检索结果-南通市图书馆

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

大肠杆菌外源蛋白表达载体稳定性的研究进展

生物技术通报 2014年第5期30卷 25-31页

作者：江伟华刘益丽江明锋青藏高原研究院动物遗传育种国家民委-教育部重点实验室成都610041

构建高产、稳定、可靠的质粒载体成为基因重组表达技术的研究重点之一。宿主细胞代谢反应和质粒不稳定性相关信息的缺乏,仍然阻碍着质粒载体的优化,成为限制外源蛋白在大肠杆菌中高效表达的瓶颈之一。主要论述了大肠杆菌外源蛋白表达载... 详细信息

构建高产、稳定、可靠的质粒载体成为基因重组表达技术的研究重点之一。宿主细胞代谢反应和质粒不稳定性相关信息的缺乏,仍然阻碍着质粒载体的优化,成为限制外源蛋白在大肠杆菌中高效表达的瓶颈之一。主要论述了大肠杆菌外源蛋白表达载体的稳定性,分别从质粒和外源基因的本身特性、重组质粒转化对宿主细胞造成的影响及其他因素等方面阐述了对质粒载体稳定性的影响,同时介绍了相关的解决办法,从而为大肠杆菌表达系统高效表达外源蛋白提供参考。

关键词：大肠杆菌外源蛋白表达载体稳定性

人源核不均一核糖核蛋白E1真核表达载体在神经细胞中的表达

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国组织工程研究 2014年第42期18卷 6769-6774页

作者：霍丽蓉王兰英邹俊华钟南首都医科大学附属复兴医院首都医科大学教育部神经变性病重点实验室北京大学医学部医学遗传系 New York State Institute for Basic Research in Developmental Disabilities Staten Island NY 10314 USA

背景:人源核不均一核糖核蛋白E1功能广泛,可参与神经系统骨架蛋白的表达。目的:为深入研究其在神经细胞中的作用,构建其真核表达载体,观察其在神经细胞中的表达。方法:利用真核表达载体pcDNATM4/His C,通过亚克隆构建核不均一核糖核蛋白... 详细信息

背景:人源核不均一核糖核蛋白E1功能广泛,可参与神经系统骨架蛋白的表达。目的:为深入研究其在神经细胞中的作用,构建其真核表达载体,观察其在神经细胞中的表达。方法:利用真核表达载体pcDNATM4/His C,通过亚克隆构建核不均一核糖核蛋白E1-pcDNATM4/His C重组质粒,经酶切、测序鉴定,通过转染神经细胞SH-SY5Y,采用western-blot,RT-PCR鉴定核不均一核糖核蛋白E1重组质粒的表达,并观察转染细胞的生长现象。结果与结论:成功构建了核不均一核糖核蛋白E1的真核表达载体,mRNA和蛋白水平上均证实了该质粒可在神经细胞SH-SY5Y中正确表达。SH-SY5Y细胞在转染核不均一核糖核蛋白E1后表现为加速生长。提示该蛋白对神经细胞的生长发育具有重要的作用。该载体为进一步研究核不均一核糖核蛋白E1在神经系统中的功能提供了前提条件。

关键词：组织构建组织工程核不均一核糖核蛋白E1 表达载体神经细胞国家自然科学基金

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

水稻硅转运子基因的克隆与表达载体的构建

西北农业学报 2009年第4期18卷 191-196页

作者：陈虞超宋玉霞石磊陈晓军宁夏大学生命科学学院宁夏银川750021 宁夏农业生物技术重点实验室宁夏银川750002

提取水稻根中总RNA,根据NCBI中水稻硅转运子基因Lsi1(AB222272)、Lsi2(AB222273)的mR-NA序列设计2对引物,采用RT-PCR技术扩增硅转运子基因Lsi1、Lsi2。并利用DNA重组技术分别构建了两个植物表达载体pCAMBIA2300-35S-Lsi1-OCS和pCAMBIA2300-35S-Lsi2-OCS。克隆的水稻硅转运子基因Lsi1、Lsi2与NCBI中已发表的核苷酸序列的同源性为99.33%、99.65%,氨基酸同源性都为100%。为后续培育其他硅转基因树木或农作物,增加其硅元素转运能力、提高其抗逆性奠定了实验基础。

关键词：硅转运子 Lsi1 Lsi2 表达载体

结缕草热激蛋白基因ZjHSP19.5植物表达载体构建及转化

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

河北农业大学学报 2019年第3期42卷 27-31,50页

作者：张雅晰李鑫屈新月唐志菲魏佳兴冯英伟孙鑫博河北农业大学河北省作物生长调控重点实验室

以结缕草(Zoysia japonica Steud)cDNA为模板,利用PCR扩增ZjHSP19.5基因,并插入到PGEM-T Easy Vector上构建成克隆载体ZjHSP19.5-T。利用限制性内切酶BamHI分别对克隆载体ZjHSP19.5-T和植物表达载体PZH01进行单酶切,得到目的基因和线性质粒。在T4DNA连接酶的作用下将两者进行定向连接,经琼脂糖凝胶电泳检测、酶切鉴定,获得植物表达载体P-ZjHSP19.5。利用农杆菌介导法将重组植物表达载体P-ZjHSP19.5转化至匍匐翦股颖,为进一步研究ZjHSP19.5的功能和培育匍匐翦股颖抗热新品系打下基础。

关键词：结缕草热激蛋白表达载体匍匐翦股颖

山茶花CjAPL1基因正义表达载体的构建及对拟南芥的转化分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

园艺学报 2014年第4期41卷 789-796页

作者：孙迎坤李纪元殷恒福中国林业科学研究院亚热带林业研究所浙江富阳311400 青岛农业大学园林与林学院山东青岛266109

为研究山茶花CjAPL1基因对于重瓣花形成的作用,构建了pCAMBIA1300-CjAPL1正义植物表达载体,酶切结果显示,CjAPL1基因正向插入pCAMBIA1300的启动子和终止子之间,表明CjAPL1植物表达载体构建成功。将pCAMBIA1300-CjAPL1采用农杆菌介导的... 详细信息

为研究山茶花CjAPL1基因对于重瓣花形成的作用,构建了pCAMBIA1300-CjAPL1正义植物表达载体,酶切结果显示,CjAPL1基因正向插入pCAMBIA1300的启动子和终止子之间,表明CjAPL1植物表达载体构建成功。将pCAMBIA1300-CjAPL1采用农杆菌介导的花序浸染法转化拟南芥,获得转基因阳性植株65株。随机挑选表型变异明显的3株进行PCR扩增都得到了目的条带,Southern杂交鉴定进一步确认为转基因阳性植株。同时荧光定量检测到在转基因植株中CjAPL1基因表现出较对照显著提高6~25倍的表达量。转基因阳性植株表型变异明显,花柱和雄蕊数相比野生型各增加1枚和1~4枚,萼片边缘发育成白色的瓣化状,表明在拟南芥中过量表达CjAPL1基因可以引起花器官形态的变异和数量的变化,因此该基因在花器官形成和重瓣花发育中具有显著的调控功能。

关键词：山茶花 CjAPL1基因表达载体转基因表达

红色荧光蛋白基因银耳表达载体的构建及表达鉴定

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

热带作物学报 2015年第10期36卷 1814-1819页

作者：阮玲云翁彩红陈世友陈文星赖春芬艾柳英胡开辉孙淑静福建农林大学生命科学学院福建福州350002

以p ET-28a-RFP质粒为模板,PCR扩增红色荧光蛋白(red fluorescent protein,RFP)基因,并克隆到真核表达载体p TE11上,置于RP27启动子调控之下,成功构建表达载体p TE11-RFP。采用PEG介导转化法,将p TE11-RFP转入银耳芽孢中。提取转化子基... 详细信息

以p ET-28a-RFP质粒为模板,PCR扩增红色荧光蛋白(red fluorescent protein,RFP)基因,并克隆到真核表达载体p TE11上,置于RP27启动子调控之下,成功构建表达载体p TE11-RFP。采用PEG介导转化法,将p TE11-RFP转入银耳芽孢中。提取转化子基因组DNA,RFP基因特异性引物扩增获得与目的基因大小一致的特异条带;日光下肉眼观察转化子略显红色,荧光显微镜观察有明显的红色荧光。以上结果证明RFP基因已成功转入银耳芽孢并进行表达,RP27启动子可以调控外源基因RFP在银耳芽孢中的正确表达,为进一步研究外源基因在银耳芽孢生物反应器中的高效表达奠定了一定的基础。

关键词：银耳芽孢红色荧光蛋白基因表达载体

象草PpCCR基因正、反义表达载体的构建及对烟草的转化

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

草业科学 2015年第10期32卷 1586-1593页

作者：彭小群张博雅刘洁雯王亚解新明华南农业大学林学与风景园林学院草业科学系广东省草业工程技术研究中心广东广州510642

象草(Pennisetum purpureum)是一种广泛种植于热带和亚热带地区的多年生资源植物,但其木质素含量过高,影响了对其的开发与利用。为探讨肉桂酰辅酶A还原酶(Cinnamoyl-Co A Reductase,CCR)基因对木质素合成的影响,本研究以华南象草为材料... 详细信息

象草(Pennisetum purpureum)是一种广泛种植于热带和亚热带地区的多年生资源植物,但其木质素含量过高,影响了对其的开发与利用。为探讨肉桂酰辅酶A还原酶(Cinnamoyl-Co A Reductase,CCR)基因对木质素合成的影响,本研究以华南象草为材料,构建了CCR基因正反义表达载体,并利用农杆菌侵染法转化烟草。通过Wiesner和Maule染色法对转基因植株进行木质素的组织化学染色。结果发现,转基因植株的木质素单体组成并没有明显改变;但Pp CCR过表达烟草,转基因株系木质化细胞增多;Pp CCR反义表达烟草,转基因株系木质化细胞排列相对松散。同时反义表达CCR,在木质素含量下降最明显的植株中茎秆呈红褐色。上述结果表明,CCR对木质素的合成起重要作用,这为进一步对象草进行遗传改良奠定了基础。

关键词：象草 CCR基因表达载体遗传转化烟草

甘蔗花叶病毒外壳蛋白基因的克隆及系列表达载体的构建

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

吉林农业大学学报 2007年第2期29卷 133-138页

作者：刘小红荣廷昭谭振波西华师范大学生命科学学院南充637002 四川农业大学玉米研究所雅安625014 北京大北农农业科技研究院北京100085

采用RT-PCR法,从表现玉米矮花叶病症状的玉米叶片中克隆了外壳蛋白(Coat protein)基因。测序和同源性比较结果表明:所克隆的CP基因来自甘蔗花叶病毒(Sugarcane mosaic virus,SCMV)MDB株系,编码219个氨基酸。以CP基因为目的基因,构建了... 详细信息

采用RT-PCR法,从表现玉米矮花叶病症状的玉米叶片中克隆了外壳蛋白(Coat protein)基因。测序和同源性比较结果表明:所克隆的CP基因来自甘蔗花叶病毒(Sugarcane mosaic virus,SCMV)MDB株系,编码219个氨基酸。以CP基因为目的基因,构建了用于基因枪转化的p35SCPfBar,p35SCPrBar,pUbiCPfBar,pU-biCPrBar 4个表达载体和用于农杆菌转化的pCAMBIACPf,pCMABIACPr 2个表达载体。

关键词：玉米矮花叶病甘蔗花叶病毒外壳蛋白表达载体

ptc-miR801人工microRNA表达载体构建及功能初步研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

植物研究 2013年第5期33卷 599-604页

作者：杨惠琴蒋晶刘明英乔桂荣姜彦成卓仁英中国林业科学研究院亚热带林业研究所富阳311400 新疆大学生命科学与技术学院乌鲁木齐830046

在构建盐胁迫下青杨microRNA文库中发现了ptc-miR801,为探索植物在盐胁迫条件下ptc-miR801参与胁迫应答的机制,本实验构建了植物表达载体pCAM2300-ami801,经根癌农杆菌EHA105介导、花序侵染法获得拟南芥转基因植株。RT-PCR半定量结果显... 详细信息

在构建盐胁迫下青杨microRNA文库中发现了ptc-miR801,为探索植物在盐胁迫条件下ptc-miR801参与胁迫应答的机制,本实验构建了植物表达载体pCAM2300-ami801,经根癌农杆菌EHA105介导、花序侵染法获得拟南芥转基因植株。RT-PCR半定量结果显示ptc-miR801可以在转基因拟南芥中超表达且NaCl胁迫下ptc-miRNA801转基因植株种子萌发率和根长显著高于野生型,说明ptc-miR801超表达增强了转基因拟南芥耐盐性。该试验为进一步研究miR801在杨树胁迫应答机制中的作用奠定基础。

关键词： miRNA 表达载体拟南芥耐盐