检索结果-南通市图书馆

表小檗碱体外大鼠肝微粒体孵育代谢产物鉴定及对CYP2D6酶活性的抑制作用

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国中药杂志 2014年第19期39卷 3855-3859页

作者：杨晓燕叶静孙桂霞薛宝娟赵园园苗培培苏瑾张玉杰北京中医药大学中药学院北京100102

表小檗碱是黄连中一种主要的异喹啉类生物碱,具有多种重要的药理活性。该实验利用体外大鼠肝微粒体孵育体系,采用LC-MS/MS分析鉴定表小檗碱体外大鼠肝微粒体(RLM)共孵育后的Ⅰ相和Ⅱ相代谢产物,采用cocktail探针药物法,通过同时测定美... 详细信息

表小檗碱是黄连中一种主要的异喹啉类生物碱,具有多种重要的药理活性。该实验利用体外大鼠肝微粒体孵育体系,采用LC-MS/MS分析鉴定表小檗碱体外大鼠肝微粒体(RLM)共孵育后的Ⅰ相和Ⅱ相代谢产物,采用cocktail探针药物法,通过同时测定美托洛尔、氨苯砜、非那西丁、氯唑沙宗、甲苯磺丁脲的含量变化,评价不同浓度表小檗碱对大鼠肝微粒体CYP2D6,CYP3A4,CYP1A2,CYP2E1,CYP2C9亚型活性的影响。结果表明,表小檗碱在大鼠肝脏可发生Ⅰ相和Ⅱ相代谢,从表小檗碱的大鼠体外肝微粒体温孵体系中鉴定出2个Ⅰ相代谢产物和3个Ⅱ相代谢产物;表小檗碱对肝脏CYP2D6酶呈显著抑制作用,半数抑制浓度IC50为35.22μmol·L-1,而对CYP3A4,CYP1A2,CYP2E1,CYP2C9酶的活性没有明显的影响,提示表小檗碱可能存在基于CYP2D6酶的药物相互作用。该研究可为合理开发利用表小檗碱提供实验依据。

关键词：表小檗碱大鼠肝微粒体代谢产物 CYP450酶

表小檗碱和小檗碱与牛血清白蛋白相互作用的比较分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国新药杂志 2016年第6期25卷 705-711页

作者：苗培培赵园园苗青郭嫦娥陈红影陈宁张玉杰马双成北京中医药大学中药学院北京100102 中国食品药品检定研究院中药民族药检定所北京100050

目的:比较表小檗碱和小檗碱与牛血清白蛋白(BSA)相互作用,并探讨与结构的关系。方法:采用荧光猝灭法与紫外分光光度法探讨表小檗碱和小檗碱对BSA的猝灭机制,测定不同温度下与血浆蛋白的结合常数、结合位点数及结合力类型。结果:表小檗... 详细信息

目的:比较表小檗碱和小檗碱与牛血清白蛋白(BSA)相互作用,并探讨与结构的关系。方法:采用荧光猝灭法与紫外分光光度法探讨表小檗碱和小檗碱对BSA的猝灭机制,测定不同温度下与血浆蛋白的结合常数、结合位点数及结合力类型。结果:表小檗碱和小檗碱都能够使BSA的内源性荧光发生淬灭,其荧光淬灭过程均是静态淬灭。在25,30和37℃时,表小檗碱和小檗碱与BSA的结合常数分别为9.623 9,10.087 6和10.206 0×10~4L·mo L^(-1),以及11.373 5,11.264 3和9.869 0×10~4L·mo L^(-1);结合分子数均为1;表小檗碱-BSA体系的结合力以疏水作用为主导,而小檗碱-BSA体系的结合是由彼此产生的静电及疏水力共同作用的结果。结论:表小檗碱和小檗碱与血浆蛋白具有中等强度的结合,小檗碱与BSA的结合能力稍高于表小檗碱,但差异不大;两者结合力类型明显不同,这可能与母核上甲氧基的位置和极性大小有关。

关键词：表小檗碱小檗碱牛血清白蛋白相互作用光谱法结构相关性

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

表小檗碱体外抑制黄嘌呤氧化酶活性作用研究

中药药理与临床 2021年第1期37卷 79-84页

作者：岳亮梁思成邱文乔曾静吴建明西南医科大学药学院泸州646000

目的:研究表小檗碱(EBB)对黄嘌呤氧化酶活性的体外抑制作用并确证其结合性能。方法:以黄嘌呤为底物建立黄嘌呤氧化酶体外孵育模型,加入不同浓度的表小檗碱与底物共孵育后,采用高效液相色谱法同时检测底物黄嘌呤及产物尿酸含量,进而计算... 详细信息

目的:研究表小檗碱(EBB)对黄嘌呤氧化酶活性的体外抑制作用并确证其结合性能。方法:以黄嘌呤为底物建立黄嘌呤氧化酶体外孵育模型,加入不同浓度的表小檗碱与底物共孵育后,采用高效液相色谱法同时检测底物黄嘌呤及产物尿酸含量,进而计算表小檗碱对黄嘌呤氧化酶的IC50值并绘制抑制动力学,再通过分子对接技术与生物膜干涉技术确证表小檗碱与黄嘌呤氧化酶的结合性能。结果:与空白对照组相比,表小檗碱能显著抑制黄嘌呤氧化酶活性(P表小檗碱对黄嘌呤氧化酶的抑制作用属于竞争-非竞争混合型抑制,抑制常数Ki为0.22μmol/L,Kis为0.10μmol/L。此外,分子对接结果显示表小檗碱与黄嘌呤氧化酶有良好的结合性能,对接分数值为5.6,二者主要形成氢键,范德华力等作用。生物膜干涉研究结果表明表小檗碱与黄嘌呤氧化酶蛋白有直接且可逆的相互作用。结论:表小檗碱能在体外较强地抑制黄嘌呤氧化酶活性,可将其作为降尿酸候选药物。

关键词：表小檗碱黄嘌呤氧化酶抑制作用分子对接生物膜干涉法

HPLC法测定黄连复方汤中盐酸小檗碱、表小檗碱、药根碱、盐酸巴马汀和甘草酸

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中草药 2011年第2期42卷 285-287页

作者：纪丽莎张先福喻卫武陈安良浙江农林大学亚热带森林培育国家重点实验室培育基地浙江临安311300

目的测定黄连复方汤中盐酸小檗碱、表小檗碱、药根碱、盐酸巴马汀和甘草酸5种成分。方法采用高效液相色谱法。结果盐酸小檗碱、表小檗碱、药根碱、盐酸巴马汀和甘草酸的线性范围分别为:375～1?500 ng、9.091～44.440 ng、40.130～67.000... 详细信息

目的测定黄连复方汤中盐酸小檗碱、表小檗碱、药根碱、盐酸巴马汀和甘草酸5种成分。方法采用高效液相色谱法。结果盐酸小檗碱、表小檗碱、药根碱、盐酸巴马汀和甘草酸的线性范围分别为:375～1?500 ng、9.091～44.440 ng、40.130～67.000 ng、130～2 064 ng、2.400～60.000 ng(r>0.999),平均加样回收率大于98.0%。结论该方法准确,重现性好,能更好地控制黄连复方汤的质量。

关键词：黄连复方汤盐酸小檗碱表小檗碱药根碱盐酸巴马汀甘草酸

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

表小檗碱体内外生物代谢反应研究

表小檗碱体内外生物代谢反应研究

作者：叶静北京中医药大学

学位级别：硕士

表小檗碱是黄连中的一种重要的异喹啉类生物碱,研究表明表小檗碱具有较强的抗氧化活性,并且能够抑制醛糖还原酶,从而降低血糖,其作用强于小檗碱。与其它生物碱类似,有关表小檗碱的药理作用受到了广泛的关注,具有良好的开发应用前景。近... 详细信息

表小檗碱是黄连中的一种重要的异喹啉类生物碱,研究表明表小檗碱具有较强的抗氧化活性,并且能够抑制醛糖还原酶,从而降低血糖,其作用强于小檗碱。与其它生物碱类似,有关表小檗碱的药理作用受到了广泛的关注,具有良好的开发应用前景。近年来有关表小檗碱的药代动力学研究也逐渐受到重视,研究发现表小檗碱在体内外均可发生广泛的代谢,大鼠灌胃表小檗碱后的尿液、粪便和血液,以及表小檗碱的肝微粒体温孵和肠菌孵育样品中均可检出其代谢产物;此外,在体外人肝微粒体温孵体系中表小檗碱对人CYP2D6酶显示较强的抑制作用。但有关表小檗碱体内代谢的部位、代谢途径以及参与其代谢的药代酶等信息目前尚不十分清楚。为进一步阐明表小檗碱的体内药代动力学规律,为表小檗碱的开发利用提供依据,也为黄连配伍机理研究提供实验依据,本课题在已有研究的基础上,结合最近中药药代动力学研究中涌现的新技术和新方法,对表小檗碱开展了以下几方面的药代动力学探索研究:1.建立LC-MS/MS方法,比较灌胃和静注给药表小檗碱后大鼠体内代谢产物的差异,鉴定表小檗碱在肝微粒体中的I相和II相代谢产物,及体外肠菌培养模型中的代谢产物,以确定表小檗碱在体内的代谢部位和代谢途径;2.采用化学抑制剂试验和重组人源CYP450酶筛选实验相结合的方法鉴定人肝微粒体(HLM)和大鼠肝微粒体(RLM)中参与表小檗碱代谢的CYP450酶的亚型;3.采用大鼠体内灌胃诱导,cocktail探针底物肝微粒体体外温孵法考察表小檗碱对主要肝药酶亚型活性的影响;并研究体外不同浓度表小檗碱对CYP2D6酶的抑制作用。现将整篇论文完成过程简述如下:第一部分文献综述此部分对黄连以及黄连中的重要生物碱表小檗碱的研究进展,药物代谢研究方法,代谢酶介导的药物相互作用进行分析、概括和总结。第二部分实验研究1 LC-MS/MS鉴定表小檗碱体内体外主要代谢产物1.1灌胃和静注给药表小檗碱后大鼠体内代谢产物的比较本部分实验采用LC-MS/MS,比较灌胃和静注给药表小檗碱后大鼠体内代谢产物的差异。首先收集空白大鼠尿液、粪便、胆汁及血液,然后灌胃给药表小檗碱50mg·kg-1后将大鼠放入代谢笼中收集尿液、粪便,胆管插管收集胆汁及颈动脉插管收集血液。在正离子检测模式下,将给药后样品与空白样品一级全扫描质谱对比分析,寻找原药可能的I、II相代谢产物,然后对这些代谢产物的分子离子进行多级质谱分析,并结合药物在生物体内的代谢规律,阐述各代谢产物的结构。在灌胃给药大鼠尿液中鉴定出原药及12个代谢产物,粪便中鉴定出原药及4个代谢产物,胆汁中鉴定出原药及3个代谢产物,血液中鉴定出原药及3个代谢产物。在静注给药大鼠尿液中鉴定出原药及12个代谢产物,粪便中鉴定出原药及4个代谢产物,胆汁中鉴定出原药及3个代谢产物,血液中仅鉴定出原型。表小檗碱进入体内后部分以原药直接从大鼠尿液和粪便中排出,在大鼠体内的发生的I相生物转化主要是去甲基(代谢产物III、IV)、二去甲基(代谢产物II),还原反应(代谢产物V)和氧化反应(代谢产物VI),II相生物转化主要是葡萄糖轭合反应(代谢产物VIIIII)。灌胃和静注表小檗碱后大鼠体内代谢产物基本相同,推测表小檗碱在胃肠道可能较少代谢,代谢转化主要发生在吸收入血后环节,肝脏是其重要的代谢器官。1.2表小檗碱在肝脏中I相代谢产物的鉴定为了研究表小檗碱在肝脏中的I相代谢产物,我们设计了肝微粒体体外温孵实验。大鼠灌胃50mg·kg-1的表小檗碱后,主要有5个I相代谢产物,分别是代谢产物Ⅱ。对于表小檗碱经人体肝药酶的代谢,我们从HLM进行了考察,仅得到2个代谢产物Ⅲ和IV。从大鼠的肝脏组织制备的微粒体,在体外与表小檗碱共孵育,所得结果与HLM温孵结果相似。因此我们认为,在肝微粒体体外代谢模型中,我们能够检测到的表小檗碱的主要I相代谢产物为Ⅲ和Ⅳ。1.3表小檗碱在肝脏中Ⅱ相代谢产物的鉴定在表小檗碱体外HLM温孵体系中,我们共鉴定出3个Ⅱ相代谢产物,其分别为代谢产物Ⅹ、Ⅺ和Ⅻ。自大鼠的肝脏组织制备的微粒体温孵体系中的代谢产物,与HLM温孵结果相似。1.4表小檗碱在体外肠菌培养模型中代谢产物的鉴定通过体外肠菌培养模型,我们研究了表小檗碱经肠道菌群代谢后的代谢产物,仅鉴定出1个代谢产物,其为代谢产物Ⅲ。灌胃和静注表小檗碱产生基本相同的代谢产物,由此我们推测表小檗碱在胃肠道发生代谢的可能性较小,代谢转化主要发生在吸收入血后环节。经体外肝微粒体温孵模型和肠菌培养模型中的代谢产物研究,我们进一步证实了上述推测。肝脏是表小檗碱的重要代谢器官,主要发生Ⅰ相脱甲基及Ⅱ相葡萄糖结合反应,而胃肠道和肝外代谢也是表小檗碱的代谢途径。这为进一步研究表小檗碱的生物代谢转化过程提供了科学依据。2表小檗碱CYP450代谢酶亚型的鉴定为了进一步考察负责代谢表小檗碱的肝脏CYP450酶的亚型

关键词：表小檗碱 CYP450 代谢途径代谢产物代谢酶鉴定抑制作用

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

表小檗碱抗胃癌的作用及机制研究

表小檗碱抗胃癌的作用及机制研究

作者：余敏西南大学

学位级别：硕士

目的:世界卫生组织2020年的统计数据显示,我国胃癌新发病例在所有恶性肿瘤中高居第三,严重威胁着我国居民的健康。尽管目前已有许多治疗胃癌的上市药品,但是不少药品存在副作用大,延长患者生存期能力较差等问题。因此,寻找安全有效的胃... 详细信息

目的:世界卫生组织2020年的统计数据显示,我国胃癌新发病例在所有恶性肿瘤中高居第三,严重威胁着我国居民的健康。尽管目前已有许多治疗胃癌的上市药品,但是不少药品存在副作用大,延长患者生存期能力较差等问题。因此,寻找安全有效的胃癌治疗药物是非常必要。表小檗碱是我国传统中药材黄连中的一种活性成分,它有着广泛的药理作用。本研究旨在探讨黄连中表小檗碱对胃癌的抑制作用以及其中潜在的作用机制,为表小檗碱的抗胃癌药理作用提供理论基础。方法:1.根据实验室已经建立的黄连生物碱提取分离方法,从黄连中提取分离得到高纯度的表小檗碱用于实验。采用MTT实验评价表小檗碱对不同胃癌细胞活力的影响。细胞克隆形成实验评价表小檗碱对不同胃癌细胞系克隆形成能力的影响。构建MKN-45皮下移植荷瘤裸鼠模型用来评价表小檗碱在裸鼠体内对肿瘤生长的影响,收集裸鼠各脏器计算其脏器指数。通过Elisa实验检测裸鼠血清中TNF-α和IL-6的含量。运用高效液相色谱分析表小檗碱在裸鼠粪便、肿瘤中的富集情况和含量。2.采用转录组测序技术分析表小檗碱作用于MKN-45细胞后,相较于对照组所产生的差异基因,通过GO富集分析、KEGG富集分析等探究表小檗碱对胃癌细胞的潜在作用机制。采用RT-q PCR方法对转录组数据进行验证。3.采用流式细胞术检测表小檗碱对胃癌细胞MKN-45的细胞周期与凋亡的影响,随后采用Hoechst 33258染色后观察表小檗碱对MKN-45细胞核形态的影响。通过DCFH-DA染色和Di OC6(3)染色检测表小檗碱对MKN-45细胞内活性氧和线粒体膜电位的影响。采用p53 siRNA转染MKN-45细胞,抑制p53蛋白的表达,MTT实验和流式细胞术用于检测p53表达抑制后表小檗碱对MKN-45细胞产生的影响。蛋白免疫印迹实验用于检测相关蛋白的表达。4.16S rDNA扩增子测序用来检测表小檗碱对裸鼠肠道微生物的影响,通过Elisa实验检测裸鼠结肠、肿瘤以及瘤旁组织中TNF-α和IL-6的表达水平。蛋白免疫印迹实验和免疫组化检测相关蛋白的表达水平。结果:1.表小檗碱对胃癌细胞MKN-45、HGC-27和NCI-N87的细胞活力具有抑制效果,且对MKN-45细胞的抑制效果相对较好。此外,表小檗碱可以抑制MKN-45和HGC-27细胞的克隆形成能力。在裸鼠体内,表小檗碱可以显著抑制MKN-45荷瘤裸鼠的肿瘤生长,降低血清中TNF-α和IL-6的含量,且对各脏器比重没有显著性影响。高效液相色谱检测到表小檗碱存在于裸鼠粪便、肿瘤组织中,且在肿瘤组织中发现了少量的其他生物碱,分别为药根碱、黄连碱、小檗碱和巴马汀,但在裸鼠粪便中只检测到表小檗碱,而未发现其他生物碱的存在。2.表小檗碱的作用使MKN-45细胞产生上千的差异基因,经过GO富集和KEGG富集后,发现这些差异基因显著富集在细胞周期、p53信号通路等代谢途径和细胞凋亡相关的生物过程中。3.表小檗碱可以诱导MKN-45细胞凋亡,并使细胞周期阻滞在S期,升高MKN-45细胞内的活性氧,诱导其线粒体膜电位下降。进一步研究发现表小檗碱促进MKN-45细胞的p53、p21、Cytochrome C、Cleaved-caspase 3、Bax等蛋白的表达,同时降低Bcl-2、XIAP蛋白的表达。p53的表达被抑制后,表小檗碱抑制MKN-45细胞增殖的效果降低,表小檗碱诱导MKN-45细胞凋亡的作用减弱。4.表小檗碱对荷瘤裸鼠肠道微生物的多样性和结构有一定的影响,在表小檗碱高剂量组中,Parabacteroides distasonis的相对丰度较模型组显著升高,且裸鼠结肠、瘤旁和肿瘤组织中TNF-α的表达水平较模型组显著降低。在肿瘤组织中表小檗碱高剂量组相较于模型组,p53和Bax等蛋白表达增加,而p-p65和Bcl-2等蛋白表达降低。结论:表小檗碱可以抑制胃癌细胞的增殖,并通过调节p53信号通路诱导MKN-45细胞凋亡和周期阻滞。同时表小檗碱可以一定程度上抑制MKN-45荷瘤裸鼠肿瘤的生长,其作用机制可能是通过影响肠道微生物,抑制TNF-α的表达,进一步调节NF-κB/p53/Bax信号通路减缓肿瘤的发展。

关键词：表小檗碱胃癌凋亡周期肠道微生物

HPLC法同时测定双花百合片中绿原酸、表小檗碱、巴马汀、小檗碱的含量

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

中华中医药杂志 2017年第4期32卷 1775-1778页

作者：相婷霍晓奎丛海建王超马骁驰吴斌扬子江药业集团有限公司泰州225321 大连医科大学药学院大连116044 扬子江药业集团上海海尼药业有限公司上海201318

目的:建立同时测定双花百合片中绿原酸、表小檗碱、巴马汀、小檗碱4种主要成分的高效液相色谱方法。方法:通过高效液相色谱分析双花百合片甲醇提取液,采用Kromasil C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相乙腈(A)-0.05mol/L磷酸二氢钾水溶... 详细信息

目的:建立同时测定双花百合片中绿原酸、表小檗碱、巴马汀、小檗碱4种主要成分的高效液相色谱方法。方法:通过高效液相色谱分析双花百合片甲醇提取液,采用Kromasil C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相乙腈(A)-0.05mol/L磷酸二氢钾水溶液(C,pH=3)(0-20 min,5%A-20%A;20-65min,20%A),梯度洗脱;体积流量0.8mL/min;检测波长为320nm;柱温30℃;进样量10μL。结果:绿原酸、表小檗碱、巴马汀、小檗碱进样量分别在5.0-500.0μg/mL(r=0.9994)、10.0-500.0μg/mL(r=0.9967)、10.0-1 000.0μg/mL(r=0.9985)、20.0-1 000.0μg/mL(r=0.9994)范围内线性关系良好,平均加样回收率分别为99.63%、101.22%、98.30%、98.93%,RSD值分别为0.97%、1.58%、1.48%、1.93%。结论:本方法简便、准确、重复性好,可为双花百合片的质量标准研究提供参考。

关键词：双花百合片 HPLC 绿原酸表小檗碱巴马汀小檗碱

HPLC同时测定“三热论”方各纯化部位中药根碱、表小檗碱、黄连碱、巴马汀和小檗碱的含量

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国实验方剂学杂志 2012年第14期18卷 110-113页

作者：皮文霞朱鑫仙方婷赵冕南京中医药大学药学院南京210046

目的:测定"三热论"方各纯化部位中药根碱、表小檗碱、黄连碱、巴马汀和小檗碱的含量。方法:"三热论"复方经HPD 400大孔树脂,分别用10%,30%,60%,90%的乙醇洗脱后,采用HPLC测定4个洗脱部位中5种生物碱的含量。结果:HPD 400大孔树脂纯化后,... 详细信息

目的:测定"三热论"方各纯化部位中药根碱、表小檗碱、黄连碱、巴马汀和小檗碱的含量。方法:"三热论"复方经HPD 400大孔树脂,分别用10%,30%,60%,90%的乙醇洗脱后,采用HPLC测定4个洗脱部位中5种生物碱的含量。结果:HPD 400大孔树脂纯化后,30%乙醇洗脱部位生物碱含量最高。结论:大孔树脂纯化法简单易行,30%纯化部位经HPLC检测,其中生物碱含量最高,为有效部位筛选奠定了基础。

关键词： “三热论”方药根碱表小檗碱黄连碱巴马汀小檗碱

基于IGF1R/PI3K/GSK3β通路探讨表小檗碱改善糖尿病脑病的作用机制

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

基于IGF1R/PI3K/GSK3β通路探讨表小檗碱改善糖尿病脑病的作用机制

作者：李春明西南大学

学位级别：硕士

背景:糖尿病脑病(diabetic encephalopathy,DE)是糖尿病中枢神经系统的并发症,主要临床表现为认知功能障碍,且脑内tau蛋白异常磷酸化被认为是DE的主要病理学特征之一,然而具体的发病机制尚不完全清楚。由于医学技术的不断进步,糖尿病患... 详细信息

背景:糖尿病脑病(diabetic encephalopathy,DE)是糖尿病中枢神经系统的并发症,主要临床表现为认知功能障碍,且脑内tau蛋白异常磷酸化被认为是DE的主要病理学特征之一,然而具体的发病机制尚不完全清楚。由于医学技术的不断进步,糖尿病患者寿命明显延长,这也导致DE的患病率持续增加。因此,去发掘治疗DE的有效药物及其可能的发病机制至关重要。古典医籍记载黄连具有治疗“消渴病”和“痴呆症”的作用,现代研究也证实了黄连在治疗糖尿病并发症及神经退行性疾病方面效果显著,但主要以研究小檗碱为主,对于黄连中其他生物碱在这方面的研究并未见报道。目的:本研究以高糖诱导的原代神经元为DE细胞模型,试图从黄连中系统分离筛选出抗DE有效的生物碱单体,然后在db/db小鼠DE动物模型中进行药效评价,最后分别在体内外初步探讨其相关作用机制。方法:1.黄连生物碱提取分离及抗DE活性筛选采用酸水渗漉法从黄连中提取总生物碱,然后分别用石油醚,二氯甲烷和正丁醇进行萃取,采用HPLC分析每一个部位的生物碱含量,对其中主要生物碱部位进行硅胶柱色谱分离,根据生物碱的极性大小将总生物碱划分为几个不同的段落。采用高浓度葡萄糖诱导原代神经元建立DE细胞模型,以磷酸化的tau蛋白为药效评判指标,然后用得到的主要生物碱段干预神经元,筛选出活性最好的生物碱段落。进一步采用凝胶柱色谱对有效段落再次分离纯化得到主要生物碱单体,利用核磁共振仪确定生物碱的结构,使用HPLC测得生物碱的纯度,最后,在建立的DE细胞模型中对单体进行药效评价。2.表小檗碱对db/db小鼠认知障碍的改善作用选用db/db小鼠为DE模型,并以db/m小鼠作为对照。将小鼠随机分为5组,每组8只:对照组db/m、模型组db/db、小檗碱200 mg/kg组、表小檗碱低剂量100mg/kg组、表小檗碱高剂量200 mg/kg组,连续给药12周。给药期间,记录小鼠的每周体重和每两周空腹血糖。给药结束后,首先通过Morris水迷宫实验和新物体识别实验检测小鼠的学习记忆能力,通过HE染色和尼氏染色观察小鼠海马组织病理损伤情况及神经元数目的变化,通过免疫组织化学染色和Western-blot检测小鼠海马tau蛋白的表达与定位情况。3.表小檗碱对IGF1R/PI3K/GSK3β通路的研究根据文献报道找到表小檗碱改善DE的可能作用靶点,使用分子对接软件Le Dock分析表小檗碱与IGF1R的结合情况。最后,采用RT-qPCR、免疫荧光和Western-blot的方法在动物和细胞模型中进行靶点及信号通路研究。并进一步在神经元中加入抑制剂研究表小檗碱改善DE的分子机制。结果:1.表小檗碱显著降低高糖诱导的神经元中tau蛋白过度磷酸化黄连经酸水提取氧化钙中和处理后,通过石油醚、二氯甲烷和正丁醇萃取发现,其生物碱主要集中在正丁醇部位,对正丁醇部位进行柱色谱分离后得到A、B、C、D、E和F 6个主要生物碱段落。原代神经元在45 mM葡萄糖环境下培养24 h后,tau蛋白在Ser396和Ser404两个位点显著磷酸化。然后通过细胞试验发现C段生物碱能够显著降低高糖诱导的神经元中tau蛋白磷酸化水平,进一步对C段生物碱分离纯化后得到一个主要生物碱单体,经结构鉴定为表小檗碱,HPLC测得其纯度为98%。通过细胞试验发现表小檗碱能够显著降低高糖诱导的神经元中tau蛋白磷酸化水平,且具有剂量依赖性。2.表小檗碱显著改善db/db小鼠认知障碍和病理损伤给药12周后,db/db小鼠的体重和空腹血糖明显下降。行为学实验结果显示,与db/m小鼠相比,db/db小鼠学习记忆能力显著下降,而表小檗碱显著改善db/db小鼠的认知功能。HE染色结果显示,db/db小鼠海马DG区组织出现明显的损伤,裂痕深邃,细胞间隙增大,而表小檗碱治疗组小鼠海马DG区组织结构无明显异常,神经元细胞排列规则,也无明显裂痕。尼氏染色结果显示,db/db小鼠海马DG区神经元受到明显损伤,细胞膜出现皱缩破裂现象,尼氏体数量较少且比较模糊,神经元数目显著减少,而表小檗碱治疗组小鼠海马DG区神经元形态较完整,轮廓比较清晰,神经元数目相对较多。Western-blot及免疫组化结果显示,表小檗碱显著降低db/db小鼠海马DG区tau蛋白过度磷酸化。通过体内实验证明表小檗碱对db/db小鼠认知障碍和病理损伤均有明显的改善作用,且效果优于小檗碱。3.表小檗碱通过IGF1R/PI3K/GSK3β通路降低tau蛋白过度磷酸化IGF1R是PI3K/AKT信号通路上游靶点,影响PI3K/AKT信号传导和GSK3β活性。表小檗碱和IGF1R分子对接结果显示,表小檗碱与IGF1R蛋白MET-1082,GLU-1050形成分子内氢键,且与IGF1R蛋白的功能区多个氨基酸分子相互作用。RT-qPCR结

关键词：表小檗碱糖尿病脑病认知功能障碍 tau IGF1R/PI3K/GSK3β