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Vibrio sp. 510产褐藻胶裂合酶的底物专一性分析

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中国海洋大学学报（自然科学版） 2004年第1期34卷 55-59页

作者：江晓路刘岩胡晓珂管华诗中国海洋大学水产学院山东青岛266003

Vibrio sp.51 0具有很强的产生褐藻胶裂合酶的能力。本实验对该菌发酵产生的褐藻胶裂合酶经疏水色谱除去杂蛋白 ,再经灌注色谱分离得到 3个酶组分峰。经底物专一性检测 ,峰 1和峰 3对聚甘露糖醛酸和聚古罗糖醛酸均具降解作用 ,峰 2只对... 详细信息

Vibrio sp.51 0具有很强的产生褐藻胶裂合酶的能力。本实验对该菌发酵产生的褐藻胶裂合酶经疏水色谱除去杂蛋白 ,再经灌注色谱分离得到 3个酶组分峰。经底物专一性检测 ,峰 1和峰 3对聚甘露糖醛酸和聚古罗糖醛酸均具降解作用 ,峰 2只对聚甘露糖醛酸有降解作用。园二色谱测定酶的二级结构 :峰 1结构最为复杂 ,以β-转角为最高 ,占 31 .5% ,无规线团占 2 7% ,α-螺旋占 2 5.8% ;峰2为β-折叠 ,占 95.5% ;峰 3以 60 %的α-螺旋和 40 %的无规线团形式存在。 3个分离峰的底物专一性和二级结构的差异证明了褐藻胶裂合酶蛋白的结构与功能之间的相关性。

关键词：褐藻胶裂合酶色谱分离底物专一性嵌段线性聚合物

褐藻胶裂合酶高产菌株的筛选及其发酵产酶条件优化

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微生物前沿 2018年第3期7卷 87-97页

作者：杨攀科严国富汤洁北京雷力海洋生物新产业股份有限公司北京

通过系统的菌种选育方法,从样品的采集开始,到样品处理,目标菌驯化富集,再到高产菌株的初筛,复筛,最优菌株发酵产酶条件优化等步骤,最终从海洋藻类马尾藻中选育出1株酶活力很高的产褐藻胶裂合酶菌株,初步鉴定为一种革兰氏阳性细菌。该... 详细信息

通过系统的菌种选育方法,从样品的采集开始,到样品处理,目标菌驯化富集,再到高产菌株的初筛,复筛,最优菌株发酵产酶条件优化等步骤,最终从海洋藻类马尾藻中选育出1株酶活力很高的产褐藻胶裂合酶菌株,初步鉴定为一种革兰氏阳性细菌。该菌株在培养基配方为:褐藻酸钠0.8%,玉米浆干粉0.9%,硫酸铵0.3%,氯化钠3%,磷酸氢二钾0.2%,硫酸镁0.05%,余量为自来水,用氢氧化钠调节初始pH7.2,培养工艺为:150 ml三角瓶装液50 ml进行恒温振荡培养,培养温度全程控制在30℃,摇床转速设定在180 r/min的条件下,好氧发酵18~24 h酶活高达580 U/ml左右。另外通过实验鉴定该菌株所产的酶为胞外酶,具有非常好的研究应用价值。

关键词：褐藻胶裂合酶驯化富集初筛复筛发酵产酶条件优化海洋细菌

假单胞菌褐藻胶裂合酶活性片段的基因克隆及重组表达条件的优化

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四川师范大学学报（自然科学版） 2008年第2期31卷 242-246页

作者：王怀玉古静燕李天东韩文君罗英阮期平绵阳师范学院分子生物学与生物制药重点实验室四川绵阳621000

为分析假单胞菌(Pseudomonas)膜周质中褐藻胶裂合酶(alginate lyase,AlgL)的最小活性单元,进行了活性片段的初步研究.用简并引物克隆MY01菌株中AlgL基因的片段,用特异引物扩增目的序列并克隆入pBAD gⅢ/A载体,转化大肠杆菌并筛选阳性克... 详细信息

为分析假单胞菌(Pseudomonas)膜周质中褐藻胶裂合酶(alginate lyase,AlgL)的最小活性单元,进行了活性片段的初步研究.用简并引物克隆MY01菌株中AlgL基因的片段,用特异引物扩增目的序列并克隆入pBAD gⅢ/A载体,转化大肠杆菌并筛选阳性克隆.进行L-阿拉伯糖诱导表达条件的优化,超声破碎重组菌体并分离水溶性组分作为粗酶,以褐藻酸钠为底物进行酶解反应,在235 nm测定产物的吸收值.结果该基因片段300 bp大小,GenBank收录号为AY736133,所编码的氨基酸序列中含有基序"NNHSYW",且在系统发育树中与假单胞菌的AlgL聚类.在优化条件下获得粗酶,酶解反应产物在235 nm有显著吸收,表明重组融合蛋白具有褐藻胶裂合酶活性.褐藻胶裂合酶的研究较多,但其活性片段的重组表达研究少见报导.

关键词：假单胞菌褐藻胶裂合酶基序基因克隆表达

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多糖裂合酶及其应用前景

生命的化学 2005年第2期25卷 163-166页

作者：唐志红鞠宝林剑任育红王长海烟台大学海洋学院烟台264005 烟台大学化学生物理工学院烟台264005

多糖裂合酶(polysaccharidelyase,PL)是一类由原核或真核生物产生的、作用于多糖的降解酶。大多数PL的底物为带负电荷的多糖,它们通过β-消去机制作用于1→4糖苷键,最终产物为不饱和的寡聚糖。PL降解多糖可产生具有新颖理化性质的寡聚物... 详细信息

多糖裂合酶(polysaccharidelyase,PL)是一类由原核或真核生物产生的、作用于多糖的降解酶。大多数PL的底物为带负电荷的多糖,它们通过β-消去机制作用于1→4糖苷键,最终产物为不饱和的寡聚糖。PL降解多糖可产生具有新颖理化性质的寡聚物,这为多糖的研究和应用提供了新途径。

关键词：多糖裂合酶果胶裂合酶褐藻胶裂合酶粘多糖裂合酶