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补肾调经方对体外培养氧化应激模型小鼠卵母细胞质量及抗氧化能力的影响

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北京中医药大学学报 2022年第4期45卷 407-413页

作者：管凤丽杜惠兰河北中医学院石家庄050200

目的通过体外添加H;O;建立氧化应激模型,探讨补肾调经方对小鼠卵母细胞质量及抗氧化能力的影响。方法选用D24-26健康雌性昆明小鼠,每只小鼠注射血促性素(10 IU)48 h后,体式显微镜下分离卵巢,获取GV期卵母细胞,将细胞随机分为正常组、... 详细信息

目的通过体外添加H;O;建立氧化应激模型,探讨补肾调经方对小鼠卵母细胞质量及抗氧化能力的影响。方法选用D24-26健康雌性昆明小鼠,每只小鼠注射血促性素(10 IU)48 h后,体式显微镜下分离卵巢,获取GV期卵母细胞,将细胞随机分为正常组、模型组、补肾调经方高剂量组、补肾调经方低剂量组,置于体外成熟卵母细胞(IVM)培养液中培养14 h。收集MⅡ期卵母细胞,在倒置显微镜下观察卵母细胞第一极体(first polar body, PB1)排出情况,透射电镜观察线粒体超微结构,Mito-Tracker Red CMXRos与DCHF-DA试剂盒检测线粒体分布及活性氧(ROS)水平,化学比色法与RT-qPCR法检测超氧化物歧化酶(SOD)与谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及mRNA表达。结果与正常组比较,模型组卵母细胞PB1排出率降低,线粒体结构完整性被破坏、分布异常及ROS水平升高,抗氧化酶SOD、GSH-Px活性及mRNA表达均降低;与模型组比较,补肾调经方高、低剂量组线粒体结构较完整,仅有部分线粒体嵴断裂,线粒体呈均匀分布,ROS水平降低,PB1排出率、抗氧化酶SOD、GSH-Px活性及mRNA表达均升高(P补肾调经方可提高卵母细胞质量,其机制可能与保护线粒体结构和功能、调节抗氧化酶活性、降低氧化损伤有关。

关键词：补肾调经方线粒体氧化应激卵母细胞质量小鼠

补肾调经方对体外受精–胚胎移植技术中重复控制性卵巢刺激模型小鼠囊胚质量及凋亡的影响

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北京中医药大学学报 2022年第8期45卷 815-823页

作者：于志芳左茜茜刘孟瑞张玉倩张丽王淑慧杜惠兰河北中医学院中西医结合学院石家庄050200 河北省中西医结合生殖疾病协同创新中心河北省中西医结合肝肾病证研究重点实验室

目的观察补肾调经方对重复控制性卵巢刺激(COS)模型小鼠囊胚质量及凋亡的影响。方法将160只雌性ICR小鼠按照随机数字表法分为正常组、模型组、补肾低剂量组(25.6 g/kg)和补肾高剂量组(51.2 g/kg)。除正常组外,其余3组建立重复COS模型(CO... 详细信息

目的观察补肾调经方对重复控制性卵巢刺激(COS)模型小鼠囊胚质量及凋亡的影响。方法将160只雌性ICR小鼠按照随机数字表法分为正常组、模型组、补肾低剂量组(25.6 g/kg)和补肾高剂量组(51.2 g/kg)。除正常组外,其余3组建立重复COS模型(COS 3次)。每日9时正常组及模型组雌鼠灌胃蒸馏水,补肾低、高剂量组雌鼠灌胃低、高剂量补肾调经方,连续10 d,各组均于第11天16时进行腹腔注射,除正常组注射生理盐水0.1 mL外,其余3组腹腔注射孕马血清促性腺激素(PMSG)10 IU/只,并于48 h后腹腔注射人绒毛膜促性腺激素(hCG)10 IU/只。灌胃及腹腔注射连续3个周期,每次间隔4 d。各组小鼠第3次腹腔注射后立即与同品系雄鼠合笼,次日清晨检查阴栓,见栓或阴道涂片见精子的雌鼠记为妊娠。妊娠小鼠于末次腹腔注射96 h后处死,获取囊胚,倒置显微镜下观察囊胚质量并计数,计算优质囊胚率;Tunel法检测囊胚细胞凋亡率;实时荧光定量PCR检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)mRNA表达;Simple Western检测凋亡相关因子Bcl-2、Bax及活化的半胱氨酸蛋白酶-3(cleaved caspase-3)的蛋白表达;免疫荧光法检测细胞色素C表达情况。结果与正常组比较,模型组获取囊胚数增多,优质囊胚率下降(P补肾低、高剂量组获取囊胚数差异无统计学意义(P>0.05),优质囊胚率升高(P补肾调经方可抑制重复COS引起的囊胚细胞凋亡,提高早期胚胎质量,其作用机制可能与线粒体凋亡途径有关。

关键词：重复控制性卵巢刺激囊胚质量补肾调经方凋亡小鼠

补肾调经方对体外培养小鼠卵母细胞线粒体功能及其与卵丘颗粒细胞缝隙连接的影响

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中华中医药杂志 2023年第1期38卷 131-135页

作者：吕金梦耿静然张拴成梁潇杜惠兰河北中医学院中西医结合学院中西医结合研究所河北省中西医结合肝肾病证研究重点实验室石家庄050091 河北省沧州中西医结合医院沧州061000 河北生殖妇产医院石家庄050091

目的:探讨补肾调经方对体外培养小鼠卵母细胞线粒体功能及其与卵丘颗粒细胞缝隙连接的影响。方法:50只SD大鼠随机分为补肾组和血清对照组,每组25只,分别灌胃补肾调经方和蒸馏水,采血并分离血清后得到补肾组血清和血清对照组血清。将270... 详细信息

目的:探讨补肾调经方对体外培养小鼠卵母细胞线粒体功能及其与卵丘颗粒细胞缝隙连接的影响。方法:50只SD大鼠随机分为补肾组和血清对照组,每组25只,分别灌胃补肾调经方和蒸馏水,采血并分离血清后得到补肾组血清和血清对照组血清。将270只雌性ICR小鼠随机分为补肾组、血清对照组、空白对照组,每组90只。分别用含有补肾组血清、血清对照组血清和不含大鼠血清的培养液培养卵泡至成熟,收集MⅡ期卵母细胞计算卵母细胞第一极体排出率,活细胞荧光探针观察线粒体均匀分布比率,Western Blot法检测UCP2、PGC-1α蛋白表达;收集卵丘颗粒细胞,通过流式细胞术和Western Blot法分别检测细胞凋亡率和缝隙连接蛋白(Cx)43、Cx37蛋白表达。结果:补肾组卵母细胞第一极体排出率较其余两组显著升高(P补肾组卵丘颗粒细胞凋亡率较其余两组显著降低(P补肾组Cx37、Cx43蛋白表达均较空白对照组显著降低(P补肾组Cx37、Cx43蛋白表达较血清对照组显著升高(P补肾组PGC-1α、UCP2蛋白表达较其余两组显著升高(P补肾调经方可通过改善线粒体功能和减少卵丘颗粒细胞凋亡,增加Cx,从而提高卵母细胞质量。

关键词：补肾调经方卵母细胞体外成熟培养颗粒细胞线粒体

补肾调经方通过有氧糖酵解促进控制性超促排卵小鼠囊胚发育的实验研究

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中国中西医结合杂志 2022年第5期42卷 575-581页

作者：刘孟瑞于志芳左茜茜郝延芝张玉倩杜惠兰河北中医学院中西医结合学院石家庄050200 河北省中西医结合生殖疾病协同创新中心石家庄050091 河北省中西医结合肝肾病证研究重点实验室石家庄050091

目的观察补肾调经方对囊胚质量的影响及与有氧糖酵解相关基因表达的关系。方法将100只动情周期正常的费城癌症研究所(ICR)雌性小鼠按照随机数字表法分为4组,分别为正常组、模型组、补肾低剂量组、补肾高剂量组,每组25只。除正常组,其... 详细信息

目的观察补肾调经方对囊胚质量的影响及与有氧糖酵解相关基因表达的关系。方法将100只动情周期正常的费城癌症研究所(ICR)雌性小鼠按照随机数字表法分为4组,分别为正常组、模型组、补肾低剂量组、补肾高剂量组,每组25只。除正常组,其余各组小鼠建立控制性超促排卵模型。正常组及模型组雌鼠每日上午9:00灌胃蒸馏水,补肾低、高剂量组雌鼠每日上午9:00灌胃补肾调经方低、高剂量(2.6、5.2 g/mL),连续10日。模型组及补肾低、高剂量组于第11日下午16:00同时腹腔注射孕马血清促性腺激素(PMSG)10 IU/只,48 h后腹腔注射人绒毛膜促性腺激素(HCG)10 IU/只;正常组于第11日下午16:00腹腔注射生理盐水0.1 mL。连续3个周期,每次间隔4天。模型组及补肾低、高剂量组均在控制性卵巢刺激(COS)第3次腹腔注射HCG后(下午16:00)立即与雄性小鼠合笼。正常组在动情期第3次腹腔注射生理盐水后(下午16:00)立即与雄性小鼠合笼。次日清晨检查阴栓,见栓的雌鼠记为妊娠。妊娠第4天(注射HCG后96 h)在体式显微镜下取出囊胚,观察囊胚质量并计数,计算优质囊胚率;免疫荧光染色、实时荧光定量PCR检测囊胚中的乳酸脱氢酶(LDH)、M2-型丙酮酸激酶(PKM2)、葡萄糖6-磷酸脱氢酶(G6PDH)、单羧酸转运蛋白4(MCT4)蛋白及mRNA的表达。结果与正常组比较,模型组的囊胚数量增加(P补肾低、高剂量组的优质囊胚率升高(P补肾调经方可增加超促排卵小鼠囊胚数量,提高小鼠囊胚质量,促进胚胎植入,其机制可能与上调有氧糖酵解改善早期胚胎能量代谢有关。

关键词：补肾调经方囊胚有氧糖酵解

补肾调经方对IVF-ET患者卵母细胞质量及卵泡液生殖激素的影响

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中国中西医结合杂志 2014年第8期34卷 911-916页

作者：梁莹杜惠兰常秀峰赵胜男雷灵梅河北省石家庄市第四医院生殖中心石家庄050011 河北中医学院中西医结合妇科教研室中西医结合生殖疾病协同创新中心石家庄050091 白求恩国际和平医院妇产科生殖医学中心石家庄050082

目的研究补肾调经方对体外受精-胚胎移植(in vitro fertilization-embryo transfer,IVFET)患者卵母细胞质量及与卵泡液生殖激素及颗粒细胞骨形态发生蛋白-15(bone morphogenetic protein-15,BMP-15)表达的影响。方法将60例符合纳入标准... 详细信息

目的研究补肾调经方对体外受精-胚胎移植(in vitro fertilization-embryo transfer,IVFET)患者卵母细胞质量及与卵泡液生殖激素及颗粒细胞骨形态发生蛋白-15(bone morphogenetic protein-15,BMP-15)表达的影响。方法将60例符合纳入标准的接受IVF-ET治疗的不孕症患者,按照治疗顺序分为中药联合控制性超排卵组(治疗组,20例)和单纯控制性超排卵组(对照组,40例)。比较两组年龄、不孕年限、基础促卵泡刺激素(basal follicle-stimulating hormone,bFSH)水平、促性腺激素(gonadotropins,Gn)使用天数及使用量、皮下注射重组人绒毛膜促性腺激素(HCG)日血清中雌二醇(estradiol,E_2)、孕酮(progesterone,P)、促黄体生成素(luteotropic hormone,LH)水平、获卵数、受精率、胚胎数、优质胚胎率和.临床妊娠率。应用化学发光法检测卵泡液生殖激素FSH、LH、E_2、P、睾酮(testosterone,T)浓度。应用实时荧光定量PCR(real-time PCR)法和蛋白质印迹法(Western blot)测定成熟卵泡颗粒细胞BMP-15 mRNA和蛋白定量的表达。结果 60例患者妊娠32例,总妊娠率为53.3%。其中对照组40例,妊娠19例,妊娠率47.5%;治疗组20例,妊娠13例,妊娠率65.0%,两组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。治疗组Gn用量低于对照组,优质胚胎率高于对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。与对照组比较,治疗组卵泡液FSH浓度均降低,LH浓度增高,妊娠患者卵泡液LH浓度亦明显高于未妊娠患者,差异均有统计学意义(P0.05)。治疗组颗粒细胞上BMP-15 mRNA和蛋白定量的表达较对照组均增高,妊娠患者亦高于未妊娠患者(P补肾调经方可以提高卵母细胞质量,增加卵泡对外源性促性腺激素的敏感性。补肾调经方的这一作用与颗粒细胞上BMP-15 mRNA和蛋白定量的表达变化及卵泡液中FSH和LH的浓度变化有关。

关键词：补肾调经方卵母细胞质量促卵泡生成素促黄体生产素骨形态发生蛋白-15

补肾调经方含药血清对体外培养的人卵巢颗粒细胞FSH/cAMP-PKA通路的影响

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中国中西医结合杂志 2014年第3期34卷 317-323页

作者：宋翠淼杨宏敏陆君周楠路帅段彦苍马惠荣徐华洲杜惠兰河北中医学院生理学教研室石家庄050091 河北中医学院中西医结合妇产科学教研室中西医结合生殖疾病协同创新中心石家庄050091

目的通过补肾调经方含药血清对体外培养的人卵巢颗粒细胞卵泡刺激素/环磷酸腺苷-蛋白激酶A(follicle stimulating hormone/cyclic adenosine monophosphate-protein kinase A,FSH/cAMP-PKA)通路的影响,探讨补肾调经方改善卵巢内分泌功... 详细信息

目的通过补肾调经方含药血清对体外培养的人卵巢颗粒细胞卵泡刺激素/环磷酸腺苷-蛋白激酶A(follicle stimulating hormone/cyclic adenosine monophosphate-protein kinase A,FSH/cAMP-PKA)通路的影响,探讨补肾调经方改善卵巢内分泌功能可能的分子机制。方法收集行体外受精-胚胎移植(In vitro fertilization-embryo transfer,IVF-ET)患者卵泡液,提取颗粒细胞进行原代细胞培养24 h,以低、中、高剂量补肾调经方人、大鼠含药血清以及正常人、大鼠血清分别与体外培养的人卵巢颗粒细胞共同孵育48 h,分为补肾调经方低、中、高剂量组以及对照组。采用放射免疫方法测定培养液中雌二醇(estrogen,E2)、孕酮(progesterone,P)、环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)的水平,采用蛋白印迹法和Real-time PCR分别检测卵泡刺激素受体(follicle stimulating hormone receptor,FSHR)蛋白和FSHR、P450芳香化酶(P450 aromatase,P450arom)mRNA在颗粒细胞的表达。结果人含药血清组:与对照组比较,补肾调经方中、高剂量组培养液中E2、cAMP水平均明显升高(P补肾强经方中剂量组P明显降低(P补肾调经方中、高剂量组卵巢颗粒细胞FSHR蛋白及其mRNA表达均明显增高(P补肾调经方中、高剂量组E2均升高(P补肾调经方中剂量组P明显降低(P补肾调经方中、高剂量组人卵巢颗粒细胞FSHR蛋白及其mRNA表达均增高(P补肾调经方可能通过调节卵巢颗粒细胞FSH/cAMP-PKA通路的主要效应分子FSHR、cAMP、P450arom、E2,促进卵巢颗粒细胞的内分泌功能。

关键词：补肾调经方颗粒细胞卵泡刺激素环磷酸腺苷-蛋白激酶A通路雌二醇

补肾调经方、逍遥丸对雄激素致排卵障碍模型大鼠腺垂体、卵巢影响的比较研究

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中国中西医结合杂志 2014年第1期34卷 87-90页

作者：徐丁洁洪丽文徐洪杨宏敏刘曼芳杜惠兰河北联合大学中医学院石家庄063000 河北医科大学中西医结合妇科教研室石家庄050091 河北联合大学医学实验研究中心石家庄063000

目的观察补肾调经方、逍遥丸对雄激素致排卵障碍模型大鼠(ASR)腺垂体、卵巢形态及其分泌性激素的影响。方法 60只9日龄SD雌性大鼠随机选取10只为正常组,余50只皮下注射丙酸睾丸酮建立ASR模型,选取30只造模成功者,随机分为模型组、补肾... 详细信息

目的观察补肾调经方、逍遥丸对雄激素致排卵障碍模型大鼠(ASR)腺垂体、卵巢形态及其分泌性激素的影响。方法 60只9日龄SD雌性大鼠随机选取10只为正常组,余50只皮下注射丙酸睾丸酮建立ASR模型,选取30只造模成功者,随机分为模型组、补肾调经方组(灌服补肾调经方混悬液)、逍遥丸组(灌服逍遥丸混悬液),每组10只,给药5周,择动情前期,断头法取血,放射免疫分析法检测血清雌二醇(E2)、孕酮(P)、睾酮(T)、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH);HE染色后观察腺垂体、卵巢形态。结果与正常组比较,模型组血清E2、T升高,FSH、LH降低(均P补肾调经方组和逍遥丸组E2、T降低,FSH、LH升高(P补肾调经方组E2、T,逍遥丸组FSH恢复正常(均P>0.05);两组受损的腺垂体、卵巢结构均得到不同程度修复。结论补肾调经方及逍遥丸可改善排卵障碍性疾病。

关键词：补肾调经方逍遥丸雄激素致排卵障碍模型大鼠腺垂体卵巢

补肾调经方对人卵泡壁颗粒细胞BMP/Smads表达的影响

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中国中西医结合杂志 2013年第5期33卷 606-610页

作者：梁莹赵胜男常秀峰杜惠兰河北医科大学中西医结合学院妇科教研室石家庄050091 白求恩国际和平医院妇产科生殖医学中心石家庄050082

目的研究补肾调经方对人卵泡壁颗粒细胞Smad1(drosophila mothers against decapentaplegic protein 1)、Smad5、Smad8及Smad4表达的影响。方法将66例接受体外受精-胚胎移植(in vitro fertili-zation-embryo transfer,IVF-ET)不孕症患者按1∶2的比例分为中药加长方案控制性超排卵组(简称治疗组,23例)和长方案控制性超排卵组(简称对照组,43例)。应用实时荧光定量PCR(real-time PCR)法测定取卵日成熟卵泡壁颗粒细胞Smad1、Smad5、Smad8、Smad4 mRNA的表达;应用细胞免疫荧光方法观察两组颗粒细胞Smad1、Smad5、Smad8和Smad4蛋白的表达。结果治疗组颗粒细胞Smad1 mRNA及蛋白表达显著高于对照组(P补肾调经方提高妊娠率、改善卵巢功能的机制可能与上调壁颗粒细胞Smad1 mRNA和蛋白的表达有关。

关键词：补肾调经方卵泡壁颗粒细胞 Smad1 Smad5 Smad8 Smad4

补肾调经方、逍遥丸对促性腺激素预处理小鼠组织蛋白酶-L mRNA的影响

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中国中西医结合杂志 2011年第1期31卷 80-84页

作者：段彦苍杜惠兰贺明宋翠淼河北医科大学中西医结合学院石家庄050091 河北医科大学生理教研室石家庄050017

目的探讨补肾调经方、逍遥丸对小鼠组织蛋白酶-L(cathepsin-L,Cat L)mRNA的影响。方法选择未成年小鼠随机分为正常组、对照组、逍遥丸组和补肾调经方组,每组12只,采用反转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reac... 详细信息

目的探讨补肾调经方、逍遥丸对小鼠组织蛋白酶-L(cathepsin-L,Cat L)mRNA的影响。方法选择未成年小鼠随机分为正常组、对照组、逍遥丸组和补肾调经方组,每组12只,采用反转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)方法检测给予5IU人绒毛促性腺激素(humanchorionic gonadotropin,HCG)0、4、8、12h后Cat L mRNA在各组小鼠卵巢的表达强度。结果注射HCG0、4、8、12h后,Cat L mRNA在促性腺激素预处理小鼠对照组卵巢的表达逐渐升高,Cat L mRNA的相对表达含量分别为:0.066±0.005、0.383±0.045、0.737±0.024、1.036±0.073,各时间点比较差异有统计学意义(P补肾调经方组小鼠卵巢表达均升高,差异有统计学意义(P补肾调经方组差异无统计学意义(P>0.05);注射HCG12h后与对照组比较,补肾调经方组Cat LmRNA表达升高,差异有统计学意义(P0.05)。结论补肾调经方通过使Cat L mRNA表达增强而达到促排卵的作用,消遥丸通过使Cat L mRNA表达高峰提前达到促排卵的目的。

关键词：补肾调经方逍遥丸排卵组织蛋白酶-L 反转录聚合酶链式反应