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褪黑素受体1a基因多态性与青少年特发性脊柱侧凸相关性研究

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中华外科杂志 2007年第18期45卷 1264-1266页

作者：邱旭升邓亮生杨晓恩郭凯琪李广文秦岭邱勇郑振耀南京大学医学院附属鼓楼医院脊柱外科 210008 香港中文大学病理化学系香港中文大学医学院矫形外科及创伤学系香港中文大学医学院利希慎临床医学研究实验室

目的研究褪黑素受体1a基因(MTNR1a)多态性与青少年特发性脊柱侧凸(AIS)发生发展的关系。方法共纳入226例 AIS 患者及277例正常对照者。记录 AIS 患者组最大 Cobb 角。采用 PCR-RFLP 的方法对 MTNR1a 基因启动子区域多态性位点 rs211988... 详细信息

目的研究褪黑素受体1a基因(MTNR1a)多态性与青少年特发性脊柱侧凸(AIS)发生发展的关系。方法共纳入226例 AIS 患者及277例正常对照者。记录 AIS 患者组最大 Cobb 角。采用 PCR-RFLP 的方法对 MTNR1a 基因启动子区域多态性位点 rs2119882进行基因分型。结果AIS 患者组 MTNR1a 基因多态性位点 rs2119882的基因型及等位基因分布与正常对照组比较没有明显差异。在 AIS 组内,多态性位点 rs2119882不同基因型所对应的最大 Cobb 角没有明显差异。结论MTNR1a 基因 rs2119882位点多态性与 AIS 的发生发展都没有关系。

关键词：脊柱侧凸褪黑素受体1a 基因多态性

小鼠大脑皮质中褪黑素受体1a的表达及与衰老的相关研究

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小鼠大脑皮质中褪黑素受体1A的表达及与衰老的相关研究

作者：李青宇锦州医科大学

学位级别：硕士

目的确定褪黑素受体1a(Melatonin Receptor 1a,Mtnr1a)在不同年龄小鼠大脑皮质内的分布情况,明确表达Mtnr1a的神经细胞类型,研究Mtnr1a与衰老之间的关系,为进一步探究Mtnr1a的功能及对衰老的影响提供理论支持。方法取青年小鼠(3月龄),... 详细信息

目的确定褪黑素受体1a(Melatonin Receptor 1a,Mtnr1a)在不同年龄小鼠大脑皮质内的分布情况,明确表达Mtnr1a的神经细胞类型,研究Mtnr1a与衰老之间的关系,为进一步探究Mtnr1a的功能及对衰老的影响提供理论支持。方法取青年小鼠(3月龄),应用免疫组织化学染色技术,在明视野显微镜下观察Mtnr1a在小鼠大脑皮质中的分布情况;采用不同年龄(3、12月和22月龄)的自然衰老小鼠,应用蛋白质印迹技术,检测不同年龄组小鼠大脑皮质中Mtnr1a的蛋白质水平,明确Mtnr1a在不同月龄组小鼠大脑皮质的表达差异;借助多重免疫荧光染色技术,在共聚焦激光扫描显微镜下确定成年小鼠(3月龄)大脑皮质中表达Mtnr1a的细胞类型。取新生小鼠为材,进行器官型脑切片培养,使用D-半乳糖诱导为体外衰老模型,通过转染Mtnr1a的c DNA或Si RNA调控其表达量,采用蛋白质印迹技术,检测衰老相关蛋白P53和Sirt1、自噬相关蛋白Beclin-1、神经干细胞标志蛋白Nestin以及p-m TOR的水平变化。同时应用Mtnr1a拮抗剂、Mtnr1a激动剂对Mtnr1a表达量调控的结果进行辅助验证。结果Mtnr1a在小鼠大脑皮质的多个区域中均有表达。Mtnr1a在不同年龄小鼠大脑皮质内均有表达,其中3月龄小鼠大脑皮质内Mtnr1a表达量明显高于22月龄。Mtnr1a在小鼠大脑皮质中与神经丝蛋白-重链(Neurofilament-heavy,NFH)、巢蛋白(Nestin)、双皮质素(Doublecortin,DCX)有明显共定位,与胶质纤维酸性蛋白(Glial fibrillary acidic protein,GFAP)和离子钙结合衔接分子1(Ionized Calcium-Binding Adapter Molecule 1,Iba1)无共定位。应用器官型脑片培养,同D-半乳糖诱导的体外衰老模型组比较,Mtnr1a蛋白过表达增加Sirt1、Beclin-1、Nestin及p-m TOR蛋白表达水平,但是降低P53蛋白表达水平;Mtnr1a蛋白低表达降低Sirt1、Beclin-1、Nestin及p-m TO蛋白表达,但是增加P53表达。上述体外实验结果提示,上调Mtnr1a过表达可以抑制细胞衰老,而下调Mtnr1a表达可以加速细胞衰老。结论1、Mtnr1a在青年小鼠大脑皮质内广泛表达。2、Mtnr1a在不同年龄小鼠大脑皮质中均有表达,表达量与年龄呈负相关。3、Mtnr1a在成熟神经元,未成熟神经元以及神经干细胞中均有表达,在星形胶质细胞和小胶质细胞内不表达。4、上调Mtnr1a表达可以抑制细胞衰老,下调Mtnr1a表达可以加速细胞衰老。5、Mtnr1a可能介导m TOR通路,通过促进细胞自噬、诱导神经干细胞更新及增殖从而延缓衰老。

关键词：褪黑素受体1a 大脑皮质衰老器官型脑切片培养

人真皮成纤维细胞中节律基因PER2与褪黑素受体1a抗衰老分子机制研究

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人真皮成纤维细胞中节律基因PER2与褪黑素受体1a抗衰老分子机制研...

作者：李妮虹昆明医科大学

学位级别：硕士

[目的]本课题通过探究人真皮成纤维细胞(Primary Dermal Fibroblast,Normal,Human,Adult,HDFa)中节律基因PER2、BMAL1、CRY1随时间周期性变化,并以PER2基因为代表,探索节律基因与皮肤衰老之间的关系。同时,探究节律基因PER2与褪黑素受体... 详细信息

[目的]本课题通过探究人真皮成纤维细胞(Primary Dermal Fibroblast,Normal,Human,Adult,HDFa)中节律基因PER2、BMAL1、CRY1随时间周期性变化,并以PER2基因为代表,探索节律基因与皮肤衰老之间的关系。同时,探究节律基因PER2与褪黑素受体1a(Melatonin Receptor 1a,MT1)细胞信号转导通路及相互作用机制,以期为揭示皮肤抗衰分子机制提供新的理论依据。[方法]1.本研究通过RT-PCR法检测地塞米松同步化作用后HDFa 48 h内(间隔8h)节律基因PER2、BMAL1、CRY1周期性节律情况。2.利用小干扰RNA(Small interfering RNA,siRNA)干扰节律基因PER2、BMAL1和CRY1,检测基因表达情况。以节律基因PER2为例,检测皮肤衰老相关指标:细胞增殖活力、活性氧(Reactive oxygen species,ROS)水平、基质金属酶 1(Matrix metalloproteinasel,MMP1)和 Ⅰ 型胶原(Collagen Type 1,Collagen Ⅰ)的表达,进而探索节律基因与皮肤衰老之间的关系。3.选择MT1受体的内源性配体--褪黑素(Melatonin)作用HDFa后,检测48h内(间隔8 h)PER2节律基因表达情况,同时检测上述皮肤细胞衰老指标:细胞增殖活力、ROS水平、MMP1、collagen Ⅰ的基因及蛋白表达水平变化。4.本研究成功建立了活细胞MT1过表达系统:在293T细胞上过表达MT1受体,褪黑素作用后通过Glosensor检测活细胞cAMP表达同时检测下游蛋白PKA的表达,验证褪黑素和MT1受体结合后能够抑制cAMP/PKA通路。5.使用cAMP/PKA细胞信号转导通路激活剂Forskolin和抑制剂H-89分别作用HDFa后检测PER2、MMP1、collagen Ⅰ的基因及蛋白表达水平,并检测PKA蛋白表达水平。[结果]***中节律基因随时间存在周期性变化:地塞米松作用HDFa后节律基因PER2、BMAL1、CRY1的表达能够拟合为正弦波型图。2.节律基因和皮肤衰老的关系:当转染72 h,小干扰RNA敲低实验中siPER2(p褪黑素抗衰老作用:褪黑素可促进HDFa增殖(p褪黑素作用 HDFa,RT-PCR 检测 mRNA水平,MMP1(p受体,褪黑素作用后Glosensor检测活细胞cAMP出现降低,Western Blot检测下游蛋白PKA(p褪黑素结合MT1受体能抑制cAMP/PKA通路。5.节律基因PER2与MT1受体细胞信号转导通路及分子机制:用10 μM Forskolin 作用 HDFa 后能够上调 PER2(p褪黑素作用HDFa后检测48h内节律基因的变化情况,随着时间的增加,波幅下降(约为对照组0.8倍),并且褪黑素作用并不会影响PER2的节律周期(约为26 h),也没有引起相位移动,且出现波峰波谷的时间点没有变化。[结论]***2、BAML1、CRY1在HDFa中存在正弦波节律。2.以PER2基因为例,利用siRNA敲低PER2后能够促进MMP1表达并抑制collagen Ⅰ表达,

关键词：皮肤衰老昼夜节律周期2基因褪黑素受体1a 褪黑素

褪黑素受体Mel1a在鸭不同组织中的表达研究

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浙江农业学报 2016年第6期28卷 928-934页

作者：王淑娟刘文举刘晓丽王立克庞训胜安徽科技学院动物科学学院安徽凤阳233100 华中农业大学动物医学院湖北武汉430070

褪黑素是由松果体分泌的吲哚类激素,褪黑素通过与其受体(Mel-1a,Mel-1b and Mel-1c)结合发挥对动物的节律性,生殖调控,抗凋亡和抗氧化等调节作用。为探究Mel1a mRNA和Mel1a蛋白在鸭不同组织中的表达与分布以及在各个组织的相对表达量,... 详细信息

褪黑素是由松果体分泌的吲哚类激素,褪黑素通过与其受体(Mel-1a,Mel-1b and Mel-1c)结合发挥对动物的节律性,生殖调控,抗凋亡和抗氧化等调节作用。为探究Mel1a mRNA和Mel1a蛋白在鸭不同组织中的表达与分布以及在各个组织的相对表达量,研究褪黑素通过Mel1a受体参与鸭的生殖调控作用及其他生物学效应奠定基础,采集鸭心、脾、大脑、小脑、肾、肝、肺、胰和骨骼肌肉组织,利用PCR、免疫组织化学和RTPCR技术研究Mel1a mRNA和Mel1a蛋白在鸭各组织中表达分布以及Mel1a mRNA的相对表达量。研究结果表明:鸭Mel1a mRNA在心、脾、大脑、小脑、肾、肝、肺、卵巢、胰和骨骼肌组织中均存在表达;Mel1a蛋白在大脑、肺、肝、骨骼肌、肾、心和胰组织中均有表达;Mel1a mRNA定量结果表明,各组织中的Mel1a mRNA表达量存在差异,大脑、肺、卵巢、脾、小脑和胰脏的相对表达量较高,而肝、骨骼肌、肾和心的相对表达量较低。褪黑素首先通过与其受体结合而发挥生理调控功能,所以通过研究Mel1a mRNA和蛋白在不同组织的表达分布及其相对表达量,为研究褪黑素及其受体的生理功能如调控昼夜节律,抗凋亡、抗氧化、增强免疫力、卵母细胞成熟以及胚胎的发育探究提供基础。

关键词：鸭褪黑素受体1a 免疫组织化学组织表达荧光定量PCR

循经选穴针刺对失眠大鼠下丘脑腹外侧视前区褪黑素含量及其受体基因表达的影响

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中国中医药信息杂志 2018年第12期25卷 40-44页

作者：谢莉娜谢志强郭鑫魏歆然岳增辉湖南中医药大学湖南长沙410208

目的观察循经选穴针刺对失眠大鼠下丘脑腹外侧视前区褪黑素(MT)含量及其受体MT1、MT2基因表达的影响,探讨针刺治疗失眠症的作用机制及循经选穴针刺对腧穴配伍的效应。方法将60只SD大鼠随机分为空白组、模型组、百会+神门组、百会+三阴... 详细信息

目的观察循经选穴针刺对失眠大鼠下丘脑腹外侧视前区褪黑素(MT)含量及其受体MT1、MT2基因表达的影响,探讨针刺治疗失眠症的作用机制及循经选穴针刺对腧穴配伍的效应。方法将60只SD大鼠随机分为空白组、模型组、百会+神门组、百会+三阴交组、百会+非经非穴组,每组12只。大鼠腹腔注射DL-4-氯苯基丙氨酸混悬液建立失眠模型,各治疗组针刺相应腧穴,每次30 min,治疗7 d。采用ELISA检测大鼠下丘脑腹外侧视前区MT含量;采用实时荧光定量PCR检测大鼠下丘脑腹外侧视前区MT1、MT2 mRNA表达。结果与空白组比较,模型组MT含量及MT1、MT2 mRNA表达明显降低(P受体MT1、MT2 mRNA的表达发挥治疗作用,且循经选穴针刺可能是腧穴配伍效应的影响因素之一。

关键词：针刺失眠褪黑素褪黑素受体1a 褪黑素受体1b 循经选穴大鼠

济宁青山羊皮肤毛囊的发育性变化与MTR-1a、IGF-1和TYR基因的差异表达研究

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济宁青山羊皮肤毛囊的发育性变化与MTR-1A、IGF-1和TYR基因的差异...

作者：董彬山东农业大学

学位级别：硕士

为揭示济宁青山羊皮肤毛囊的发育性变化规律及其候选基因的差异表达对皮肤毛囊生长和发育的影响,本研究采用组织学和实时荧光定量PCR等分子细胞生物学技术,对青山羊不同发育阶段皮肤毛囊的组织结构及其发育性变化规律和皮肤组织中褪黑... 详细信息

为揭示济宁青山羊皮肤毛囊的发育性变化规律及其候选基因的差异表达对皮肤毛囊生长和发育的影响,本研究采用组织学和实时荧光定量PCR等分子细胞生物学技术,对青山羊不同发育阶段皮肤毛囊的组织结构及其发育性变化规律和皮肤组织中褪黑素受体1a(MTR-1a)、类胰岛素生长因子1(IGF-1)和酪氨酸酶(TYR)基因的mRNA差异表达量进行了比较研究。主要研究结果如下:一、采用组织学与显微观测技术,比较研究了济宁青山羊胎儿羊(妊娠80-85d)、小猾皮(出生后3d)、大猾皮(出生后30d)和1龄成年羊皮肤毛囊的组织学结构,以及成年羊皮肤不同部位的组织学差异,结果表明:(1)胎儿羊(妊娠80-85d)胚胎性表皮分化为三层并增厚,真皮分化为两层,交织分布着成纤维细胞。在表皮区可以发现次级毛囊毛基的发生。(2)小猾皮毛囊层中的胶原纤维平行纵横交错,与网状层相比排列较为紧密;而网状层中的胶原纤维呈水平走向,为平行交织状排列。毛囊层内的弹性纤维细而弯曲,相互交织,纵横排列。网状层内无弹性纤维的分布。小猾皮的毛囊组织间隙较大,密度较稀,初级毛囊发达,次级毛囊较少。小猾皮每个毛囊群仅由2-3个初级毛囊和1-2个次级毛囊组成。(3)大猾皮毛囊层和网状层明显增厚,有粗大的胶原纤维束分布其中。大猾皮的毛囊密度和毛囊群直径极显著地大于小猾皮。次级毛囊密集排列在初级毛囊的周围。大猾皮毛囊群由1-5个初级毛囊和若干个次级毛囊组成,其中3毛囊群最多,发达的毛囊群使大猾皮表面粗糙。(4)成年羊皮肤毛囊层的厚度超过网状层,毛囊层内含有较多的结缔组织、胶原纤维和弹性纤维,形成致密的弹性纤维网。网状层中的胶原纤维粗大,胶原纤维呈平行疏松排列。成年羊皮肤初级毛囊较粗长,具有皮脂腺等附属结构,毛干有髓质;次级毛囊没有髓质且毛球较小,皮脂腺不发达或缺如。成年羊毛囊群和大猾皮相似,3毛囊群最多,占81.32%。(5)成年羊颈、背、腹和臀四个部位的皮肤厚度、表皮厚、真皮各层厚均以颈部最厚,背部次之,腹部最薄,颈部与背部、腹部差异极显著,背部与臀部差异不显著;四个部位的羊毛密度,以背部最密,腹部最稀(P>0.05)。羊毛细度在各个部位的差异不显著。毛囊群直径,以腹部最粗,背部次之,臀部最细(P1a、IGF-1和TYR基因在济宁青山羊胎儿羊、小猾皮、大猾皮和1龄成年羊背部皮肤组织中mRNA的差异表达量,结果表明:(1)MTR-1a在大猾皮的表达量极显著地高于其他三个时期(P1a和IGF-1的高表达说明,在此时期大量初级毛囊的毛纤维生长和次级毛囊毛基的发育启动了次级毛囊的毛纤维的发生和生长。(2)MTR-1a在1龄成年羊皮肤颈部和背部的表达量与臀部的表达量差异显著(P1a和IGF-1的差异表达以及毛囊群分布提示MT对初级毛囊的作用大于IGF-1。(3)MTR-1a和IGF-1的表达量与成年羊的羊毛细度存在一定的相关性(P>0.05),说明MT和IGF-1是影响羊毛细度的重要候选基因。(4)TYR在小猾皮和成年羊皮肤组织的表达量极显著地高于胎儿期和大猾皮阶段(P黑素细胞活化,皮肤组织中有大量黑素颗粒生成,在毛干堆积影响毛纤维的颜色。TYR在成年羊腹部皮肤的低表达与青山羊腹部羊毛多为白色有关。以上研究结果为揭示青山羊皮肤毛囊发育的分子遗传机理以及进一步揭示济宁青山羊毛色花纹品质形成的遗传机理奠定了基础。

关键词：济宁青山羊皮肤毛囊褪黑素受体1a 类胰岛素生长因子1 酪氨酸酶组织切片荧光定量PCR

济宁青山羊不同发育阶段皮肤MTR1a的差异表达量及其与毛囊组织学结构的相关性研究

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济宁青山羊不同发育阶段皮肤MTR1A的差异表达量及其与毛囊组织学...