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虎斑乌贼(Sepia pharaonis)FMRFamide G蛋白偶联受体基因的克隆与表达定位研究

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海洋与湖沼 2022年第6期53卷 1548-1557页

作者：郭祖霆朱阳曹慧敏李双周旭迟长凤苗增良浙江海洋大学海洋科学与技术学院海洋生物种质资源发掘利用国家地方联合工程研究中心浙江舟山316022

以FMRFamide为典型代表的FMRFamide相关肽,是目前已知的最大的神经肽家族。FMRFamide广泛参与多种生理过程,包括摄食、心跳、渗透平衡、变态、防御和免疫等。采用同源克隆法与RACE技术获得了虎斑乌贼FMRFamide的G蛋白偶联受体基因cDNA... 详细信息

以FMRFamide为典型代表的FMRFamide相关肽,是目前已知的最大的神经肽家族。FMRFamide广泛参与多种生理过程,包括摄食、心跳、渗透平衡、变态、防御和免疫等。采用同源克隆法与RACE技术获得了虎斑乌贼FMRFamide的G蛋白偶联受体基因cDNA全长序列(命名为SpFaGPCR,OL765295),SpFaGPCR cDNA全长1514 bp,包括222 bp的5′-非编码区(5′-UTR)、35 bp的3′-UTR以及1257 bp的开放阅读框(ORF),共编码418个氨基酸。预测相对分子量(MW)为49.8 kDa,等电点(pI)为9.76,具有7个跨膜结构域、糖基化位点7个、磷酸化位点36个。同源序列比对分析表明,SpFaGPCR与曼氏无针乌贼的FaGPCR氨基酸序列相似度最高,达98%。系统发育分析显示SpFaGPCR与双壳纲的FaGPCR聚为姐妹支。荧光定量结果显示SpFaGPCR在视叶、视腺、脑、缠卵腺中表达量相对较高(P<0.05)。进一步利用原位杂交技术检测到虎斑乌贼视叶的髓质区、视网膜的感光细胞和缠卵腺的瓣叶外层具有明显的阳性杂交信号。实验结果为进一步探讨FMRFamide通过FaGPCR的介导参与虎斑乌贼生理代谢功能奠定了前期基础。

关键词：虎斑乌贼头足类 FMRFamide G蛋白偶联受体表达定位

褐飞虱两个dynamin-1-like基因的克隆、多克隆抗体制备及表达定位

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中国水稻科学 2017年第4期31卷 345-354页

作者：赵晨星俞叶微许益鹏俞晓平中国计量大学生命科学学院浙江省生物计量及检验检疫技术重点实验室杭州310018

【目的】研究dynamin-1-like的两个基因NlDNM1L-1和NlDNM1L-2在褐飞虱中的生物学功能。【方法】通过聚合酶链式反应扩增褐飞虱dynamin-1-like的两个基因,并对其生物信息学进行分析。通过荧光定量PCR技术(qPCR)检测了这两个基因在褐飞虱... 详细信息

【目的】研究dynamin-1-like的两个基因NlDNM1L-1和NlDNM1L-2在褐飞虱中的生物学功能。【方法】通过聚合酶链式反应扩增褐飞虱dynamin-1-like的两个基因,并对其生物信息学进行分析。通过荧光定量PCR技术(qPCR)检测了这两个基因在褐飞虱不同组织和不同发育阶段中的相对表达量。构建原核表达载体,在表达菌株Rosetta中诱导重组目的蛋白的表达。通过Ni柱亲和层析纯化目的蛋白,并将纯化得到的蛋白免疫新西兰大白兔,得到多克隆抗体,并用ELISA检测抗体效价,Western blotting检测抗体特异性。利用上述抗体,通过免疫荧光实验观察目的蛋白在褐飞虱卵巢中的表达和定位。【结果】克隆并鉴定了两个dynamin-1-like基因,分别命名为NlDNM1L-1和NlDNM1L-2(Gen Bank登录号分别为KY082900、KY082901)。系统进化树表明,NlDNM1L-1和NlD NM1L-2在半翅目昆虫中较为保守。蛋白结构预测和基因时空表达分析说明,NlDNM1L-1和NlDNM1L-2在褐飞虱中可能有着不同的功能。ELISA和Western blotting结果表明,制备的NlDNM1L-1和NlDNM1L-2多克隆抗体效价高、特异性好。免疫荧光实验结果显示,NlDNM1L-1和NlDNM1L-2在褐飞虱卵巢滤泡细胞中普遍表达,可能与褐飞虱卵巢发育和成熟有关,它们也可能与类酵母共生菌入侵褐飞虱卵巢有关。【结论】获得了NlDNM1L-1和NlDNM1L-2基因序列,了解了其基本的生物信息,并阐明了其时空表达特征;成功制备其多克隆抗体,并初步了解了NlDNM1L-1和NlDNM1L-2在褐飞虱卵巢中的表达和定位。这些结果为深入研究NlDNM1L-1和NlDNM1L-2在褐飞虱中的功能奠定了基础。

关键词：褐飞虱 Dynamin-1-like 基因克隆表达模式原核表达多克隆抗体表达定位

固醇调节元件结合蛋白-1在小鼠肾脏的表达定位

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基础医学与临床 2013年第12期33卷 1621-1623页

作者：张晓燕刘佳王菁丁洁管又飞北京大学第一医院儿科北京100191 北京大学糖尿病中心肥胖及代谢病研究中心北京100191 北京大学医学部基础医学院生理与病理生理学系北京100191

胆固醇和脂肪酸是细胞膜重要组成成分，也是众多信号分子的前体，广泛参与了机体的生理及病生理调节。

关键词：固醇调节元件结合蛋白-1 表达定位肾脏小鼠生理调节组成成分信号分子细胞膜

激活转录因子5的克隆及其在真核细胞中的表达定位

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中华实验外科杂志 2005年第6期22卷 705-707,i003页

作者：叶雄俊常智杰林桂亭张志文辛殿祺王晓峰郭应禄北京大学人民医院泌尿外科 100044 清华大学生物系基因组研究所北京大学泌尿外科研究所北京大学医学部生理学系

目的克隆激活转录因子(ATF)5,构建其真核表达载体,观察其在细胞中的表达定位。方法根据人ATF5的cDNA序列设计引物,通过巢式PCR扩增ATF5全长及其N端(ATF5/N)和C端(ATF5/C),构建重组表达质粒pCS2MT-ATF5、pCS2MT-ATF5/N和pCS2MT-ATF5/C及... 详细信息

目的克隆激活转录因子(ATF)5,构建其真核表达载体,观察其在细胞中的表达定位。方法根据人ATF5的cDNA序列设计引物,通过巢式PCR扩增ATF5全长及其N端(ATF5/N)和C端(ATF5/C),构建重组表达质粒pCS2MT-ATF5、pCS2MT-ATF5/N和pCS2MT-ATF5/C及融合绿色荧光蛋白(GFP)基因的质粒pEGFP-ATF5。将表达质粒转染293T和Cos7细胞,Westernblot检测其表达情况,荧光显微镜观察ATF5在293T和Hela细胞的定位。结果巢式PCR产物与预期大小一致,重组质粒pCS2MT-ATF5、pCS2MT-ATF5/N和pCS2MT-ATF5/C能表达携带Myc标签的蛋白Myc-ATF5、Myc-ATF5/N和Myc-ATF5/C,分子量分别为52、35和43×103。荧光显微镜观察发现融合了GFP的ATF5蛋白定位在细胞核。结论成功的克隆和表达ATF5基因为进一步研究其在肾肿瘤发生、发展过程中的作用奠定了基础。

关键词：激活转录因子5 基因克隆真核细胞表达定位肾肿瘤

剪接因子SQD在家蚕中的表达定位与功能分析

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环境昆虫学报 2023年第2期45卷 451-463页

作者：蔡敏玲张康张纯邓惠敏朱子丹华南师范大学生命科学学院广东省昆虫发育生物学与应用技术重点实验室广州510631 广东省植物保护新技术重点实验室广州510640

BmSQD(Bombyx mori SQUID)是一种具有RRM结构域(RNA recognition motif,RRM)的核内不均一核糖核蛋白(heterogeneous nuclear ribonucleoproteins,hnRNPs)。为探究SQD在家蚕中的表达定位和功能,在生物信息学分析和克隆表达与抗体制备的基础上,本文通过对变态发育和胚胎发育时期部分组织的BmSQD蛋白水平和mRNA水平表达量进行分析,辅以组织细胞定位的免疫组化分析,对SQD蛋白的基本特性和在家蚕Bombyx mori中的表达定位及功能进行了研究。生物信息学分析显示,昆虫中的SQD同源基因相似性高,尤其是SQD蛋白二级结构的α螺旋和β折叠按照β1-α1-β2-β3-α2-β4的空间顺序组合形成的两个RRM结构域在昆虫中高度保守;BmSQD是一种亲水性且具有特定空间结构的hnRNPs蛋白,存在潜在的磷酸化位点;BmSQD在家蚕中的大部分组织中都有表达,尤其在卵巢与精巢等重要组织,且主要在家蚕发育的重要时期如胚胎发育与变态发育时期高表达,主要定位在细胞核内,对基因转录后调节起到剪接调控作用。本文为研究SQD蛋白在昆虫变态发育和胚胎发育中的剪接调控机制提供数据参考的意义。

关键词：家蚕 BmSQD 生物信息学分析表达定位剪接调控机制

角质细胞生长因子在常染色体显性遗传性多囊肾病囊肿组织中的表达定位

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第二军医大学学报 2003年第1期24卷 22-24页

作者：刘沙勤梅长林孙田美盛茂第二军医大学长征医院肾内科解放军肾脏病中心上海200003

目的 :在蛋白水平研究角质细胞生长因子 (keratinocyte growth factor,KGF)在常染色体显性遗传性多囊肾病 (auto-somel dominant polycystic kidney disease,ADPKD)囊肿组织中的表达及定位。方法 :分别采用蛋白质印迹及免疫组化方法分析... 详细信息

目的 :在蛋白水平研究角质细胞生长因子 (keratinocyte growth factor,KGF)在常染色体显性遗传性多囊肾病 (auto-somel dominant polycystic kidney disease,ADPKD)囊肿组织中的表达及定位。方法 :分别采用蛋白质印迹及免疫组化方法分析 ADPKD患者囊肿组织中 KGF的表达和进行细胞定位。结果 :与正常肾组织相比 ,ADPKD患者的囊肿组织 KGF含量明显增高 ,约是前者的 4倍 ,主要在囊肿衬里上皮细胞和残存的正常肾小管上皮细胞中表达。结论 :KGF在 ADPKD囊肿组织局部的过度表达可能是 ADPKD囊肿形成和发展的重要因素之一。

关键词：角质细胞生长因子多囊肾病常染色体显性囊肿表达定位

缺氧诱导因子-1αmRNA和蛋白在妊高征胎盘组织中表达定位

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陕西医学杂志 2005年第2期34卷 164-165,182,F004页

作者：吴维光姚元庆李东红第四军医大学唐都医院妇产科西安710038

目的 :探讨缺氧诱导因子 1α( HIF- 1α)在妊高征胎盘组织细胞中的定位。方法 :收取 1 0例妊高征孕妇的胎盘组织 ,应用免疫组织化学方法 ,观察 HIF- 1α蛋白在妊高征胎盘组织细胞中的定位表达 ;应用原位杂交的方法 ,观察 HIF- 1α m RN... 详细信息

目的 :探讨缺氧诱导因子 1α( HIF- 1α)在妊高征胎盘组织细胞中的定位。方法 :收取 1 0例妊高征孕妇的胎盘组织 ,应用免疫组织化学方法 ,观察 HIF- 1α蛋白在妊高征胎盘组织细胞中的定位表达 ;应用原位杂交的方法 ,观察 HIF- 1α m RNA在妊高征胎盘组织细胞中的定位表达。结果 :在妊高征胎盘中 ,HIF- 1α蛋白主要表达在合体滋养细胞、血管内皮细胞的胞核和胞浆中 ;HIF- 1 α m RNA主要表达在合体滋养细胞和血管内皮细胞的胞浆中。结论 :HIF- 1 α在妊高征胎盘组织中表达主要集中在胎盘的合体滋养细胞和血管内皮细胞。妊高征胎盘中合体滋养细胞和血管内皮细胞表达 HIF- 1 α。

关键词：妊高征 HIF-1α 胎盘组织血管内皮细胞缺氧诱导因子-1α 表达定位滋养细胞 RNA 定位表达蛋白

β-catenin不同表达定位与胃癌临床病理特征的关系

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临床与实验病理学杂志 2019年第2期35卷 143-146页

作者：程玉刘小超薛晶郝美玲承德医学院病理学教研室承德067000 承德医学院免疫学教研室承德067000 承德医学院形态学实验中心承德067000 承德医学院附属医院病理科承德067000

目的探讨β-catenin不同表达定位在胃癌组织中的意义及与胃癌临床病理特征的关系。方法应用免疫组化SP法检测120例胃癌组织及50例正常胃黏膜中β-catenin的表达情况。结果β-catenin在正常胃黏膜中的表达定位于细胞膜,阳性率为100. 00%... 详细信息

目的探讨β-catenin不同表达定位在胃癌组织中的意义及与胃癌临床病理特征的关系。方法应用免疫组化SP法检测120例胃癌组织及50例正常胃黏膜中β-catenin的表达情况。结果β-catenin在正常胃黏膜中的表达定位于细胞膜,阳性率为100. 00%。但其在胃癌组织中细胞膜表达缺失,出现细胞质、细胞核或质/核异位表达,异位表达率高达81. 67%(98/120),其异位表达与胃癌分化程度、淋巴结转移及TNM分期有关(P 表达率为36. 67%(44/120),并且其细胞核表达与胃癌TNM分期有关(P 表达定位与胃癌的进展有关,β-catenin有望成为胃癌诊断及治疗的潜在靶点。

关键词：胃肿瘤 β-catenin 表达定位免疫组织化学

Flaveria　anomala植物中甘氨酸脱羟酶P-蛋白亚基基因的分子克隆及其表达定位的分析

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云南大学学报（自然科学版） 1999年第S3期21卷 105-106页

作者：储成才瞿南 HermannBauwe 中国科学院遗传研究所 INSTITUTE OF PLANT GENETICS AND CROP PLANT RESEARCH IACR-ROTHAMSTED BIOCHEMISTRY AND PHYSIOLOGY DEPARTMENT