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牦牛源表皮葡萄球菌的分离鉴定和生物学特性研究

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中国兽医杂志 2024年第8期60卷 69-73页

作者：邹明昊马弘财王冰艺樊世杰吴庆侠曾江勇西藏农牧学院动物科学学院西藏林芝860000 西藏自治区农牧科学院畜牧兽医研究所西藏拉萨850009 省部共建青稞和牦牛种质资源与遗传改良国家重点实验室西藏拉萨850009

为了解西藏拉萨地区牦牛源表皮葡萄球菌的携带情况,本试验随机采集了26份拉萨地区牦牛鼻拭子样品,采用细菌分离纯化和形态学鉴定、生化鉴定以及16S rDNA测序和同源性比对分析对分离菌株进行鉴定;选取19种常用抗生素,利用K-B药敏纸片扩... 详细信息

为了解西藏拉萨地区牦牛源表皮葡萄球菌的携带情况,本试验随机采集了26份拉萨地区牦牛鼻拭子样品,采用细菌分离纯化和形态学鉴定、生化鉴定以及16S rDNA测序和同源性比对分析对分离菌株进行鉴定;选取19种常用抗生素,利用K-B药敏纸片扩散法对分离菌株进行药敏试验;检测四环素类耐药基因tet(M)和tet(K),林可胺类、氯霉素类、截短侧耳素类、恶唑烷酮类、链阳霉素A类多药耐药基因cfr,β-内酰胺类耐药基因mecA和酰胺醇类耐药基因fexA五种耐药基因,研究分离菌株的耐药性;进行攻毒试验,检测分离菌株的致病性。结果显示,分离得到1株表皮葡萄球菌,命名为LZ-1;LZ-1对氨苄西林、青霉素和红霉素耐药,对多黏菌素B、头孢他啶和克林霉素中介,对头孢曲松、四环素和新霉素等13种抗生素敏感;共检测出tet(M)、tet(K)和mecA三种耐药基因;该菌株对小鼠致病性不强。结果表明,本试验分离出1株牦牛源表皮葡萄球菌,有一定的耐药性,可为其防治提供一定的参考。

关键词：表皮葡萄球菌致病性耐药性

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金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌对奶牛中性粒细胞炎性因子分泌的影响

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解毒化瘀外洗方联合抗生素对钛表面表皮葡萄球菌生物膜的影响

中国畜牧兽医 2024年第8期51卷 3676-3686页

作者：何兴丽周佩瑶张小雪牟泉宙李杨王昭元刘鹏王梓宋杨阳李晓琳沈冰蕾黑龙江八一农垦大学动物科技学院大庆 163319

[目的]探究金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌对奶牛外周血中性粒细胞(PMNs)活力以及炎性因子分泌的影响.[方法]以体外培养的奶牛外周血PMNs为研究对象,用姬姆萨和台盼蓝染色对分离培养的奶牛PMNs进行形态鉴定和细胞活率检测,确定奶牛外周血... 详细信息

[目的]探究金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌对奶牛外周血中性粒细胞(PMNs)活力以及炎性因子分泌的影响.[方法]以体外培养的奶牛外周血PMNs为研究对象,用姬姆萨和台盼蓝染色对分离培养的奶牛PMNs进行形态鉴定和细胞活率检测,确定奶牛外周血PMNs的最佳作用时间.构建金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌诱导的奶牛外周血PMNs感染模型,测定奶牛外周血PMNs对两种细菌的杀伤能力;利用CCK-8法测定奶牛PMNs活力,用ELISA法检测细胞中炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-8和IL-10含量.[结果]体外分离培养的奶牛外周血PMNs纯度达99％,其存活率随培养时间延长逐渐降低,24 h内存活率达85％以上.金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌对数生长期分别为4～7和4～8 h,二者感染奶牛PMNs后,当MOI为10时,2、4、6 h时金黄色葡萄球菌存活率极显著高于表皮葡萄球菌(P＜0.01).与对照组相比,金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌感染PMNs不同时间点细胞中TNF-α、IL-8含量均极显著或显著升高(P＜0.01;P＜0.05);感染3、6、12、24 h时细胞中IL-10含量极显著或显著升高(P＜0.01;P＜0.05);感染6、9、12、24 h时细胞中IL-1β含量极显著或显著升高(P＜0.01;P＜0.05).与金黄色葡萄球菌组相比,感染3 h时表皮葡萄球菌组细胞中TNF-α含量极显著降低(P＜0.01),IL-10、IL-8含量极显著或显著升高(P＜0.01;P＜0.05);感染6 h时表皮葡萄球菌组细胞中TNF-α、IL-1β含量极显著降低(P＜0.01);感染9 h时细胞中TNF-α、IL-8含量极显著或显著升高(P＜0.01;P＜0.05).[结论]金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌均能逃避奶牛外周血 PMNs的吞噬和杀伤作用,二者感染后细胞活力显著降低,能通过调控PMNs中炎性因子的分泌介导先天免疫应答反应,试验结果为靶向PMNs筛选金黄色葡萄球菌性的奶牛乳房炎抗性相关的候选因子研究奠定基础.

关键词：外周血中性粒细胞金黄色葡萄球菌表皮葡萄球菌炎性因子奶牛

来源：博看期刊评论

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中国中医骨伤科杂志 2024年第6期32卷 1-6,12页

作者：于进洋王啸王圣睿王培召史小涛曹国瑞谭红略河南省正骨研究院河南省洛阳正骨医院(河南省骨科医院) 河南洛阳471000 河南中医药大学

目的:观察解毒化瘀外洗方联合抗生素对钛表面表皮葡萄球菌(SE)生物膜形成及成熟生物膜的抑制作用。方法:以耐药表皮葡萄球菌ATCC35984为研究对象,采用微量稀释法分别检测解毒化瘀外洗方、左氧氟沙星、头孢替安、克林霉素、庆大霉素及万... 详细信息

目的:观察解毒化瘀外洗方联合抗生素对钛表面表皮葡萄球菌(SE)生物膜形成及成熟生物膜的抑制作用。方法:以耐药表皮葡萄球菌ATCC35984为研究对象,采用微量稀释法分别检测解毒化瘀外洗方、左氧氟沙星、头孢替安、克林霉素、庆大霉素及万古霉素的最低抑菌浓度(MIC)以及联合用药部分抑菌浓度指数(FICI),筛选出对表皮葡萄球菌生物膜具有较强抑制作用的药物组合。通过倍比稀释活菌涂板计数、结晶紫染色、扫描电子显微镜(SEM)以及激光共聚焦显微镜(CLSM)观察联合用药对钛表面表皮葡萄球菌生物膜形成及成熟生物膜的影响。结果:解毒化瘀外洗方联合左氧氟沙星是对表皮葡萄球菌生物膜具有较强抑制作用的药物组合;无论是定性分析还是定量分析,解毒化瘀外洗方联合左氧氟沙星可以抑制钛表面表皮葡萄球菌生物膜的形成和破坏表皮葡萄球菌成熟生物膜。结论:解毒化瘀外洗方联合左氧氟沙星对钛表面表皮葡萄球菌生物膜形成有抑制作用,且早期抑制作用最强;两药联用可以破坏表皮葡萄球菌成熟生物膜,并且在一定程度上杀灭膜内细菌。

关键词：解毒化瘀外洗方抗生素表皮葡萄球菌生物膜联合用药

赤藓糖醇对表皮葡萄球菌生长和生物膜形成的影响

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工业微生物 2024年第4期54卷 196-202页

作者：邢严李燕马来记高春明杨素珍邵丽上海应用技术大学香料香精化妆品学部上海201418 山东福瑞达生物股份有限公司山东济南250101

表皮葡萄球菌是人体皮肤的常驻优势菌,其丰度和生物学特性的改变会影响皮肤菌群和皮肤的稳态,从而引发皮肤问题甚至皮肤病。赤藓糖醇常作为保湿剂被应用于化妆品中,但关于其对皮肤菌群的影响却鲜有报道。文章以低生物膜形成菌株表皮葡... 详细信息

表皮葡萄球菌是人体皮肤的常驻优势菌,其丰度和生物学特性的改变会影响皮肤菌群和皮肤的稳态,从而引发皮肤问题甚至皮肤病。赤藓糖醇常作为保湿剂被应用于化妆品中,但关于其对皮肤菌群的影响却鲜有报道。文章以低生物膜形成菌株表皮葡萄球菌CCSM0287、产生物膜表皮葡萄球菌ATCC35984和不产膜表皮葡萄球菌ATCC12228为研究对象,研究赤藓糖醇对菌株生长和生物膜形成的影响。结果表明,赤藓糖醇浓度与3种表皮葡萄球菌的生长存在密切关联,在低浓度(0.0625%~0.125%)时,能够促进菌体生长,而高浓度时(0.5%~8%)则会抑制菌体生长,并且不同菌株对同一浓度赤藓糖醇的反应也存在一定的差异。添加2%赤藓糖醇可以明显抑制3种表皮葡萄球菌菌体的生长。采用结晶紫半定量法测得赤藓糖醇能够显著抑制生物膜表皮葡萄球菌ATCC35984生物膜的形成,并且随着赤藓糖醇浓度的增加,其对ATCC35984生物膜形成的抑制作用也会增强。由此可见,赤藓糖醇可作为调节剂调节表皮葡萄球菌菌体的生长和生物膜的形成。

关键词：糖醇赤藓糖醇皮肤菌群表皮葡萄球菌生物膜群体感应

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奶牛源表皮葡萄球菌的分离鉴定

上海畜牧兽医通讯 2024年第1期 20-21,24页

作者：苏比努尔·艾尼黄忠马玉玲战涛殷方芝余海芬李宝龙陶军上海市嘉定区农业技术推广服务中心上海201800

为了探讨生牛乳中表皮葡萄球菌的分离鉴定方法,对某奶牛场的生鲜乳进行细菌分离培养和生化试验鉴定。结果显示:使用氯化钠肉汤(氯化钠质量分数为7.5%)增菌,使用Baird-Parker琼脂培养基选择培养,使用营养琼脂培养基纯化培养,可获得表皮... 详细信息

为了探讨生牛乳中表皮葡萄球菌的分离鉴定方法,对某奶牛场的生鲜乳进行细菌分离培养和生化试验鉴定。结果显示:使用氯化钠肉汤(氯化钠质量分数为7.5%)增菌,使用Baird-Parker琼脂培养基选择培养,使用营养琼脂培养基纯化培养,可获得表皮葡萄球菌分离株;使用vitek2compact全自动微生物分析系统鉴定表皮葡萄球菌分离株,可信水平为良好;本实验获得的表皮葡萄球菌分离株与经典表皮葡萄球菌模式菌株符合率为93%。

关键词：生牛乳表皮葡萄球菌氯化钠肉汤 Baird-Parker琼脂培养基选择培养纯化培养 vitek2compact

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表皮葡萄球菌共生性稳态与皮肤疾病

中华皮肤科杂志 2023年第5期56卷 459-462页

作者：李嘉祺叶枫鞠强上海交通大学医学院附属仁济医院皮肤科上海200127

表皮葡萄球菌对人体兼具保护和致病双重作用:一方面抑制病原菌和炎症、辅助皮肤固有免疫系统,维持皮肤微环境平衡;另一方面具有致病潜能。表皮葡萄球菌具体作用不仅取决于自身,也与宿主免疫系统、其他微生物以及环境的互相作用有关。这... 详细信息

表皮葡萄球菌对人体兼具保护和致病双重作用:一方面抑制病原菌和炎症、辅助皮肤固有免疫系统,维持皮肤微环境平衡;另一方面具有致病潜能。表皮葡萄球菌具体作用不仅取决于自身,也与宿主免疫系统、其他微生物以及环境的互相作用有关。这种互相作用的平衡即为表皮葡萄球菌共生性稳态,当稳态被打破后就可能发生多种皮肤疾病,如寻常痤疮、特应性皮炎、玫瑰痤疮以及黑素瘤。影响表皮葡萄球菌共生性稳态的因素包括温度、氧含量和营养等环境条件、抗生素以及其他微生物的数量、微生态多样性等。本文对近年来表皮葡萄球菌共生性稳态的研究进行综述。

关键词：表皮葡萄球菌微生物群落寻常痤疮皮炎特应性红斑痤疮痣和黑素瘤宿主与微生物相互作用

表皮葡萄球菌SE1457与vraSR突变株转录组测序比较分析

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中国病原生物学杂志 2022年第11期17卷 1241-1246页

作者：孙士正孟媛媛张维娜刁德睿陈晓婷武有聪大理大学基础医学院病原生物学综合实验室云南大理671000

目的筛选和验证VraSR调控的下游靶基因,为表皮葡萄球菌vraSR生物学功能研究提供参考。方法在加与未加万古霉素(Van+/Van-)两种条件下,抽提表皮葡萄球菌SE1457及其同源性vraSR突变株RNA,构建cDNA文库(每个菌株3个独立样品),采用Illumina ... 详细信息

目的筛选和验证VraSR调控的下游靶基因,为表皮葡萄球菌vraSR生物学功能研究提供参考。方法在加与未加万古霉素(Van+/Van-)两种条件下,抽提表皮葡萄球菌SE1457及其同源性vraSR突变株RNA,构建cDNA文库(每个菌株3个独立样品),采用Illumina HiSeq进行转录组测序,差异表达基因筛选标准为Q value0.05)。结论表皮葡萄球菌VraSR可能通过ica途径调控生物膜形成,并通过调节肽聚糖合成相关基因的转录间接影响耐药性。

关键词：万古霉素耐药相关双组分系统转录组测序分析表皮葡萄球菌

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表皮葡萄球菌LrgAB的生物学功能研究

表皮葡萄球菌LrgAB的生物学功能研究

作者：陈晓婷大理大学

学位级别：硕士

目的:CidA-LrgAB系统与细菌程序性死亡、细菌裂解和丙酮酸代谢等生物学功能密切相关,但在葡萄球菌中的功能尚不清楚。本研究通过构建表皮葡萄球菌SE1457 lrgAB基因敲除突变株研究其生物学表型与相关基因的表达情况,初步探索LrgAB在表皮... 详细信息

目的:CidA-LrgAB系统与细菌程序性死亡、细菌裂解和丙酮酸代谢等生物学功能密切相关,但在葡萄球菌中的功能尚不清楚。本研究通过构建表皮葡萄球菌SE1457 lrgAB基因敲除突变株研究其生物学表型与相关基因的表达情况,初步探索LrgAB在表皮葡萄球菌细胞代谢、生物膜形成和压力胁迫应激等生物学功能中的作用,为防治表皮葡萄球菌引起的持续性感染奠定基础。方法:1.表皮葡萄球菌SE1457 LrgAB同源性分析及SE1457 lrgAB基因敲除突变株的构建:以表皮葡萄球菌SE1457基因组DNA为模板,重叠PCR扩增lrgAB基因的上/下游约2.0kb的同源臂片段（att B1-DS-US-att B2）,与穿梭质粒p KOR1（含attp位点与cdd B位点）连接后经BP反应构建p KOR1-ΔlrgAB重组质粒,转化至大肠杆菌DC10B修饰后再电击转入SE1457,经Atc诱导筛选获得疑似ΔlrgAB突变株;同样以表皮葡萄球菌SE1457基因组DNA为模板PCR扩增获得lrgAB基因（含SD序列）,并经T连接酶与质粒p CN51连接获得p CN51-lrgAB重组质粒,分别电击转入ΔlrgAB突变株和SE1457野生株,通过PCR、RT-PCR、q RT-PCR及测序验证ΔlrgAB突变株、ΔlrgAB（p CN51-lrgAB）互补株、ΔlrgAB（p CN51）空载株和SE1457（p CN51-lrgAB）对照株。2.表皮葡萄球菌ΔlrgAB突变株生物学表型研究:试管稀释法检测表皮葡萄球菌SE1457及其ΔlrgAB突变株的药物敏感性;微量平板半定量法检测表皮葡萄球菌的生物膜形成情况,q RT-PCR检测生物膜内e DNA含量;通过1%Triton X-100诱导菌株自溶,透射电镜观察细胞壁显微结构;检测表皮葡萄球菌在应对渗透压（0.5M、1.0M、1.5M Na Cl）、酸（p H6.0、p H5.0、p H4.0 HCl）和过氧化氢（0.25m M、0.5m M、0.75m M HO）等压力胁迫因子的耐受力;检测表皮葡萄球菌SDH（琥珀酸脱氢酶）和NOX（NADH氧化酶）的活性。3.转录组测序（RNA-Seq）:抽提表皮葡萄球菌SE1457及ΔlrgAB突变株RNA,采用Illumina测序技术对ΔlrgAB突变株和SE1457进行转录组测序,筛选出SE1457及ΔlrgAB突变株差异表达基因,并对差异表达基因进行GO、KEGG等生物信息学分析,分析表皮葡萄球菌LrgAB生物学功能。结果:1.表皮葡萄球菌SE1457 LrgAB同源性分析:SE1457 lrg A/lrg B基因座位为serp2026/serp2027,由459nt lrg A/702nt lrg B核苷酸组成,编码产生152aa Lrg A/233aa Lrg B氨基酸组成的蛋白质。SE1457 lrg A/lrg B与表皮葡萄球菌RP62A和SE12228类似物核苷酸序列的同源性分别约为98%和97%,与金黄色葡萄球菌的同源性为62%-73%,与变异链球菌的同源性为47.5%-55.5%。SE1457Lrg A/Lrg B与表皮葡萄球菌RP62A和SE12228类似物氨基酸序列的同源性分别约为99%和97%,与金黄色葡萄球菌的同源性为54%-72%,与变异链球菌的同源性为29%-47%。2.表皮葡萄球菌SE1457 lrgAB基因突变株及互补株的构建及鉴定:重叠PCR扩增获得表皮葡萄球菌SE1457 lrgAB基因的上/下游同源臂片段（att B1-DS-US-att B2）(2050bp),与质粒p KOR1进行BP反应成功构建p KOR1-ΔlrgAB重组质粒,转入SE1457后经Atc诱导筛选获得疑似ΔlrgAB突变株。PCR显示ΔlrgAB突变株中未扩增出lrgAB片段,测序结果提示大小为1164bp的lrgAB基因从SE1457基因组中敲除;q RT-PCR结果显示,ΔlrgAB突变株中lrg A/lrg B基因未见转录,与SE1457野生株相比,ΔlrgAB（p CN51-lrgAB）互补株及SE1457（p CN51-lrgAB）对照株中lrg A基因转录水平均约为1.8倍,而lrg B基因转录水平分别约为0.2倍和1.3倍。3.表皮葡萄球菌ΔlrgAB突变株生物学表型检测结果:（1）试管稀释法结果显示,与SE1457相比,ΔlrgAB突变株对作用于细胞壁的抗生素（万古霉素、氨苄青霉素、杆菌肽）和作用于蛋白质的抗生素（氯霉素、庆大霉素）的药物敏感性均升高,而ΔlrgAB（p CN51-lrgAB）互补株和SE1457（p CN51-lrgAB）对照株的药物敏感性基本回复至野生株SE1457水平,但ΔlrgAB突变株对环丙沙星和青霉素

关键词：表皮葡萄球菌 LrgAB 生物膜环境胁迫因子自溶

黄绵马酸BB联合红霉素抑制表皮葡萄球菌及其生物被膜的形成研究

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中草药 2022年第8期53卷 2417-2427页

作者：蔡芝玲莫梓童郑诗倩谢胜军蓝诗华沈志滨广东药科大学中药学院广东广州510006 广东省局部精准药物递药制剂工程技术研究中心广东广州510006 广东省化妆品工程技术研究中心广东广州510006

目的探讨黄绵马酸BB与红霉素联用对表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis,SE)抑菌活性和生物被膜形成的作用,为黄绵马酸BB开发成为一种新型的生物被膜抑制剂提供理论基础。方法采用微量稀释法分别测定黄绵马酸BB与红霉素联用对11株S... 详细信息

目的探讨黄绵马酸BB与红霉素联用对表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis,SE)抑菌活性和生物被膜形成的作用,为黄绵马酸BB开发成为一种新型的生物被膜抑制剂提供理论基础。方法采用微量稀释法分别测定黄绵马酸BB与红霉素联用对11株SE的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC),并采用微量棋盘稀释法测定联合用药的部分抑菌浓度指数(fractional inhibitory concentration index,FICI)与最低抑膜浓度(minimum biofilm inhibitory concentration,MBIC);采用时间-杀菌曲线法,评价联合用药对SE的动态杀菌作用;通过二甲氧唑黄[2.3-bis(2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl)-5-[carbonyl(phenylamino)]-2H-tetrazolium hydroxide,XTT]比色法、半定量黏附实验和扫描电子显微镜(scanning electron microscope,SEM)观察,评价联合用药对生物被膜形成各阶段的清除作用;采用qRT-PCR技术检测生物被膜形成相关基因表达的变化,探索联合用药可能的分子机制。结果黄绵马酸BB与红霉素联用的FICI为(0.51±0.00)~(0.75±0.05),表现为相加作用;联合用药对受试菌呈动态抑制和杀灭作用,整体呈相加作用;生物被膜形成的各阶段,联合用药组均可显著抑制受试菌的代谢活性及生物被膜总量的形成,并减少细菌量及胞外聚合物的形成。联合用药组在耐药菌株SE04的生物被膜形成的各阶段均下调基因aap及sarA的表达,并上调基因agrA的表达;对于敏感菌株SE08,在生物被膜形成的各阶段均下调aap、sarA的表达,在黏附及聚集期上调agrA的表达。结论黄绵马酸BB与红霉素联用可以有效抑制SE及其生物被膜的形成,并呈相加作用。抗生物被膜效应与抑制细菌代谢活性、生物被膜总量以及生物被膜形成相关基因的表达有关。

关键词：香鳞毛蕨黄绵马酸BB 表皮葡萄球菌生物被膜联合用药