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衰变加速因子在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义

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免疫学杂志 2006年第1期22卷 58-60页

作者：赵伟鹏朱波段玉忠叶明福陈正堂第三军医大学新桥医院全军肿瘤中心重庆400037 第三军医大学新桥医院病理科重庆400037

目的检测衰变加速因子(decay accelerating factor,DAF,CD55)在非小细胞肺癌(non-small cell lung carcinoma,NSCLC)中的表达,分析其表达与临床分期、化疗用药及预后的关系。方法免疫组化法检测8例NSCLC癌旁组织和36例NSCLC手术标本中DA... 详细信息

目的检测衰变加速因子(decay accelerating factor,DAF,CD55)在非小细胞肺癌(non-small cell lung carcinoma,NSCLC)中的表达,分析其表达与临床分期、化疗用药及预后的关系。方法免疫组化法检测8例NSCLC癌旁组织和36例NSCLC手术标本中DAF的蛋白表达,分析临床资料。结果免疫组化结果显示36例NSCLC标本中,共有18例(50.0%)表达DAF,其中18例肺鳞癌中有15例(83.3%)表达,而16例肺腺癌中有3例(18.8%)表达,两者有显著差异(P0.05)。结论NSCLC中有DAF的表达,尤其是肺鳞癌;提示在NSCLC抗体治疗中应同时阻断DAF的免疫抑制效应。

关键词：衰变加速因子补体依赖细胞毒作用非小细胞肺癌

衰变加速因子在宫颈癌中的表达及其生物学意义

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临床检验杂志 2009年第1期27卷 35-37页

作者：顾平清蔡友群杜国新王卫光刘云蔡俊高玲娟南京市妇幼保健院检验科南京210004

目的探讨衰变加速因子(DAF)在宫颈癌中的表达及其生物学意义。方法以宫颈癌细胞系ME180、宫颈癌组织和癌旁正常组织为材料,采用real-time PCR和western blotting检测DAF基因的mRNA和蛋白质表达水平;用3H-胸腺嘧啶核苷酸掺入量(3H-thymid... 详细信息

目的探讨衰变加速因子(DAF)在宫颈癌中的表达及其生物学意义。方法以宫颈癌细胞系ME180、宫颈癌组织和癌旁正常组织为材料,采用real-time PCR和western blotting检测DAF基因的mRNA和蛋白质表达水平;用3H-胸腺嘧啶核苷酸掺入量(3H-thymidine incorporation,3H-TdR)检查宫颈癌细胞的增殖,用Transwell小室法评估宫颈癌细胞的迁移能力。结果DAF的表达在宫颈癌组织中明显高于其配对的癌旁正常组织,抑制DAF基因的表达能明显降低ME180细胞的增殖、迁移能力。结论DAF在宫颈癌细胞中的高表达可能是肿瘤细胞免疫逃逸的重要机制,对宫颈癌的发生发展有重要的生物学意义。

关键词：衰变加速因子宫颈癌

衰变加速因子及其所在膜微区在T淋巴细胞信号传递中的作用

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现代免疫学 2012年第1期32卷 9-12页

作者：程晓刚叶琬白云成都医学院病原学教研室成都610083 成都蓉生药业有限公司成都610041 第三军医大学分子遗传学教研室重庆400038

低温抽提Jurkat细胞膜去污剂抗性的膜成分(DIG),检测Src家族酪氨酸激酶(PTK)及衰变加速因子(DAF)的分布情况。共聚焦扫描显微技术检测Jurkat细胞静息与交联状态下DAF分子对去污剂Triton-X100的抗溶性,以探讨其在Jur-kat细胞免疫识别中... 详细信息

低温抽提Jurkat细胞膜去污剂抗性的膜成分(DIG),检测Src家族酪氨酸激酶(PTK)及衰变加速因子(DAF)的分布情况。共聚焦扫描显微技术检测Jurkat细胞静息与交联状态下DAF分子对去污剂Triton-X100的抗溶性,以探讨其在Jur-kat细胞免疫识别中的作用,结果显示静息状态CD3对去污剂无抗溶性,而DAF与Lck有抗溶性。单抗交联后CD3对去污剂抗性有所增加。静息状态DAF与Src家族PTK特异分布于膜微区中,交联CD3可诱导CD3与膜微区特异性聚集,DAF所在的膜微区可能促进T细胞的免疫识别和信号传递作用。

关键词：膜微区 Jurkat细胞信号传递衰变加速因子

衰变加速因子介导Jurkat细胞的PTK信号传递机制的实验研究

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上海免疫学杂志 2002年第2期22卷 96-98,112页

作者：程晓刚白云姜曼黎万玲第三军医大学免疫学研究所重庆400038

为研究衰变加速因子 (DAF )介导Jurkat细胞信号传递的机制 ,本文应用免疫印迹及化学发光技术 (ECL)发现交联DAF单抗可使CD3+ 与CD3 Jurkat细胞总蛋白酪氨酸磷酸化水平增加 ,但磷酸化水平不同。免疫共沉淀实验检测到DAF与Src家族酪氨酸激... 详细信息

为研究衰变加速因子 (DAF )介导Jurkat细胞信号传递的机制 ,本文应用免疫印迹及化学发光技术 (ECL)发现交联DAF单抗可使CD3+ 与CD3 Jurkat细胞总蛋白酪氨酸磷酸化水平增加 ,但磷酸化水平不同。免疫共沉淀实验检测到DAF与Src家族酪氨酸激酶 (SrcPTK )可发生共沉淀反应。去污剂不溶膜复合物 (DIG )抽提与鉴定检测到DIG内有SrcPTK与DAF的特异性聚集。说明DAF对Jurkat细胞的信号传递有辅助激活效应。

关键词：衰变加速因子 Jurkat细胞信号传递膜微区 PTK信号传递机制实验研究

人衰变加速因子DAF基因真核表达系统的构建

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中国免疫学杂志 2008年第12期24卷 1116-1120页

作者：徐莉赵舟宙刘辉李文鑫武汉大学生命科学学院病毒学国家重点实验室武汉430072

目的:构建含人补体调节蛋白衰变加速因子DAF分子的cDNA编码区的真核重组表达载体pcDNA3-DAF,转染NIH3T3细胞,建立稳定表达人DAF的NIH3T3细胞模型。方法:将人DAF分子的cDNA编码区克隆到真核表达载体pcDNA3,经酶切和测序鉴定后用磷酸钙沉... 详细信息

目的:构建含人补体调节蛋白衰变加速因子DAF分子的cDNA编码区的真核重组表达载体pcDNA3-DAF,转染NIH3T3细胞,建立稳定表达人DAF的NIH3T3细胞模型。方法:将人DAF分子的cDNA编码区克隆到真核表达载体pcDNA3,经酶切和测序鉴定后用磷酸钙沉淀法转染NIH3T3细胞,通过G418筛选,建立稳定转染的NIH3T3细胞株。用PCR检测人DAF基因在NIH3T3细胞基因组中的整合;用RT-PCR、Westernblot实验和间接免疫荧光技术分别从RNA水平和蛋白质水平检测人补体调节蛋白分子DAF在细胞株中的表达。结果:成功构建了pcDNA3-DAF重组真核表达载体,并建立了稳定转染的NIH3T3细胞株,成功地表达了目的基因。PCR检测连续传代30次的NIH3T3pcDNA3-DAF细胞,结果显示人DAF基因仍稳定整合在异源细胞的染色体上,并未随着传代而丢失,为稳定的转染细胞株。结论:真核表达载体构建和稳定转染NIH3T3细胞株的建立为进一步研究人DAF功能和多种补体调节蛋白的协同作用奠定基础。

关键词：衰变加速因子 NIH3T3细胞稳定转染真核表达

人红细胞膜衰变加速因子的分离纯化及其生物学活性鉴定

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免疫学杂志 2003年第1期19卷 61-65页

作者：邹强郑萍周伟谢佩蓉李华郭波第三军医大学全军免疫学研究所重庆400038

目的　获得纯化并具有生物学活性的人红细胞膜衰变加速因子。方法　经胰蛋白酶消化、正丁醇抽提及DE32和Sepharose 6B色谱分离等步骤从人红细胞膜影中分离纯化人红细胞膜衰变加速因子 (DAF)。以SDS PAGE及免疫印迹实验检测纯度及抗原特... 详细信息

目的　获得纯化并具有生物学活性的人红细胞膜衰变加速因子。方法　经胰蛋白酶消化、正丁醇抽提及DE32和Sepharose 6B色谱分离等步骤从人红细胞膜影中分离纯化人红细胞膜衰变加速因子 (DAF)。以SDS PAGE及免疫印迹实验检测纯度及抗原特异性 ,以C3转化酶体外组装实验及促衰变活性实验检测其补体抑制活性。结果　 4 0 0mL人全血最终可得纯化DAF约 370 μg ,回收率达 10 .4 % ;比活性为每毫克 2 .2 4× 10 5units;纯化产物在SDS PAGE表现为 70 0 0 0u的单一蛋白条带 ,在免疫印迹实验中可与抗人DAF单抗特异性结合。在生物学活性实验中 ,纯化产物既可促进C3转化酶衰变 ,也可抑制C3转化酶形成。

关键词：衰变加速因子分离纯化 C3转化酶生物学活性鉴定

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人衰变加速因子的二级结构与B细胞表位预测

中国免疫学杂志 2001年第7期17卷 388-392页

作者：邹强谢佩蓉李华郭波郑萍第三军医大学免疫学教研室全军免疫学研究所重庆400038

目的 :分析预测人衰变加速因子的二级结构特征及B细胞表位。方法 :比较Chou&Fasman经典方案和基于多重序列比较的PHDsec二级结构预测方案的预测准确率 ,应用较优方案对DAF的二级结构进行预测分析 ;运用Hopp&Woods的亲水性方案及PHDacc... 详细信息

目的 :分析预测人衰变加速因子的二级结构特征及B细胞表位。方法 :比较Chou&Fasman经典方案和基于多重序列比较的PHDsec二级结构预测方案的预测准确率 ,应用较优方案对DAF的二级结构进行预测分析 ;运用Hopp&Woods的亲水性方案及PHDacc可及性方案预测DAF的亲水性和可及性 ,结合DAF的二级结构特征 ,分析预测DAF的B细胞表位。结果 :PHDsec方案对SCR的预测准确率明显高于Chou&Fasman方案 ,DAF的SCR1 4中无α螺旋 ,仅包含 β折叠及袢 ;推测最可能的抗原表位位于Pro73 Val79、Arg130 Leu139及Glu15 6 Cys16 3;SCR1、SCR2与SCR3、SCR4在亲水性及二级结构分布方面具有较大差异。结论

关键词：衰变加速因子二级结构表位预测 B细胞

人衰变加速因子在CHO细胞的表达及其衰变加速活性研究

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第三军医大学学报 2004年第7期26卷 576-579页

作者：郭波郑萍马正伟许桂莲李华谢佩蓉吴玉章邹强第三军医大学基础医学部全军免疫学研究所重庆400038 第三军医大学西南医院全军肝胆外科研究所重庆400038

目的　获得稳定表达人衰变加速因子 (humandecay acceleratingactivity ,hDAF)的中国仓鼠卵巢 (Chineseham sterovary ,CHO)细胞系 ,观察在补体活化情况下 ,hDAF对异种细胞的保护作用。方法　构建真核表达载体DAF pcDNA3 .1,用脂质体转... 详细信息

目的　获得稳定表达人衰变加速因子 (humandecay acceleratingactivity ,hDAF)的中国仓鼠卵巢 (Chineseham sterovary ,CHO)细胞系 ,观察在补体活化情况下 ,hDAF对异种细胞的保护作用。方法　构建真核表达载体DAF pcDNA3 .1,用脂质体转染法将其导入CHO细胞 ,有限稀释法筛选稳定表达hDAF的单细胞克隆 ,流式细胞仪检测hDAF的表达 ,C3沉积实验和51 Cr释放法测定其促补体衰变活性。结果　成功构建了真核表达载体DAF pcDNA3 .1,并获得了表达hDAF的单细胞克隆 ,表达hDAF的CHO能减少补体C3的沉积 ,减弱补体的杀伤作用。结论　获得在细胞膜上稳定表达具功能活性的hDAF的CHO克隆 ,为进一步研究其结构与功能的关系准备了条件。

关键词：补体衰变加速因子 CHO细胞 ^51Cr释放法

人衰变加速因子基因在猪血管内皮细胞中的表达

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中华实验外科杂志 2002年第1期19卷 50-51页

作者：李胜芝姚旭东王广有马腾骧天津医科大学第二医院泌尿外科研究所 300211

目的　通过转基因方法使猪的血管内皮细胞表达人DAF蛋白 ,抑制猪供人移植超急性排斥反应。方法　体外培养猪腹主动脉内皮细胞 ,用透射电镜方法进行鉴定。脂质体转染法将含有人DAF基因的真核表达载体PSFFV DAF转染进猪的血管内皮细胞 ,经... 详细信息

目的　通过转基因方法使猪的血管内皮细胞表达人DAF蛋白 ,抑制猪供人移植超急性排斥反应。方法　体外培养猪腹主动脉内皮细胞 ,用透射电镜方法进行鉴定。脂质体转染法将含有人DAF基因的真核表达载体PSFFV DAF转染进猪的血管内皮细胞 ,经G418筛选 (浓度为10 0mg/L) 12d ,获得具有抗性的克隆 ,进而增殖 ,传代 ,保种。通过流式细胞仪检测转染细胞DAF的表达情况。结果　转染了基因的细胞与未转染基因的细胞在流式细胞仪检测中其莹光强度分别为 82 .18和 1.69。转染的细胞 5代后其荧光强度为 71.96。结论　转染了人DAF基因的细胞荧光强度明显高于对照组。导入的外源基因在细胞内能高效、稳定地表达 ,为转基因猪的建立奠定一定的基础。

关键词：基因转移衰变加速因子血管内皮细胞动物实验