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解毒化瘀方联合抗生素对钛表面表皮葡萄球菌生物膜影响的体外研究

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解毒化瘀方联合抗生素对钛表面表皮葡萄球菌生物膜影响的体外研究

作者：于进洋河南中医药大学

学位级别：硕士

研究目的:探讨体外解毒化瘀方联合抗生素对表皮葡萄球菌(Staphylococus epidermidis,SE)生物膜形成及成熟生物膜的影响,明确解毒化瘀方联合抗生素的抗生物膜作用特点,为临床预防和治疗SE生物膜相关的感染提供新思路。研究方法:1、实验用... 详细信息

研究目的:探讨体外解毒化瘀方联合抗生素对表皮葡萄球菌(Staphylococus epidermidis,SE)生物膜形成及成熟生物膜的影响,明确解毒化瘀方联合抗生素的抗生物膜作用特点,为临床预防和治疗SE生物膜相关的感染提供新思路。研究方法:1、实验用ATCC35984(SE生物膜形成阳性菌株)及ATCC12228(SE生物膜形成阴性菌株)购自美国标准菌库(American type culture collection,ATCC)。采用钛板作为载体,胰酪大豆胨液体培养基(trypticsoy broth,TSB)为培养基,通过扫描电镜(Scanning electron microscope,SEM)观察ATCC35984能否形成生物膜。采用微量稀释法分别测定解毒化瘀方以及临床常用抗生素头孢替安、头孢唑琳钠、克林霉素、庆大霉素、左氧氟沙星及万古霉素等对SE的最小抑菌浓度(Minimum inhibitiory concentration,MIC)以及联合用药的部分抑菌浓度指数(Fractional inhibitiory concentration index,FICI),筛选出对 SE生物膜具有较强抑制作用的药物组合。2、对生物膜形成的影响:根据前期研究选择SE生物膜形成过程中的主要2个培养时间点(即6h细菌黏附阶段和24h细菌聚集阶段)作为观察点。利用药物组合中抑制生物膜最小的FICI组合及各单药组干预不同阶段的SE生物膜形成。然后规定时间点分别采用结晶紫半定量、倍比稀释活菌涂板计数、激光扫描共聚焦显微镜(Confocal laser scanning microscope,CLSM)及SEM等观察对生物膜形成的影响。3、对成熟生物膜的影响:体外建立ATCC35984及ATCC12228生物膜模型。成熟生物膜形成后,利用药物组合中抑制生物膜的最小FICI组合及各单药对成熟生物膜进行干预,规定时间点分别采用结晶紫半定量、倍比稀释活菌涂板计数、CLSM及SEM等观察对成熟生物膜的影响。结果:1、ATCC35984在内含钛片的96孔板内连续培养48h后,SEM观察到ATCC35984在钛片表面形成成熟生物膜,可见表面粘稠致密的胞外基质以及周围较多的SE。对生物膜阳性菌ATCC35984具有协同作用的药物组合为解毒化瘀方和左氧氟沙星,两药联用FICI值为0.25,即1/8MIC左氧氟沙星(0.06ug/ml)+1/8MIC解毒化瘀方(3.9mg/ml),两药联用效果最好;对生物膜阴性菌ATCC12228具有协同作用的药物组合为解毒化瘀方和万古霉素,两药联用FICI值为0.375,即1/8MIC万古霉素(0.24 ug/ml)+1/4MIC解毒化瘀方(7.9mg/ml),两药联用效果最好。对于生物膜形成阳性菌株及生物膜形成阴性菌株,联用药物组效果均好于单药组。2、生物膜形成过程中,在6h细菌黏附阶段,1/8MIC左氧氟沙星(0.06ug/ml)和1/8MIC解毒化瘀方(3.9mg/ml)联合使用能明显抑制细菌在钛表面的粘附,相对于其他组,可见散在的细菌菌落聚集;在24h细菌聚集阶段,1/8MIC左氧氟沙星(0.06ug/ml)和 1/8MIC解毒化瘀方(3.9mg/ml)联合使用有明显的抑菌作用,其可以减少生物膜胞外基质的形成,破坏SE生物膜的微观结构,抑制生物膜的形成,且随着药物作用时间的延长,其抑菌性更明显。对于生物膜阳性菌ATCC35984来讲,联合用药组的抑制作用强于1/8MIC左氧氟沙星和1/8MIC解毒化瘀方单药组;对于生物膜阴性菌ATCC12228来讲,联合用药组的抑菌作用强于1/8MIC万古霉素和1/4MIC解毒化瘀方单药组。两菌相比,联合用药组对于ATCC12228的抑制作用要强于ATCC35984。3、在48h生物膜成熟阶段,1/8MIC左氧氟沙星(0.06ug/ml)和1/8MIC解毒化瘀方(3.9mg/ml)联合使用可以明显的破坏SE生物膜,并且杀灭膜内细菌。对于生物膜阳性菌ATCC35984来讲,联合用药组的杀菌作用强于1/8MIC左氧氟沙星和1/8MIC解毒化瘀方单药组;对于生物膜阴性菌ATCC12228来讲,联合用药组的杀菌作用强于 1/8MIC万古霉素和1/4MIC解毒化瘀方单药组。两菌相比,联合用药组对于ATCC12228的杀灭作用要强于ATCC35984。结论:1、在生物膜成熟之前,1/8MIC左氧氟沙星(0.06ug/ml)和1/8MIC解毒化瘀方(3.9mg/ml)联合使用可以较好的抑制生物膜的形成,且比两药单独使用抑菌作用更强。在6h阶段和24h阶段各组细菌数量也在增加,提示随着生物膜的形成,细菌的抗药性也在不断增强。2、在生物膜成熟后,1/8MIC左氧氟沙星(0.06ug/ml)和1/

关键词：解毒化瘀方抗生素表皮葡萄球菌生物膜联合用药

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中国修复重建外科杂志 2015年第1期29卷 63-68页

作者：王小燕陈颖黄云超周友全赵光强叶联华雷玉洁汤琦昆明医科大学第三附属医院胸心外科昆明650118 昆明医科大学附属延安医院心脏大血管外科昆明医科大学第三附属医院检验科昆明6501181 昆明医科大学第三附属医院乳腺科昆明6501181

目的探讨表皮葡萄球菌生物膜形成相关基因——胞间黏附素A(intercellular adhesion A,ica A)基因、纤维蛋白原结合蛋白(fibrinogen binding protein,fbe)基因、聚集相关蛋白(accumulation-associated protein,aap)基因在表皮葡萄球菌和白假丝酵母菌混合生物膜形成中的作用。方法实验分为3组,用表皮葡萄球菌标准株ATCC35984(表葡组)及白假丝酵母菌标准株ATCC10231(白念组)分别培养及混合培养(混合组),建立表皮葡萄球菌、白假丝酵母菌及二者混合生长的体外生物膜模型。于培养2、4、6、8、12、24、48、72 h,采用结晶紫染色法半定量检测生物膜形成能力,二甲氧唑黄[(2,3 bis(2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl)5〔(phenylamino)Carbonyl〕2H-tetrazolium hydroxide assay,XTT]比色法评价生物膜体外生长动力学;24、72 h扫描电镜观察生物膜超微结构。荧光定量PCR分析培养72 h表葡组及混合组ica A、fbe、aap基因表达情况。结果结晶紫染色法生物膜半定量检测示,混合组和表葡组均在培养12 h生物膜明显增厚,72 h混合组超过表葡组,组间比较除72 h外,其余各时间点两组比较差异均有统计学意义(P0.05);混合组培养2、4 h时A值低于白念组,但比较差异无统计学意义(P>0.05);6 h后各时间点A值均显著高于白念组(P表皮葡萄球菌和白假丝酵母菌混合生长能形成比单一微生物结构更复杂的混合生物膜;混合生物膜较单一微生物生物膜更厚,可能与表皮葡萄球菌ica A、aap、fbe基因表达增加有关。

关键词：表皮葡萄球菌白假丝酵母菌混合生物膜胞间黏附素基因A 纤维蛋白原结合蛋白基因聚集相关蛋白基因

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表皮葡萄球菌的临床分布及耐药性分析

检验医学与临床 2023年第17期20卷 2599-2602页

作者：李扬威温景祥曲健源牛瑞兵段宝生内蒙古医科大学鄂尔多斯临床医学院内蒙古呼和浩特010000 包头医学院内蒙古包头014000 鄂尔多斯市中心医院检验科内蒙古鄂尔多斯017000

目的探讨表皮葡萄球菌的临床感染分布及耐药情况,为临床科室合理使用抗菌药物和医院感染防控提供参考依据。方法回顾性分析2018年1月至2022年12月鄂尔多斯市中心医院微生物室分离出的表皮葡萄球菌的来源、临床感染科室分布及耐药情况。... 详细信息

目的探讨表皮葡萄球菌的临床感染分布及耐药情况,为临床科室合理使用抗菌药物和医院感染防控提供参考依据。方法回顾性分析2018年1月至2022年12月鄂尔多斯市中心医院微生物室分离出的表皮葡萄球菌的来源、临床感染科室分布及耐药情况。结果487株表皮葡萄球菌中耐甲氧西林表皮葡萄球菌(MRSE)330株,占67.76%。表皮葡萄球菌的标本来源主要为分泌物(26.69%),其次为引流液(24.85%)、血液(17.04%)、尿液(16.02%)、脓液(5.95%)、胸腹水(4.11%)、脑脊液(1.85%)等,临床感染科室主要为神经外科(23.00%),其次为骨科(16.43%)、儿科(12.32%)、普外科(10.27%)、泌尿外科(6.57%)、肾脏内科(6.37%)、重症医学科(4.72%)、内分泌科(3.08%)、血液内科(2.05%)、神经内科(2.05%)、眼科(1.64%)等。在被检测的15种抗菌药物中,表皮葡萄球菌对青霉素的耐药率最高,为91.60%,其次为头孢西丁、红霉素、苯唑西林、左氧氟沙星等。表皮葡萄球菌对万古霉素、替考拉宁、利奈唑胺的敏感率最高,均为100.00%。MRSE对青霉素、苯唑西林、头孢西丁的耐药率为100.00%,对万古霉素、替考拉宁、利奈唑胺的敏感率为100.00%。结论MRSE在临床科室中的耐药情况严重,临床应提高重视,更加合理、规范地应用抗菌药物。

关键词：表皮葡萄球菌耐甲氧西林表皮葡萄球菌抗菌药物耐药率

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表皮葡萄球菌生物膜形成与ica操纵子的相关性研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2003年第6期23卷 428-431页

作者：王勇翔李华林李平洋倪语星闻玉梅复旦大学上海医学院医学分子病毒学实验室上海200032 上海瑞金医院检验科

目的　研究表皮葡萄球菌 (表葡 )生物膜形成与ica操纵子存在之间的相关性并比较 3种检测表皮葡萄球菌生物膜形成的方法。方法　通过PCR法扩增icaA基因以检测ica操纵子的存在。用半定量粘附实验、扫描电子显微镜法和光学显微镜法检测自... 详细信息

目的　研究表皮葡萄球菌 (表葡 )生物膜形成与ica操纵子存在之间的相关性并比较 3种检测表皮葡萄球菌生物膜形成的方法。方法　通过PCR法扩增icaA基因以检测ica操纵子的存在。用半定量粘附实验、扫描电子显微镜法和光学显微镜法检测自临床分离到的 19株表葡的粘附能力。结果　在 19株表葡中 ,通过PCR法测得 7株为icaA阳性 ,通过半定量粘附实验测得 5株icaA(+)菌株为粘附株 ;大多数菌株在含糖培养基中所测得的吸光度 (A)值大于不含糖培养基中所测得的A值。结论　ica操纵子的存在与表葡生物膜形成在统计学上显著相关 (P 葡萄糖有利于大多数表葡的粘附。半定量粘附实验和光镜检测法适用于细菌粘附的初步测定和筛选 ,而扫描电镜检测法有更高的灵敏度以区分粘附菌株和非粘附菌株。

关键词：表皮葡萄球菌细菌生物膜 ica操纵子半定量粘附实验扫描电子显微镜光学显微镜聚合酶链反应

VraSR在表皮葡萄球菌持留菌形成中的作用研究

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VraSR在表皮葡萄球菌持留菌形成中的作用研究

作者：孙士正大理大学

学位级别：硕士

目的:万古霉素耐药双组分系统VraSR(TCS-VraSR)与表皮葡萄球菌的生物膜形成、细胞壁合成代谢、程序性细胞死亡等多种生物学功能相关。本文探讨VraSR在表皮葡萄球菌持留菌形成中的作用机制,为防治表皮葡萄球菌持续性感染和研发抗持留菌... 详细信息

目的:万古霉素耐药双组分系统VraSR(TCS-VraSR)与表皮葡萄球菌的生物膜形成、细胞壁合成代谢、程序性细胞死亡等多种生物学功能相关。本文探讨VraSR在表皮葡萄球菌持留菌形成中的作用机制,为防治表皮葡萄球菌持续性感染和研发抗持留菌药物靶点奠定基础。方法:1.表皮葡萄球菌SE1457药物敏感性和生长曲线:通过试管稀释法测定表皮葡萄球菌SE1457对三种不同作用机制抗生素(万古霉素、环丙沙星和庆大霉素)的MIC值,并测定SE1457的生长曲线,明确研究表皮葡萄球菌持留菌形成所需药物浓度及作用时相。2.表皮葡萄球菌SE1457持留菌形成条件:在表皮葡萄球菌SE1457生长曲线的三个不同生长时期(对数生长期、稳定期、衰亡期)分别加入上述三种抗生素(10×、20×、30×、40×和50×MIC值),连续培养84h,期间每12h取菌一次,NS洗涤后进行CFU计数;CFU计数值不再随着时间发生明显变化确定为持留菌形成。明确表皮葡萄球菌SE1457在不同生长时期、不同药物作用下持留菌形成的特点(时间及形成比例)。3.表皮葡萄球菌SE1457及vraSR突变株持留菌形成差异:选取表皮葡萄球菌SE1457野生株、ΔvraSR突变株、ΔvraSR(p CN51-vraSR)互补株、ΔvraSR(p CN51)质粒空载株为实验菌株,在不同生长时期(对数生长期、稳定期、衰亡期)和不同药物(万古霉素、环丙沙星、庆大霉素)的作用下连续培养84h,每12h取菌液进行CFU计数;比较分析SE1457及ΔvraSR突变株在不同的生长时期及药物作用下持留菌形成的差异。4.转录组测序及验证:表皮葡萄球菌SE1457及ΔvraSR培养至稳定期,加入万古霉素作用至持留菌形成,抽取持留菌的RNA,通过转录组测序(RNA-seq)比较表皮葡萄球菌SE1457及ΔvraSR持留菌形成相关基因的转录水平差异,q RT-PCR验证,并检测部分差异表达基因相关蛋白活性。结果:1.表皮葡萄球菌SE1457对万古霉素、环丙沙星和庆大霉素的敏感性(MIC值)分别为4μg/m L、0.25μg/m L和0.5μg/m L。2.在细菌不同生长时期分别加入不同浓度(10×、20×、30×、40×和50×MIC值)抗生素,作用不同时间后进行CFU计数。表皮葡萄球菌SE1457持留菌形成条件:1)对数生长期SE1457在万古霉素作用60h条件下持留菌形成,上述5个浓度梯度作用下持留菌形成比例分别为7.04×10、5.45×10、5.31×10、4.95×10和4.22×10;在环丙沙星作用36h条件下持留菌形成,形成比例为4.72×10、2.54×10、2.43×10、1.88×10和1.70×10;在庆大霉素作用60h条件下持留菌形成,形成比例为6.40×10、6.36×10、5.43×10、5.56×10和4.02×10。2)稳定期SE1457在万古霉素作用60h条件下持留菌形成,上述5个浓度梯度作用下持留菌形成比例为:1.5×10、1.4×10、1.01×10、1.0×10和6.8×10;在环丙沙星作用36h条件下持留菌形成,持留菌形成比例为1.0×10、4.82×10、6.29×10、6.57×10和7.92×10;在庆大霉素作用60h条件下持留菌形成,持留菌形成比例为3.7×10、1.66×10、4.75×10、3.82×10和3.08×10。3)衰亡期SE1457在万古霉素作用36h条件下持留菌形成,上述5个浓度梯度作用下持留菌形成比例为5.42×10、3.79×10、7.85×10、7.0×10和3.14×10;在环丙沙星作用12h条件下持留菌形成,持留菌形成比例为3.25×10、2.80×10、2.24×10、1.80×10和1.34×10;在庆大霉素作用48h条件下持留菌形成,持留菌形成比例为7.09×10、4.32×10、5.54×10、1.63×10和5.74×10。4)SE1457持留菌丙酮酸水平显著下降:三种药物作用下SE1457稳定期形成的持留菌胞内丙酮酸含量较原始菌显著下降,分别为原始菌含量的57%、53%和51%。3.表皮葡萄球菌SE1457及vraSR突变株持留菌形成差异:1)对数生长期细菌在200μg/m L万古霉素(Van)作用60h条件下,ΔvraSR突变株持留菌形成比例(8.42×10)较SE1457野生株(5.93×10)降低约10倍,?vraSR(p CN51-vraSR)互补株形成比例(4.6×10)与野生株相近,?vraSR(p CN51)空载质粒对照株形成比例(9.07×10)与?vraSR突变株相近。在12.5μg/m L环丙沙星(Cip)作用36h条件下,SE1457、?vraSR、?vraSR(p CN51-vraSR)和?vraS

关键词：表皮葡萄球菌 VraSR 持留菌

表皮葡萄球菌AtlE蛋白介导生物膜起始黏附的相关机制

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复旦学报（医学版） 2006年第5期33卷 569-573页

作者：欧元祝朱于莉陈洁敏秦智强江娟杨晓梅瞿涤复旦大学上海医学院教育部/卫生部医学分子病毒学重点实验室上海200032

目的探讨表皮葡萄球菌atlE基因编码的AtlE蛋白介导生物膜起始黏附的相关机制。方法采用RT-PCR法检测表皮葡萄球菌atlE基因在不同时期的表达水平,用紫外分光光度计检测DNA的方法检测了相应时期的胞外DNA的释放量,并用DNA酶(DNaseⅠ)研究... 详细信息

目的探讨表皮葡萄球菌atlE基因编码的AtlE蛋白介导生物膜起始黏附的相关机制。方法采用RT-PCR法检测表皮葡萄球菌atlE基因在不同时期的表达水平,用紫外分光光度计检测DNA的方法检测了相应时期的胞外DNA的释放量,并用DNA酶(DNaseⅠ)研究表皮葡萄球菌胞外DNA在生物膜形成和起始黏附中的作用;采用pBT2质粒同源重组敲除的方法构建了表皮葡萄球菌1457的atlE基因突变株,研究atlE基因敲除突变对起始黏附能力、生物膜形成及胞外DNA释放能力的影响。结果表皮葡萄球菌atlE基因的表达与胞外DNA的释放量有相关性;DNA酶能影响未成熟生物膜且能降低起始黏附能力;ΔatlE菌株胞外DNA的释放减少,起始黏附能力明显降低,不形成生物膜。结论表皮葡萄球菌atlE基因编码的AtlE蛋白能通过释放胞外DNA在表皮葡萄球菌的生物膜起作用。

关键词：表皮葡萄球菌生物膜 atlE基因胞外DNA

表皮葡萄球菌胞间黏附素基因操纵子对细菌与真菌混合生物膜相关炎症作用影响的体内研究

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中国修复重建外科杂志 2021年第10期35卷 1328-1335页

作者：张国婧万子琳王小燕黄云超周友全陈颖雷玉洁乔丽梅昆明医科大学附属延安医院心脏大血管外科昆明650051 昆明医科大学第三附属医院(云南省肿瘤医院)胸外科昆明650118 昆明医科大学第三附属医院(云南省肿瘤医院)检验科昆明650118

目的探讨表皮葡萄球菌胞间黏附素基因(intercellular adhesion,ica)操纵子对气管导管材料表面表皮葡萄球菌与白假丝酵母菌混合生物膜相关炎症作用影响的体内研究。方法取表皮葡萄球菌标准株RP62A(ica操纵子阳性,阳性组)、ATCC12228(ica... 详细信息

目的探讨表皮葡萄球菌胞间黏附素基因(intercellular adhesion,ica)操纵子对气管导管材料表面表皮葡萄球菌与白假丝酵母菌混合生物膜相关炎症作用影响的体内研究。方法取表皮葡萄球菌标准株RP62A(ica操纵子阳性,阳性组)、ATCC12228(ica操纵子阴性,阴性组)制备浓度为1×10^(6)CFU/mL的菌液,分别与相同浓度的白假丝酵母菌标准株ATCC10231菌液按照1∶1比例制备成混合培养菌液后,与气管导管材料片孵育24 h,扫描电镜观察材料表面混合生物膜形成情况。取4~6月龄新西兰兔30只分为两组(n=15),分别于气管旁植入孵育24 h的阳性组及阴性组气管导管材料。于术前及术后1、3、7 d测量两组兔体质量。术后1、3、7 d,采用ELISA检测试剂盒检测血浆中IL-1β、IL-6、TNF-α和单核细胞趋化蛋白1(monocytechemotactic protein 1,MCP-1)水平;术后7 d,扫描电镜观察取出的气管导管材料片表面混合生物膜形成情况,HE染色观察材料周围组织炎症浸润情况,平板菌落计数法观察心脏、肺、肝脏、肾脏细菌感染情况。结果扫描电镜观察示体外孵育24 h后阳性组可见明显混合生物膜结构,阴性组未见混合生物膜形成。体内实验显示两组术前及术后1、3、7 d体质量比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。与阴性组相比,阳性组术后1 d IL-1β及MCP-1水平,术后3、7 d IL-1β、MCP-1、IL-6、TNF-α水平均升高,组间比较差异有统计学意义(P表皮葡萄球菌残留以及混合生物膜结构,阴性组见极少量表皮葡萄球菌残留,未见混合生物膜结构。HE染色示两组材料周围组织均可见炎症细胞浸润,其中阳性组中性粒细胞及淋巴细胞浸润较阴性组严重。两组心脏、肝脏细菌感染数量差异无统计学意义(P>0.05),阳性组肺、肾脏细菌感染数量高于阴性组(P表皮葡萄球菌与白假丝酵母菌混合感染中可能由于增强了混合生物膜结构及其在体内的传播,导致炎症因子升高,细菌难以清除,感染迁延不愈。

关键词：以生物材料为中心的感染胞间黏附素基因操纵子表皮葡萄球菌白假丝酵母菌混合生物膜兔

表皮葡萄球菌调控蛋白SarA的表达与特性研究

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复旦学报（自然科学版） 2005年第6期44卷 1042-1046,1050页

作者：梁国新范长胜王海蛟高山峨陶菊红张青复旦大学生命科学学院微生物学和微生物工程系上海200433

表皮葡萄球菌是一种条件致病菌,它形成生物膜(biofilm)之后会产生耐药性并降低宿主的免疫力.由icaRADBC操纵子控制合成的胞间多糖黏附素(PIA)是生物膜的主要组成成分.在金黄色葡萄球菌已发现icaADBC的表达受到sarA基因表达的SarA蛋白的... 详细信息

表皮葡萄球菌是一种条件致病菌,它形成生物膜(biofilm)之后会产生耐药性并降低宿主的免疫力.由icaRADBC操纵子控制合成的胞间多糖黏附素(PIA)是生物膜的主要组成成分.在金黄色葡萄球菌已发现icaADBC的表达受到sarA基因表达的SarA蛋白的调控.SarA是一种DNA结合蛋白,可以激活ica操纵子中结构基因的表达.为了研究表皮葡萄球菌中sarA基因是否有类似作用,将能形成生物膜的表皮葡萄球菌RP62A的sarA基因克隆到pET-28a(+)上,在大肠杆菌BL21中实现了表达并进行了纯化,还对其结构进行了模拟;同时,利用穿梭质粒pHPS9将sarA基因通过电转化导入sarA基因缺失的表皮葡萄球菌***(ΔsarA)中.RT-PCR实验证明SarA对icaA基因转录有促进作用.药物敏感实验证实sarA的表达对表皮葡萄球菌的抗药性有重要影响.

关键词：表皮葡萄球菌生物膜 sarA icaA ica操纵子

表皮葡萄球菌serp2169基因敲除突变株的构建及其生长变化

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中国人兽共患病学报 2014年第9期30卷 898-903页

作者：朱涛赵艳丰唐小牛谷生丽王少圣李朝品皖南医学院医学寄生虫学教研室芜湖241002 南京医科大学第二附属医院检验科南京210011

目的探讨表皮葡萄球菌serp2169基因敲除对其生物学功能的影响。方法构建含有壮观霉素抗性基因(spc)的同源重组质粒pMAD-serp2169,电转入表皮葡萄球菌1457株,在42℃条件下振摇培养,利用蓝白斑和抗生素抗性筛选表皮葡萄球菌serp2169基因... 详细信息

目的探讨表皮葡萄球菌serp2169基因敲除对其生物学功能的影响。方法构建含有壮观霉素抗性基因(spc)的同源重组质粒pMAD-serp2169,电转入表皮葡萄球菌1457株,在42℃条件下振摇培养,利用蓝白斑和抗生素抗性筛选表皮葡萄球菌serp2169基因敲除突变株(SE1457-Δserp2169),通过检测OD600值观察其生长曲线的变化,同时检测其培养液的pH值,微量板半定量方法检测serp2169敲除突变对细菌生物膜形成的影响。结果成功构建同源重组质粒pMADserp2169。经PCR扩增和测序验证获得了表皮葡萄球菌serp2169基因敲除突变株。serp2169突变株与野生株的生长曲线在平台期出现了差异,野生株有一个二次生长的过程,而突变株则没有。两株细菌形成生物膜的能力无显著差异。结论表皮葡萄球菌serp2169基因可调控平台期细菌的生长,但对生物膜的形成无影响。

关键词：表皮葡萄球菌同源重组 serp2169基因