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中国动物保健 2024年第1期26卷 7-9,41页

作者：屈平平杨明彩温华梅李涛山东畜牧兽医职业学院山东潍坊261061

本试验以11株兔源致病性大肠杆菌为宿主菌,利用滴定法和双层平板法从莱芜和青岛规模化兔场污水中分离到2株噬菌体v B-Eco M-t E6和v B-Eco M-tE10。通过透射电镜观察,两株噬菌体均属于有尾噬菌体目,肌尾噬菌体科。噬菌体v B-Eco M-tE6和... 详细信息

本试验以11株兔源致病性大肠杆菌为宿主菌,利用滴定法和双层平板法从莱芜和青岛规模化兔场污水中分离到2株噬菌体v B-Eco M-t E6和v B-Eco M-tE10。通过透射电镜观察,两株噬菌体均属于有尾噬菌体目,肌尾噬菌体科。噬菌体v B-Eco M-tE6和v B-Eco M-t E10的效价为5.42×108PFU/mL和8.26×109PFU/m L,能够裂解5种以上的兔致病性大肠杆菌,裂解性强、效价高、裂解谱广泛,具有较高的开发和利用价值。

关键词：兔致病性大肠杆菌噬菌体裂解性

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一株裂解性青枯雷尔氏菌噬菌体的分离及生物学特性分析

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中国农业科学 2015年第7期48卷 1330-1338页

作者：高苗杨金广刘旭刘伟孙航军申莉莉钱玉梅杨清林余广宏李锡宏王凤龙中国农业科学院烟草研究所/烟草行业病虫害监测与综合治理重点开放实验室黑龙江八一农垦大学农学院山东中烟工业有限责任公司云南烟草保山香料烟有限责任公司湖北省烟草科研所

【目的】分离并纯化出一株裂解性青枯雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum)噬菌体,并测定其各项生物学特性,为开发新的抗烟草青枯病制剂提供依据。【方法】取烟草青枯病重病田中健康烟株的根际土壤制成土壤悬浮液,并通过在青枯雷尔氏菌菌... 详细信息

【目的】分离并纯化出一株裂解性青枯雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum)噬菌体,并测定其各项生物学特性,为开发新的抗烟草青枯病制剂提供依据。【方法】取烟草青枯病重病田中健康烟株的根际土壤制成土壤悬浮液,并通过在青枯雷尔氏菌菌液中加入过滤后的土壤悬浮液富集噬菌体,用双层平板法验证噬菌体的存在后挑取单个最大噬菌斑进行反复纯化,直到得到单一清晰的噬菌斑。纯化后的单个噬菌斑加入对数早期的青枯雷尔氏菌菌液中进行增殖培养,将增殖液按常规方法进行噬菌体颗粒浓缩后,取20μL浓缩液用磷钨酸染色并通过电子显微镜观察噬菌体的形态特征;同时将浓缩液进行SDS-PAGE电泳,观察蛋白条带大小和数量;用λ噬菌体DNA提取试剂盒提取噬菌体增殖液中的噬菌体核酸进行琼脂糖凝胶电泳,确定其基因组片段大小;最后用常规方法测定噬菌体的滴度、最佳感染复数、一步生长曲线,并通过比较加入噬菌体液前后青枯雷尔氏菌菌液的OD600值变化测定其对温度、p H、紫外线、氯仿的敏感性。【结果】分离并纯化出了一株裂解性青枯雷尔氏菌噬菌体,命名为∈RS-1,噬菌斑为圆形,清晰透明,边缘光滑,直径1—2 mm,经电镜观察其形态为蝌蚪状,头部为二十面体的立体对称,直径约为94 nm,并有一带伸缩尾鞘的长尾大约为27 nm×100 nm,按照国际病毒分类委员会分类标准,其属于有尾噬菌体目(Caudovirales),肌尾噬菌体科(Myoviridae)的裂解性噬菌体,核酸性质为ds DNA;噬菌体浓缩液经SDS-PAGE分析至少可以观察到25条蛋白条带,相对分子质量在10—100 k D,说明其蛋白外壳至少含有25个结构蛋白;将提取的DNA进行琼脂糖凝胶电泳显示其条带大于48 kb,符合肌尾噬菌体科基因组大小范围(31—317 kb);生物学特性的测定显示该噬菌体对青枯雷尔氏菌的最佳感染复数为0.01;其吸附和感染青枯雷尔氏菌时的潜伏期约为30 min,爆发期约为80 min,裂解量约为156;该噬菌体的裂解活性在28℃时最高,在28—50℃均较强,但在温度超过60℃后活性基本丧失;其对酸碱的耐受力较强,在p H 3—8的范围内均有较强的裂解活性,当p H值超过9后活性开始降低;其对紫外线有一定的耐受能力,经紫外线照射0—9 min后裂解活性依然较强,12 min后活性开始下降,21 min后活性基本丧失;其对氯仿不敏感,5%浓度的氯仿对其活性基本没有影响。【结论】分离到了裂解性的青枯雷尔氏菌噬菌体,属于有尾噬菌体目,肌尾噬菌体科,经过测定其各项生物学特性可知其潜伏期较短,裂解能力较强,具有很好的杀菌效果,且其裂解活性持续时间长,并能在不同温度、不同酸碱性的环境内有较强的适应能力,具有开发为抗青枯雷尔氏菌菌剂的潜力。

关键词：青枯雷尔氏菌噬菌体分离裂解性生物学特性

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鸡大肠杆菌宽谱噬菌体的分离及裂解性研究

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中国兽医杂志 2016年第3期52卷 38-40页

作者：张晓冬李冰汲晨卢赫冯方周辽宁医学院畜牧兽医学院辽宁锦州121001

为了解鸡宽谱大肠杆菌噬菌体的裂解特性,本试验以30株大肠杆菌为宿主菌,从8份粪便中成功分离出5个噬菌体,并从中筛选出1个强裂解性宽谱大肠杆菌噬菌体,命名为Z-SN5,宽噬率为70%,热稳定性相对良好,60℃作用1 h,尚有活性;耐碱性强于耐酸性... 详细信息

为了解鸡宽谱大肠杆菌噬菌体的裂解特性,本试验以30株大肠杆菌为宿主菌,从8份粪便中成功分离出5个噬菌体,并从中筛选出1个强裂解性宽谱大肠杆菌噬菌体,命名为Z-SN5,宽噬率为70%,热稳定性相对良好,60℃作用1 h,尚有活性;耐碱性强于耐酸性,在pH值=7时活性最高,经PCR鉴定后,成功扩增出目的基因片段。本试验为今后研究噬菌体治疗鸡大肠杆菌病奠定基础。

关键词：鸡大肠杆菌宽谱噬菌体裂解性

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青枯雷尔氏菌噬菌体的分离鉴定及应用研究

青枯雷尔氏菌噬菌体的分离鉴定及应用研究

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作者：高苗中国农业科学院

学位级别：硕士

由青枯雷尔氏菌（Ralstonia solanacearum）侵染烟草引起的烟草青枯病是烟草主要病害之一,生产上尚无有效的防治手段。本研究从生物防治的角度出发,自烟草青枯病病圃中健康烟株的根际土壤中分离得到一株噬菌体,通过病毒形态学,常规生物... 详细信息

由青枯雷尔氏菌（Ralstonia solanacearum）侵染烟草引起的烟草青枯病是烟草主要病害之一,生产上尚无有效的防治手段。本研究从生物防治的角度出发,自烟草青枯病病圃中健康烟株的根际土壤中分离得到一株噬菌体,通过病毒形态学,常规生物学测定和分子生物学测序技术,确定了该噬菌体的分类地位。利用盆栽试验测定了该噬菌体对烟草青枯病的防效,利用土壤细菌宏基因组学,测定了该噬菌体对土壤细菌微生物种群多样性的影响。具体结果如下:1.分离并纯化出一株裂解性***噬菌体,命名为∈RS-1,噬菌斑为圆形,清晰透明,边缘光滑,直径1 mm mm,噬菌体形态为蝌蚪状,头部为二十面体的立体对称,直径大约为94 nm,并有一带伸缩尾鞘的长尾大约为27 nm×100 nm;噬菌体浓缩液经SDS-PAGE分析至少可以观察到25条蛋白条带,说明其蛋白外壳至少含有25个结构蛋白。2.分子生物学测序结果显示,噬菌体∈RS-1与Ralstonia phage RS603（AB937974.1）具有很高的同源性,初步分析它们都是属于有尾噬菌体目（Caudovirales）,肌尾噬菌体科（Myoviridae）,P2噬菌体属（P2-like viruses）的Ralstonia phage。3.生物学特性的测定显示:噬菌体∈RS-1对***的最佳感染复数为0.01;其吸附和感染***时的潜伏期约为30 min,爆发期约为80 min,裂解量约为156;噬菌体∈RS-1原液在4℃长期保存时活性保持的最好;其裂解活性在28℃时最高,在28℃0℃之间均较强,但在温度超过60℃后活性基本丧失;其对酸碱的耐受力较强,在pH值为3～8的范围内均有较强的裂解活性,当pH值超过9后活性开始降低;其对紫外线有一定的耐受能力,经紫外线照射0 min min后裂解活性依然较强,12 min后活性开始下降,21 min后活性基本丧失;其对氯仿不敏感,5%浓度的氯仿对其活性基本没有影响。4.利用盆栽试验,对噬菌体∈RS-1防治烟草青枯病进行了测定,结果表明,提前利用噬菌体∈RS-1对烟株进行灌根和浸根处理,对烟草青枯病的发生都有显著的控制作用,尤其是进行预前灌根时,可有效抑制烟草青枯病发生,相对防效达到94.87%。5.利用土壤细菌宏基因组学方法,对添加和未添加噬菌体∈RS-1的土壤中的菌群落多样性进行了分析,结果发现,与未添加噬菌体∈RS-1的土壤细菌种群多样性相比,人为添加噬菌体∈RS-1对土壤中青枯菌种群数量产生显著的抑制作用,显著降低了土壤中***的种群数量,而对土壤中其他细菌群落多样性和组成没有十分显著的影响,证明噬菌体∈RS-1在防治烟草青枯病时,对土壤微生物种群的调控作用有限,没有显著降低土壤中细菌的种群多样性,说明噬菌体∈RS-1对***的裂解具有特异性和专一性的特点,对土壤微生态具有较高的安全性。

关键词：青枯雷尔氏菌噬菌体裂解性生物学特性应用研究

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多重耐药沙门氏菌广谱噬菌体的分离鉴定及其对小鼠的治疗性研究

多重耐药沙门氏菌广谱噬菌体的分离鉴定及其对小鼠的治疗性研究

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作者：张庆美南京农业大学

学位级别：硕士

沙门氏菌宿主范围广泛,不仅能引起家畜家禽等多种动物发病,还能导致人患病。在感染沙门氏菌后,动物常常表现出伤寒、肠炎、败血症等临床症状。目前抗生素是防治沙门氏菌感染的首选药物,但是由于抗生素的大量使用,沙门氏菌耐药性问题越... 详细信息

沙门氏菌宿主范围广泛,不仅能引起家畜家禽等多种动物发病,还能导致人患病。在感染沙门氏菌后,动物常常表现出伤寒、肠炎、败血症等临床症状。目前抗生素是防治沙门氏菌感染的首选药物,但是由于抗生素的大量使用,沙门氏菌耐药性问题越来越严重,多重耐药菌株也日益增多。因此,如何合理有效的控制沙门氏菌,防止其耐药现象日益严重是当今亟需解决的问题。噬菌体是细菌的天敌,在环境中与细菌的比例约为10:1,其结构简单,主要由蛋白质外壳和核酸组成,广泛存在于大自然中,种类复杂多样,数目庞大。它一般与其敏感的宿主菌相伴而生,容易分离。噬菌体在裂解敏感宿主菌时高效专一,无毒副作用,且分布广泛,制备方便等优势成为科学家们的研究热点。本试验目的为分离筛选一株烈性广谱沙门氏菌噬菌体,对它的生物学特性进行鉴定,并研究此噬菌体在治疗感染沙门氏菌的小鼠的治疗效果。1.噬菌体的分离纯化和生物学特性研究本研究以多重耐药沙门氏菌CS20130523-001-1为宿主菌,采用双层平板培养法从养殖场粪便样本中分离烈性沙门氏菌噬菌体,并测定噬菌体的裂解谱,对其中一株烈性广谱沙门氏菌噬菌体进行形态学、热稳定性、pH稳定性、最佳感染复数(MOI)以及一步生长曲线等生物学特性的研究。结果共分离到4株烈性沙门氏菌噬菌体(SaFB4、SaFB13、SaFB14和SaFB15),对16种血清型205株沙门氏菌的裂解率分别为35.61%、54.15%、53.17%和57.07%,其中SaFB4裂解谱相对较窄,可裂解9种血清型的73株沙门氏菌,其余三株均能裂解10-12种血清型的109-117株沙门氏菌,并对肠炎沙门氏菌(39株)和鼠伤寒沙门氏菌(56株)的裂解率均分别在90%和70%以上,同时这4株噬菌体还能裂解鸡白痢、鸡伤寒沙门氏菌。生物学特性试验表明,噬菌体SaFB14属于有尾噬菌体目,长尾噬菌体科;最适生长温度为37℃;最适pH值为7.0,且它的pH耐受范围较大,在pH 3-10范围内均能生长;最佳感染复数(MOI)为0.1,其效价可高达2.6×1010 PFU/mL;潜伏时间为10 min,爆发时间为70 min,爆发量为23。总之,本试验分离的4株噬菌体均属于广谱烈性噬菌体,对临床常见沙门氏菌具有较强的裂解能力。噬菌体SaFB14属于常见的长尾噬菌体,对酸碱耐受性较强。2.噬菌体SaFB14对感染小鼠的治疗效果研究利用动物攻毒试验,对噬菌体SaFB14进行安全性评价,测定攻毒细菌最小致死量,进而探讨腹腔注射SaFB14对感染沙门氏菌小鼠的治疗条件和效果。结果显示,噬菌体SaFB14对小鼠没有明显毒性。多重耐药沙门氏菌CS20130523-001-1的最小致死量为2×109 CFU/只。噬菌体单剂量给药时,最佳治疗时间为感染细菌后0-1 h,最佳注射剂量为2 × 1010 CFU/只,此时小鼠存活率最高为40%(6/15);而以最佳给药方式连续3天治疗时,小鼠的存活率明显提高(60%)。由此可知,SaFB14对感染沙门氏菌CS20130523-001-1的小鼠确有治疗效果,且以2 × 1010 CFU/只剂量在感染细菌1 h内连续3天注射治疗效果更佳。

关键词：噬菌体沙门氏菌裂解性生物学特性动物实验保护率

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一株鸡源宋内志贺菌噬菌体的分离、生物学特性分析及预防试验研究

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国外畜牧学（猪与禽） 2021年第2期41卷 82-86页

作者：代永联郝小静衣服德白光烨檀学进冯永胜青岛市畜牧兽医研究所山东青岛266100

从青岛地区某鸡场污水中分离出一株具有裂解特性的鸡源宋内志贺菌噬菌体,暂编号为PG2-01。经透射电镜观察,该噬菌体为肌尾噬菌体,头部直径约70 nm,呈立体对称二十面体。试验测定,该噬菌体裂变能力强,潜伏时间短,能在较长时间内维持较强... 详细信息

从青岛地区某鸡场污水中分离出一株具有裂解特性的鸡源宋内志贺菌噬菌体,暂编号为PG2-01。经透射电镜观察,该噬菌体为肌尾噬菌体,头部直径约70 nm,呈立体对称二十面体。试验测定,该噬菌体裂变能力强,潜伏时间短,能在较长时间内维持较强的裂解能力,能够适应的酸碱度、温度范围较广。预防试验中,90%以上的雏鸡能得到有效预防,这对该噬菌体的研究有深远的实践意义及很高的应用价值。

关键词：宋内志贺菌噬菌体分离裂解性生物学特性

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