,通过单因素试验与响应面设计法对提取工艺进行优化,得到最佳工艺参数。在该基础上,将超声波-酶协同法与超声波法、酶解法进行比较,考察其抗氧化活性,以期为西藏猫乳的进一步... 详细信息

以西藏猫乳茎枝为试材,采用超声波-酶协同法提取其中的总黄酮,通过单因素试验与响应面设计法对提取工艺进行优化,得到最佳工艺参数。在该基础上,将超声波-酶协同法与超声波法、酶解法进行比较,考察其抗氧化活性,以期为西藏猫乳的进一步开发利用提供参考依据。结果表明:超声波-酶协同提取西藏猫乳总黄酮最优条件为纤维素酶浓度0.31 mg·mL^(-1)、乙醇浓度53%、酶解pH 5.0、酶解时间2 h、酶解温度50℃、超声温度50℃、液料比40∶1 mL·g^(-1)、超声时间30 min,在该条件下,总黄酮提取量为17.01 mg·g^(-1),提取工艺稳定可靠。与超声波法和酶解法比较,超声波-酶协同提取总黄酮含量较高,且具有更好的DPPH·和ABTS+·清除能力。

关键词：西藏猫乳总黄酮响应面优化超声波-酶协同法抗氧化

响应面法优化西藏猫乳总黄酮提取工艺及其抗氧化活性研究

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中华中医药杂志 2019年第12期34卷 5942-5946页

作者：周忠会周子琪赵丽萍索朗欧珠西藏职业技术学院农业科学技术学院拉萨850025

目的:采用响应面法优化西藏猫乳总黄酮提取工艺,并对其抗氧化能力进行考察。方法:利用超声法提取西藏猫乳总黄酮;选取提取温度、提取时间、乙醇浓度、料液比进行单因素实验,在单因素实验基础上,运用Box-Behnken试验设计,以总黄酮提取率... 详细信息

目的:采用响应面法优化西藏猫乳总黄酮提取工艺,并对其抗氧化能力进行考察。方法:利用超声法提取西藏猫乳总黄酮;选取提取温度、提取时间、乙醇浓度、料液比进行单因素实验,在单因素实验基础上,运用Box-Behnken试验设计,以总黄酮提取率为响应值,优化提取工艺;应用DPPH、ABTS及超氧自由基清除等试验,对超声法和回流法所得产物抗氧化能力进行比较。结果:西藏猫乳总黄酮的最优提取工艺参数:料液比为1∶48.42mL/g,提取时间50.00min,乙醇浓度53.33%,温度54.66℃,总黄酮提取率为8.16%。西藏猫乳总黄酮具有良好的抗氧化作用,且超声提取法抗氧化能力优于回流提取法。结论:超声提取法可充分提取西藏猫乳总黄酮,且提取产物具有良好的抗氧化作用。

关键词：西藏猫乳总黄酮响应面法超声提取回流提取抗氧化

藏药西藏猫乳抗类风湿性关节炎的药效物质基础研究

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藏药西藏猫乳抗类风湿性关节炎的药效物质基础研究

作者：李秋月成都中医药大学

学位级别：硕士

西藏猫乳(?????????)为鼠李科植物西藏猫乳Rhamnella gilgitica *** Melch.的干燥心材,又名“松生等”、“森等”,是藏族习用药材,主要分布于西藏察隅、芒康,云南西北部和四川西南部。《晶珠本草》记载:“松生等味微苦,性凉、燥、湿,活... 详细信息

西藏猫乳(?????????)为鼠李科植物西藏猫乳Rhamnella gilgitica *** Melch.的干燥心材,又名“松生等”、“森等”,是藏族习用药材,主要分布于西藏察隅、芒康,云南西北部和四川西南部。《晶珠本草》记载:“松生等味微苦,性凉、燥、湿,活血,干黄水,能治麻风”。现收载于《中华人民共和国卫生部药品标准·藏药》(第一册)。现代研究表明,西藏猫乳抗类风湿性关节炎疗效显著,但其药效物质基础尚不明确,限制了该药材进一步临床开发研究。类风湿性关节炎(Rheumatoid Arthritis,RA)是一种常见的系统性自身免疫疾病,严重影响人民健康。藏医认为RA与机体关节腔中“黄水”积聚过甚有关,主要通过调节“黄水”使机体“三因”达到平衡来治疗RA。故本文以传统藏医药理论为指导,以活性为导向,探讨藏药藏药西藏猫乳抗炎活性,并对其活性部位进行抗RA的药效学评价及化学成分研究,预测其抗RA有效成分,进一步阐明西藏猫乳抗RA药效物质基础,为临床应用和制剂开发提供科学依据。目的1.探讨西藏猫乳的石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、水4个萃取部位抗炎活性。2.评价西藏猫乳乙酸乙酯部位对RA模型大鼠的药效作用。3.阐明西藏猫乳乙酸乙酯部位的化学成分组成。4.预测西藏猫乳抗RA的活性成分。方法1.采用MTT法和Griess法探讨西藏猫乳石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、水部位对RAW264.7细胞的抗炎作用。2.采用牛II型胶原蛋白与完全弗氏佐剂建立胶原诱导性关节炎大鼠模型(Collagen-inducedarthritis,CIA),以西藏猫乳乙酸乙酯提取物(9.71,19.43,38.85 mg/kg)灌胃干预23天,考察大鼠体重、足趾肿胀容积、关节炎指数、免疫器官指数、膝关节组织病理变化及血清细胞因子表达,评价西藏猫乳乙酸乙酯部位对CIA模型大鼠的药效作用。3.采用UPLC-Q-TOF-MS技术鉴定西藏猫乳乙酸乙酯部位的化学成分,经UNIFY软件等方式进行数据处理,结合文献报道对质谱碎片信息进行推测,实现对西藏猫乳乙酸乙酯部位化学成分的快速鉴定。4.运用正相硅胶、Sephadex LH-20、RP-18、半制备型高效液相色谱等分离技术对西藏猫乳乙酸乙酯部位进行分离纯化,并结合核磁共振、质谱等波谱学方法对单体化合物进行结构鉴定。5.采用网络药理学技术,预测西藏猫乳抗RA的活性成分,分子功能,生物学过程及通路,构建“化学成分-靶点-通路”网络,并结合文献分析西藏猫乳抗RA的潜在活性成分及作用靶标。6.采用分子对接技术,预测网络中的9个关键活性成分与9个关键靶标蛋白的相互作用,并结合文献进一步分析验证。结果1.西藏猫乳各提取部位均具有抗炎活性,其中乙酸乙酯和石油醚部位抗炎活性较好,活性强弱顺序为石油醚部位≈乙酸乙酯部位>正丁醇部位>水部位。2.西藏猫乳乙酸乙酯提取物对CIA模型大鼠的体重有恢复作用;能降低大鼠关节炎指数,减轻足肿胀;降低CIA模型大鼠胸腺指数和脾脏指数;明显减轻炎性细胞浸润和滑膜细胞增生;抑制血清中IL-1β、IL-6、IL-17、TNF-α和INF-γ细胞因子表达,增加IL-4和IL-10的表达。3.利用UNIFY软件,结合一级质谱准分子离子、二级质谱碎片离子及化合物裂解规律,与文献进行比较,从西藏猫乳乙酸乙酯部位中共鉴定出37个化合物,包括黄酮类化合物26个,皂苷类化合物6个,酚酸类化合物3个及脂肪酸类化合物2个。4.从西藏猫乳乙酸乙酯部位中分离并鉴定了15个化合物,分别是:对羟基苯甲酸(1),(-)-南烛木树脂酚(2),丁香酸(3),儿茶素(4),(-)-表儿茶素(5),tristin(6),1,2-bis(4-hydroxyphenyl)ethane(7),bis(2-ethylhexyl)phthalate(8),柚皮素(9),山柰酚(10),鼠李柠檬素(11),芹菜素(12),(+)-丁香脂素(13),表丁香脂素(14),(+)-皮树脂醇(15),化合物1,115为首次从该植物中分离得到。5.网络药理学结果发现西藏猫乳19种主要成分可能作用于AR、HSPHSP90AA1、IGF1R、MAPK8、EGFR、SRC、AKT1、PIK3R1、RELA等关键靶点,GO功能富集分析得到GO条目262个(P西藏猫乳抗炎活性部位及化学成分组成,初步阐明了西藏猫乳抗RA药效物质基础,为更有效地评价该药材质量及临床合理利用提供参考

关键词：藏药西藏猫乳类风湿性关节炎 CIA大鼠模型 UPLC-Q-TOF-MS 网络药理学分子对接物质基础

西藏猫乳总黄酮大孔吸附树脂纯化工艺及其抗氧化活性研究

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中国民族民间医药 2021年第1期30卷 41-47,53页

作者：周忠会周子琪索朗欧珠西藏职业技术学院农业科学技术学院西藏拉萨850025

目的:使用大孔吸附树脂分离纯化西藏猫乳总黄酮,并对纯化后的总黄酮进行体外抗氧化活性研究。方法:通过静态吸附实验考察ADS-F8、D101、AB-8等8种大孔吸附树脂对西藏猫乳总黄酮的纯化效果,并研究样液质量浓度、p H值、上样体积对树脂吸... 详细信息

目的:使用大孔吸附树脂分离纯化西藏猫乳总黄酮,并对纯化后的总黄酮进行体外抗氧化活性研究。方法:通过静态吸附实验考察ADS-F8、D101、AB-8等8种大孔吸附树脂对西藏猫乳总黄酮的纯化效果,并研究样液质量浓度、p H值、上样体积对树脂吸附率的影响以及洗脱液浓度、体积对洗脱率的影响。采用DPPH法、ABTS法和FRAP法,评价纯化后西藏猫乳总黄酮的抗氧化活性。结果:采用ADS-F8型树脂对西藏猫乳进行分离纯化,最佳工艺条件为:上样浓度0.6 mg/mL,p H为3.0,体积23 BV,洗脱剂为60%的乙醇,洗脱体积8 BV。所得西藏猫乳总黄酮纯度由17.18%提高至24.67%,精制倍数为1.44。抗氧化实验结果表明,纯化后西藏猫乳总黄酮对ABTS自由基的清除率可以达到99.15%,DPPH自由基清除率也可达到67.84%,体现出良好的自由基清除能力,并对Fe^3+有较好的还原力,FRAP值最高为939.8μmol/L。结论:ADS-F8型树脂可对西藏猫乳总黄酮进行分离纯化,提高总黄酮纯度,纯化后的总黄酮具有较强的抗氧化作用。

关键词：大孔吸附树脂西藏猫乳总黄酮纯化抗氧化

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西藏猫乳活性成分研究

中国药物化学杂志 1996年第2期6卷 114-116,135页

作者：彭军鹏乔艳秋张显志陈鹏军事医学科学院放射医学研究所

首次从西藏猫乳中分离并鉴定了３个化合物，它们是Ｍａｅｓｏｐｓｉｎ（Ⅰ），山奈酚（Ｋａｅｍｐｆｅｒｏｌ，Ⅱ）和右旋肌醇甲醚（Ｐｉｎｉｔｏｌ，Ⅲ）．利用二维核磁对（Ⅰ）和（Ⅲ）的全部氢信号和碳信号进行了确切归属，并由此而... 详细信息

首次从西藏猫乳中分离并鉴定了３个化合物，它们是Ｍａｅｓｏｐｓｉｎ（Ⅰ），山奈酚（Ｋａｅｍｐｆｅｒｏｌ，Ⅱ）和右旋肌醇甲醚（Ｐｉｎｉｔｏｌ，Ⅲ）．利用二维核磁对（Ⅰ）和（Ⅲ）的全部氢信号和碳信号进行了确切归属，并由此而确定了（Ⅲ）的立体构型。化合物（Ⅰ）为其中主要成分。初步筛选结果显示，化合物（Ⅰ）有较强的抗癌促进因子作用和细胞毒作用。

关键词：西藏猫乳藏药中药化学化学成分

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西藏猫乳化学成分研究

中药材 2020年第10期43卷 2445-2447页

作者：李秋月苏锦松王洪玲褚祺祺唐策张艺成都中医药大学民族医药学术传承创新研究中心四川成都611137 成都中医药大学民族医药学院四川成都611137 成都中医药大学中医药创新研究院四川成都611137

目的:研究西藏猫乳Rhamnella gilgitica *** Melch.心材的化学成分。方法:采用正反相硅胶柱层析、Sephadex LH⁃20柱层析、制备型高效液相等色谱分离方法对西藏猫乳的乙酸乙酯部位进行分离纯化,并结合核磁共振、质谱等波谱学方法进行结... 详细信息

目的:研究西藏猫乳Rhamnella gilgitica *** Melch.心材的化学成分。方法:采用正反相硅胶柱层析、Sephadex LH⁃20柱层析、制备型高效液相等色谱分离方法对西藏猫乳的乙酸乙酯部位进行分离纯化,并结合核磁共振、质谱等波谱学方法进行结构鉴定。结果:从西藏猫乳中分离得到9个化合物,分别鉴定为:(-)⁃南烛木树脂酚(1)、儿茶素(2)、(-)⁃表儿茶素(3)、柚皮素(4)、山柰酚(5)、鼠李柠檬素(6)、芹菜素(7)、(+)⁃丁香脂素(8)、(+)⁃皮树脂醇(9)。结论:其中,化合物1~3、6~9为首次从该植物中分离得到。

关键词：西藏猫乳乙酸乙酯部位化学成分黄酮木脂素

西藏猫乳化学成分及抗类风湿性关节炎活性研究

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西藏猫乳化学成分及抗类风湿性关节炎活性研究

作者：裴小娜青岛科技大学

学位级别：硕士

西藏猫乳又名“生等”,为鼠李科猫乳属植物,是一种我国传统的藏药。现有文献记载,西藏猫乳中含有柚皮素、山萘酚、槲皮素、墨沙酮、大黄酚、没食子酸、8-甾醇、混合脂肪酸、混合脂肪酸酯等化合物。其中含有多种黄酮类成分。药理方面,据... 详细信息

西藏猫乳又名“生等”,为鼠李科猫乳属植物,是一种我国传统的藏药。现有文献记载,西藏猫乳中含有柚皮素、山萘酚、槲皮素、墨沙酮、大黄酚、没食子酸、8-甾醇、混合脂肪酸、混合脂肪酸酯等化合物。其中含有多种黄酮类成分。药理方面,据记载其具有祛风湿、抗炎、消肿止痛、降压、敛干黄水等功效,可治疗类风湿性关节炎、麻风病、高山多血症、高血压、黄水疮等疾病,外用消肿、治疮毒等。为系统的研究西藏猫乳中所含的化合物及生物活性,本论文对西藏猫乳进行了提取、分离和结构鉴定,同时对西藏猫乳不同极性提取部分的抗氧化活性、镇痛抗炎活性和抗类风湿性关节炎活性进行了初步探讨。结果如下：1.采用70%的乙醇浸提西藏猫乳干燥木质部,提取液过滤、蒸馏、浓缩得浸膏。将浸膏用热水溶解,然后依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯和正丁醇分别萃取,至萃取层无色。收集合并不同极性萃取层,减压蒸馏,蒸干。采用硅胶色谱法,石油醚：乙酸乙酯=100：1-10：4和二氯甲烷：甲醇=20：1-1：5为洗脱剂,对不同极性萃取物进行洗脱分离,半制备高效液相法对样品作进一步分离。分离得到4种单体化合物。采用NMR等方法对分离得到的西藏猫乳单体化合物进行结构鉴定。这些化合物分别为对羟基苯甲酸乙酯(Ⅰ)、对羟基苯甲醛(Ⅱ)、柚皮素(Ⅲ)和槲皮素(Ⅳ)。其中,对羟基苯甲酸乙酯(Ⅰ)和对羟基苯甲醛(Ⅱ)首次在该植物中发现。2.采用普鲁士蓝法、DPPH法和Fenton法测定西藏猫乳醇提物各极性萃取组分的还原力,·OH自由基的清除能力以及抗氧化的活性。3种抗氧化实验结果表明乙酸乙酯、乙醇和正丁醇部分均具有明显的抗氧化活性。其中用DPPH法测得提取部分的IC50值分别是乙酸乙酯0.0605 mg·ml-1、正丁醇0.0763 mg·mL-1、乙醇0.0833mg·mL-1。结论：萃取物清除率与样品浓度存在明显的剂量-效应关系,当三种提取部分的浓度大于1.0mg·mL-1时,清除效力可达到60%,其还原能力几乎接近甚至超过Vc。其中在大极性萃取层的抗氧化活性和还原力最强。说明西藏猫乳具有良好的抗氧化活性,是优良的天然抗氧化剂。3.采用醋酸扭体法和二甲苯所致的小鼠耳肿胀法测定西藏猫乳各极性提取部分的镇痛抗炎活性。实验结果表明：西藏猫乳乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物和乙醇提取部分均能够抑制醋酸引起的小鼠扭体反应和二甲苯引起的小鼠耳肿胀,其中乙醇提取部分的抗炎镇痛效果略高于乙酸乙酯和正丁醇萃取物组。说明西藏猫乳具有一定的镇痛抗炎活性。4.采用弗氏完全佐剂法建立大鼠类风湿性关节炎模型,研究了不同浓度西藏猫乳乙醇提取物对大鼠类风湿性关节炎病程的影响。通过检测大鼠形态变化、病理切片、脏器指数、白细胞指数和血沉等指标以评价西藏猫乳对类风湿性关节炎的治疗作用。结果表明：西藏猫乳能有效降低关节炎指数、缓解关节红肿等症状。同时,白细胞数和血沉指数也明显低于模型组。说明西藏猫乳提取物对类风湿性关节炎有一定的治疗作用,为开发治疗类风湿性关节炎新药提供理论依据。

关键词：西藏猫乳分离结构鉴定抗氧化镇痛抗炎抗类风湿性关节炎

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高效液相色谱法测定藏药生等中墨沙酮的含量

中国中药杂志 1997年第4期22卷 233-234页

作者：晁若冰张印俊杨培全刘卫建华西医科大学药学院西藏自治区藏医药研究所

用反相高效液相色谱法测定藏药生等心材中墨沙酮的含量。浸泡和超声提取相结合，ＯＤＳ柱，甲醇水（２８∶７２），内含００５ｍｏｌ／Ｌ磷酸二氢钾（ｐＨ４）为流动相，ＵＶ２９０ｎｍ检测。回收率为９８９％。墨沙酮含量为１... 详细信息

用反相高效液相色谱法测定藏药生等心材中墨沙酮的含量。浸泡和超声提取相结合，ＯＤＳ柱，甲醇水（２８∶７２），内含００５ｍｏｌ／Ｌ磷酸二氢钾（ｐＨ４）为流动相，ＵＶ２９０ｎｍ检测。回收率为９８９％。墨沙酮含量为１０２％。

关键词：西藏猫乳墨沙酮高效液相色谱法黄酮

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藏药“生等”的化学成分研究(第2报)

华西药学杂志 1997年第3期12卷 153-155页

作者：潘勤杨培全陈桂红刘卫健华西医科大学药学院华西医科大学西藏自治区藏医药研究所拉萨850000

首次从藏药“生等”，[鼠李科猫乳属植物西藏猫乳（Rhamnellagilgitica）***）]的干燥心材中分离矿鉴定了6个化合物，一个混合脂肪酸酯及一个混合脂肪酸，它们分别是大黄酚（Chrysophanol，I），没食子酸（Gallicacid，Ⅱ）、β-谷甾醇... 详细信息

首次从藏药“生等”，[鼠李科猫乳属植物西藏猫乳（Rhamnellagilgitica）***）]的干燥心材中分离矿鉴定了6个化合物，一个混合脂肪酸酯及一个混合脂肪酸，它们分别是大黄酚（Chrysophanol，I），没食子酸（Gallicacid，Ⅱ）、β-谷甾醇（β-Sitosterol，Ⅲ）．胡萝卜甙（Daucosterol，Ⅳ）、二十四烷酸（V）、十六烷酸（Ⅵ）、十六与十八烷酸甲酯混合物（Ⅶ），二十二～二十六烷酸混合物（Ⅷ）。

关键词：藏药生等西藏猫乳化学成分