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人血清免疫球蛋白类定时散射比浊检测系统的研制

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人血清免疫球蛋白类定时散射比浊检测系统的研制

作者：杨洁霞南方医科大学

学位级别：硕士

人体内存在着10万种以上的蛋白质,在机体中承担着不同的任务,来源于组织细胞,对维持人体机能变化起着重要的作用,当疾病状态时又起着重要病理意义的那些特殊蛋白,统称为特定蛋白。为了揭示生命活动的规律,识别和检测这些蛋白质以及生理... 详细信息

人体内存在着10万种以上的蛋白质,在机体中承担着不同的任务,来源于组织细胞,对维持人体机能变化起着重要的作用,当疾病状态时又起着重要病理意义的那些特殊蛋白,统称为特定蛋白。为了揭示生命活动的规律,识别和检测这些蛋白质以及生理功能是必然的发展方向。人体免疫系统中也存在着这样一类与免疫系统疾病发生、发展、转归及预后紧密关联的特定蛋白,包括免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)、以及补体c3、c4。人体免疫系统是人类保持健康、避免发生各种疾病的自卫防御系统,它是人类在进化过程里,与自然环境作斗争中逐渐建立和完善的,是一个组织严密、分工精细,成员众起各种疾病时,具有抵抗力,确保人体内环境的统一、稳定和平衡。人体内免疫功能失调会引起恶性肿瘤、慢性肾病、慢性肝炎、慢性胃病、糖尿病、红斑狼疮、风湿性心脏病、硬化症、重症肌无力、类风湿、中老年性疾病等各种免疫系统疾病,严重威胁着人类的健康,随着社会的发展和医学科技的不断进步,越来越多的免疫系统疾病被人们所重视,与其密切相关的特定蛋白的检测也日益受到广大医学和科研工作者的青睐及关注。目前国内外常用的特定蛋白的检测方法包括单向免疫扩散法、免疫电泳法、酶联免疫测定(ELISA)、化学发光免疫测定(cLIA)、时间分辨免疫测定(TRFIA)、透射比浊法等,但是这些方法都存在一定的弊端,操作繁琐,费时,不易自动化,因此检测时不仅将增加被检测者的经济负担,也使检测者耗费更多时间、精力和试剂。随着实验技术的发展,特种蛋白分析技术由最初的试管沉淀反应、琼脂凝胶的扩散试验,发展到现代免疫分析技术,特种蛋白免疫分析技术方法逐步完善,其灵敏度逐步提高,检测水平由微克(μg)发展到纳克(ng),甚至皮克(pg)水平。特种蛋白分析仪是近年来国内常购的用于检测特种蛋白的临床检验设备。特定蛋白分析仪是利用抗原-抗体在一定条件下反应形成免疫复合物的原理,用免疫浊度法检测悬浮于缓冲液中的抗原-抗体免疫复合物颗粒的定量测定方法。特种蛋白分析仪从结构上主要分为透射比浊和散射比浊。免疫比浊测定法(Immunoturbidimetry)具备生化检测的快速性和免疫分析的特异性,是将现代光学测量仪器与自动化检测系统相结合应用于沉淀反应的方法,可对各种液体介质中的微量抗原、抗体和药物以及小分子半抗原物质进行定量测定。与其它免疫分析方法相比,免疫比浊技术除了具有操作简单、灵活、检测范围广,易于自动化等显著特点,其最突出优势还在于克服了抗原过量引起的高剂量HOOK效应。最早可追溯到1967年,Ritchie等报道了散射比浊法(Nephelometry),其原理是光线通过检测溶液时,被其中所含的抗原抗体复合物折射而部分发生偏转,产生散射光。根据雷利散射公式,在一定条件下,透射光与微粒浓度成反比,散射光与微粒浓度成正比。散射比浊法可分为终点和速率散射比浊法及动态定时散射比浊法。而散射免疫比浊测定法,具有线性范围宽广,测定速度快,精密度高,特异性强、重复性好,结果稳定可靠,并可批量测定等优点,是一种微量、快速、自动化检测体液中特定蛋白质成分的免疫化学分析技术。近年来,国内随着临床检测需求的增加,免疫比浊测定方法的应用也越来越普遍,因此对相应试剂及缓冲液的的使用也呈广泛趋势,但是由于国内临床使用的仪器基本依赖于进口,这就引发了一个严重的问题,这些仪器大多都只能使用它们自己的原装试剂和缓冲液,而且大都价格昂贵,不适宜大批量长期使用,使其在临床使用局限化。如果能研制出与仪器配套的试剂及缓冲液,将为临床检验解决一个重大难题。目前国内也有公司进行这方面的研究,但是都不尽人意,只是停留在起步阶段。这就决定了开发配套国产试剂及其相关缓冲液具有巨大的市场前景,填补了国产试剂的空缺,可以推动国内临床检验技术的发展进步。鉴于临床上对特定蛋白检测的必要性以及目前检测手段的局限性,我们的研究目的是研制出能应用于散射免疫比浊技术的国产相关检测试剂和缓冲液,满足国内市场的需求,并为广大临床患者带去福音。本实验室采用的是动态定时散射比浊法(Fixed-Time Nephelometric AssayFTNA),该方法的原理:由于免疫沉淀反应是在抗原抗体相遇后立即开始,在极短时间内反应介质中散射信号变动很大,此时计算峰值信号会产生一定误差。故在抗原抗体反应时留出预反应时间,即散射光信号第一次读数在开始反应7.5s～2min内,大多数情况下2min以后测第二次读数,并从第二次读数中扣除第一次读数,最后转换为待测抗原浓度。抗原、抗体剂量-反应曲线是由Heidelberger首次发现,在抗体过量阶段,沉淀物的量随着抗原浓度成比例增加,当抗原浓度的增加不再增强信号时,就达到了平衡点。进一步增加抗原的量会导致沉淀物总量减少。当抗原浓度远远超过所有抗体结

关键词：免疫球蛋白A、G、M 补体c3、c4 定时散射比浊检测试剂

基于“丹阳流行病学研究”探讨免疫机制与高血压及其中医体质类型的关系

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基于“丹阳流行病学研究”探讨免疫机制与高血压及其中医体质类型...

作者：姚阳婧南京中医药大学

学位级别：硕士

目的:本研究是基于“丹阳流行病学研究”的横断面研究,主要目的是:①通过研究补体c3、c4及免疫球蛋白(IgA、IgG、IgM)与高血压之间的关系,为利用免疫指标评估高血压,进一步揭示免疫机制在高血压发生发展中的作用,寻求防治高血压的免疫... 详细信息

目的:本研究是基于“丹阳流行病学研究”的横断面研究,主要目的是:①通过研究补体c3、c4及免疫球蛋白(IgA、IgG、IgM)与高血压之间的关系,为利用免疫指标评估高血压,进一步揭示免疫机制在高血压发生发展中的作用,寻求防治高血压的免疫学靶点奠定基础。②通过探究高血压不同中医体质类型间补体c3、c4及免疫球蛋白(IgA、IgG、IgM)是否存在差异性,为中医药个体化防治高血压寻求客观依据,提供新的防治策略。③研究中医体质与高血压的相关性,探究影响高血压的主要体质因素,从而通过对体质的判定和干预,来预防高血压。方法:2017年6月3日至2017年6月29日期间,根据相应的纳入、排除标准,我们对江苏省丹阳市随机选择的5个车站社区的1035名居民,进行现场调查及数据采集。一般资料采集包括个人基本信息,既往病史和药物使用的信息,身高、体重和即刻血压等。填写《中医体质分类与判定表》,并根据《中医体质分类与判定》标准对其进行中医体质分类。检测生化指标(血浆葡萄糖、血肌酐、血脂四项等)和免疫指标(补体c3、c4及IgA、IgG、IgM)。最后对采集的数据资料进行统计分析。结果:1.补体c3是高血压的独立危险因素,血清补体c3浓度与血压呈正相关,c3越高,血压越高。IgG与血压之间的相关性接近显著(P=0.05)。c4、IgM、IgA与血压之间没有明显相关性。2.1035名参与者中医体质分布结果:平和质385人(37.20%),阳虚质182人(17.58%),痰湿质161人(15.56%),阴虚质112人(10.82%),气虚质61人(5.89%),湿热质43人(4.15%),气郁质31人(3.00%),特禀质31人(3.00%),血瘀质29人(2.8%)。3.不同体质高血压患病率分别为:痰湿质60%,阴虚质56.25%,平和质42.60%,气虚质36.07%,阳虚质29.67%,气郁质和特禀质都为25.81%,湿热质25.58%,血瘀质10.34%。4.430例高血压患者中有男性211名(49.1%),平均年龄57.37±7.76岁,平均收缩压 141.1±14.8mmHg,平均舒张压 91.4±8.3mmHg,平均 BMI25.1±3.1kg/m2,使用降压药物治疗的有241人(56%)。高血压患者5种主要体质分布为:平和质164人,痰湿质97人,阴虚质63人,阳虚质54人,气虚质22人。5.高血压患者不同体质间补体c3、c4及免疫球蛋白(IgA、IgG、IgM)没有发现明显差异。结论:1.补体c3与血压成正相关,c3可作为高血压的独立危险评估指标。c4及免疫球蛋白(IgA、IgG、IgM)与血压之间没有发现明显相关性。2.高血压患者不同体质间补体c3、c4及免疫球蛋白(IgA、IgG、IgM)未见明显差异。3.影响高血压的主要体质因素为痰湿质、阴虚质。

关键词：高血压补体c3、c4 免疫球蛋白中医体质治未病

牛角地黄冲剂对大鼠免疫性血小板减少模型的实验研究

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牛角地黄冲剂对大鼠免疫性血小板减少模型的实验研究

作者：程纬民湖南中医学院

学位级别：硕士

目的：研究牛角地黄冲剂对大鼠免疫性血小板减少模型的影响。方法：将110只SD大鼠随机分成正常对照组、模型对照组、强的松对照组、牛角地黄冲剂高剂量组和牛角地黄冲剂低剂量组。除正常组外，其余4组均连续注射兔抗大鼠血小板血清(AP... 详细信息

目的：研究牛角地黄冲剂对大鼠免疫性血小板减少模型的影响。方法：将110只SD大鼠随机分成正常对照组、模型对照组、强的松对照组、牛角地黄冲剂高剂量组和牛角地黄冲剂低剂量组。除正常组外，其余4组均连续注射兔抗大鼠血小板血清(APS)4天造模，造模后分别灌胃给药和蒸馏水，每日1次，连续11天，分别在第7天和第11天各测一半大鼠T细胞亚群，血浆血栓素B(TXB)及血清补体c、c, 并作骨髓涂片检查。结果:强的松组和中药组均可明显提高模型大鼠的血小板数量(p补体c、c则无明显影响(p>0.05)。牛角地黄冲剂高剂量组可明显提高模型大鼠的cD百分比、cD/cD比值、血小板膜糖蛋白(GP)Ⅱb、GPⅢa 分子数和TXB浓度(p<0.05)，其作用优于强的松组和牛角地黄冲剂低剂量组。结论:中药牛角地黄冲剂具有明显提高ITP模型大鼠的血小板数量和改善ITP大鼠的细胞免疫功能和血小板功能的作用。

关键词：牛角地黄冲剂免疫性血小板减少血小板抗体血小板膜糖蛋白血栓素B2 T细胞亚群补体c3、c4

静脉预注H1受体阻滞剂苯海拉明对减轻鱼精蛋白心血管副作用的研究

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静脉预注H1受体阻滞剂苯海拉明对减轻鱼精蛋白心血管副作用的研究

作者：王玲兰州大学

学位级别：硕士

目的探讨静脉预防注射苯海拉明减轻体外循环心脏手术后鱼精蛋白引起的血流动力学及血清补体c3、c。浓度的变化。方法80例ASD、VSD患者随机分为对照组和预防用药组。预防用药组于停体外循环时,鱼精蛋白中和肝素之前,经中心静脉缓慢注射... 详细信息

目的探讨静脉预防注射苯海拉明减轻体外循环心脏手术后鱼精蛋白引起的血流动力学及血清补体c3、c。浓度的变化。方法80例ASD、VSD患者随机分为对照组和预防用药组。预防用药组于停体外循环时,鱼精蛋白中和肝素之前,经中心静脉缓慢注射苯海拉明0.2mg/kg。记录两组应用鱼精蛋白前后的血流动力学指标及测量两组血清补体c3、c4浓度的变化。结果预防用药组血流动力学指标变化明显小于对照组,两组之间差异显著(P补体c3、c4浓度均下降,两组之间差异显著(P<0.01)。结论预防性使用H1受体阻滞剂苯海拉明可能减轻鱼精蛋白对心血管系统的副作用。

关键词：苯海拉明血流动力学补体c3、c4

阿托品、昂丹司琼、酮洛酸联合预注预防鱼精蛋白不良反应

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阿托品、昂丹司琼、酮洛酸联合预注预防鱼精蛋白不良反应

作者：刘伟明三峡大学

学位级别：硕士

研究背景:目前鱼精蛋白不良反应的机制尚未有统一的结论,临床上各种药物的治疗也都各抒己见。因此,寻找一种有效的预防药物具有重要意义。通过对羊水栓塞引起的不良反应的相关文献回顾,我们发现鱼精蛋白和羊水栓塞在临床表现上具有相似... 详细信息

研究背景:目前鱼精蛋白不良反应的机制尚未有统一的结论,临床上各种药物的治疗也都各抒己见。因此,寻找一种有效的预防药物具有重要意义。通过对羊水栓塞引起的不良反应的相关文献回顾,我们发现鱼精蛋白和羊水栓塞在临床表现上具有相似之处:肺循环紊乱（肺动脉升高、气道压升高）,体循环紊乱（血压降低、低心输出量）。开展此类研究可能会对预防鱼精蛋白不良反应提供一个新的治疗思路。目的:通过对体外循环（cPB）结束后联合预注阿托品、昂丹司琼、酮洛酸（A-OK）预防鱼精蛋白中和肝素不良反应的观察,对比分析鱼精蛋白中和肝素后的平均动脉压、心率、中心静脉压、气道压、D-二聚体、补体c3、c4的变化情况,为临床预防鱼精蛋白不良反应提供一定的参考依据,以减少不良反应的发生率,提高心脏手术置换术的安全性。方法:选择在择期行二尖瓣置换术患者40例,性别不限,年龄18～78岁,ASAⅡ～Ⅲ级,经医院伦理委员会批准,并签署知情同意书。采用随机数字法,随机分为两组（n=40）:A组:试验组;B组:对照组。经中心静脉途径,抽取患者在鱼精蛋白给药前5min、给药后5min、15min、30min静脉血,分别测量两组患者D-二聚体、补体c3、补体c4,并记录两组患者的心率（HR）、平均动脉压（MAP）、中心静脉压（cVP）、气道压（Paw）。试验组在体外循环结束时,鱼精蛋白中和肝素前,经中心静脉途径注射0.2mg阿托品、昂丹司琼8mg、酮洛酸15mg;对照组注射生盐盐水。观察两组应用鱼精蛋白前后的血流动力学指标及D-二聚体和补体c3、c4的变化。结果:（1）两组患者一般情况比较差异无统计学意义（P＞0.05）。（2）试验组在给鱼精蛋白后5、15、30min后与给药前5min比较,MAP、cVP、HR、Paw、D-二聚体、补体c3、c4无明显变化差异无统计学意义（P＞0.05）。（3）对照组在给鱼精蛋白5、15、30min后与给药前5min相比,HR、MAP明显下降,差异有统计学意义（P＜0.05）,cVP、Paw、D-二聚体、补体c3、c4明显升高,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论:体外循环（cPB）结束后联合预注阿托品、昂丹司琼、酮洛酸（A-OK）,对鱼精蛋白中和肝素后血流动力学波动的影响较小,降低D-二聚体的急剧升高,改善补体c3、c4的快速变化。

关键词：体外循环 A-OK 血流动力学 D-二聚体补体c3、c4

女性SLE患者血清免疫球蛋白、补体水平及与自身抗体的相关性研究

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河北医药 2018年第14期40卷 2166-2170页

作者：张红刘兆玮李森种肖宇哈励逊国际和平医院检验科河北省衡水市053000

目的研究女性系统性红斑狼疮(SLE)患者血清中免疫球蛋白、补体的水平及其与自身抗体的相关性。方法女性SLE患者82例,71例非SLE疾病对照组患者,同时选择同期健康体检者67例,分别对其血清中的免疫球蛋白IgG、补体c3和c4水平及自身抗体的... 详细信息

目的研究女性系统性红斑狼疮(SLE)患者血清中免疫球蛋白、补体的水平及其与自身抗体的相关性。方法女性SLE患者82例,71例非SLE疾病对照组患者,同时选择同期健康体检者67例,分别对其血清中的免疫球蛋白IgG、补体c3和c4水平及自身抗体的表达情况进行检测分析。结果 SLE组和非SLE疾病对照组与正常对照组比较,各指标阳性率差异有统计学意义(PcA、U1-nRNP、抗Sm抗体、抗ds DNA抗体、Nucleosome、Histone、ARPA的阳性率均高于非SLE疾病对照组,差异有统计学意义(P补体c4水平低于健康对照组(P补体c3水平显著低于健康对照组(Pc3、c4水平均低于抗Sm抗体阴性的女性SLE患者。抗Sm、U1-nRNP、抗ds-DNA、Nucleosome、Histone、ARPA联合诊断SLE敏感性为63.4%,明显高于单一检测抗Sm抗体,差异有统计学意义(Pc3、c4及自身抗体在女性SLE患者与健康对照者中存在明显差异,多种抗体联合检测能够提高对SLE的诊断率,对系统性红斑狼疮患者的早期诊断、治疗及预后判断等均具有重要临床意义。

关键词：女性系统性红斑狼疮免疫球蛋白补体c3、c4 抗心磷脂抗体自身抗体

儿童手足口病T淋巴细胞亚群、免疫球蛋白及补体水平的检测结果分析

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吉林医学 2019年第10期40卷 2197-2199页

作者：陈尚花周少雄佛山市第二人民医院

目的:通过检测外周血T淋巴细胞亚群、免疫球蛋白及补体水平,探讨各项指标在手足口病病情评估、判断中的作用。方法:选取2017年3月~2017年11月佛山市第二人民医院儿科收治的82例手足口病儿童作为患儿组,选取相同时间段的80例体检健康儿... 详细信息

目的:通过检测外周血T淋巴细胞亚群、免疫球蛋白及补体水平,探讨各项指标在手足口病病情评估、判断中的作用。方法:选取2017年3月~2017年11月佛山市第二人民医院儿科收治的82例手足口病儿童作为患儿组,选取相同时间段的80例体检健康儿童为对照组,两组均采集清晨空腹静脉血,采用流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群含量,采用全自动生化分析仪检测免疫球蛋白IgG、IgA、IgM和补体c3、c4的含量,并分析比较两组的指标水平。结果:患儿组与对照组的T淋巴细胞亚群中cD3^+、cD4^+以及cD+4/cD+8的结果比较分别为(63.57±8.56)%vs(67.92±5.37)%、(32.78±5.68)%vs(38.32±3.39)%、(1.53±1.47)vs(1.75±0.26),显示患儿组表达水平低于对照组,差异有统计学意义(PcD+8的结果比较差异无统计学意义(P>0.05)。血清免疫球蛋白IgG、IgA在患儿组和对照组中结果对比分别为(8.09±2.40)g/Lvs(9.70±2.30)g/L、(0.66±0.50)g/Lvs(1.05±0.31)g/L,显示患儿组含量显著下降;患儿组和对照组的补体c3、c4水平对比结果分别为(0.88±0.13)g/Lvs(0.84±0.07)g/L、(0.27±0.08)g/Lvs(0.22±0.04)g/L,结果显示患儿组含量明显高于对照组,以上差异均有统计学意义(P0.05)。结论:通过联合检测手足口病患儿外周血T淋巴细胞亚群以及免疫球蛋白和补体的水平,探讨手足口病患儿的免疫功能,对早期指导临床诊断,辅助了解患儿病情发展以及采取相应的治疗措施具有重要意义。

关键词：儿童手足口病 T淋巴细胞亚群免疫球蛋白补体c3、c4

扶正解毒汤联合盐酸伐昔洛韦胶囊治疗复发型口唇疱疹临床研究

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陕西中医 2020年第7期41卷 932-934页

作者：董小天解放军东部战区空军医院南京210000

目的:观察扶正解毒汤联合西药伐昔洛韦胶囊治疗复发型口唇疱疹的临床治疗效果及对患者血清免疫指标及对预后的影响。方法:将96例复发型口唇疱疹患者按随机数字表法随机分为两组各48例,对照组予常规西医盐酸伐昔洛韦胶囊治疗,研究组在对... 详细信息

目的:观察扶正解毒汤联合西药伐昔洛韦胶囊治疗复发型口唇疱疹的临床治疗效果及对患者血清免疫指标及对预后的影响。方法:将96例复发型口唇疱疹患者按随机数字表法随机分为两组各48例,对照组予常规西医盐酸伐昔洛韦胶囊治疗,研究组在对照组基础上加用扶正解毒汤治疗,对比两组临床症状、疗效、指标和复发率,并检测两组患者治疗前后补体c3、c4水平、T淋巴细胞亚群水平变化。结果:治疗后研究组疱疹止痛时间、止疱时间、结痂时间、皮损的愈合时间明显低于对照组,差异有统计学意义(P补体c3、c4水平均升高,研究组补体上升水平高于对照组,差异具有统计学意义(PcD3^+、cD4^+明显升高(PcD8^+明显降低;研究组cD3^+、cD4^+高于对照组,cD8^+低于对照组,两组比较,差异具有统计学意义(P补体水平,有效调节细胞免疫力。

关键词：复发性口唇疱疹盐酸伐昔洛韦胶囊扶正解毒汤补体c3、c4 cD3^+、cD4^+、cD8^+

疱疹性咽峡炎患儿T细胞亚群和免疫球蛋白变化

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中国现代医生 2011年第13期49卷 21-22,24页

作者：赵爱芹李堂孙淑兰青岛大学医学院附属医院儿内科山东青岛266021 山东省淄博市临淄区妇幼保健院儿科山东淄博255400

目的探讨对疱疹性咽峡炎患儿进行cD3+、cD4+、cD8+淋巴细胞和IgG、IgA、IgM及补体c3、c4检测的临床意义。方法本研究检测30例疱疹性咽峡炎患儿外周血cD3+、cD4+、cD8+淋巴细胞和IgG、IgA、IgM及补体c3、c4的含量变化,并和30例健康儿童... 详细信息

目的探讨对疱疹性咽峡炎患儿进行cD3+、cD4+、cD8+淋巴细胞和IgG、IgA、IgM及补体c3、c4检测的临床意义。方法本研究检测30例疱疹性咽峡炎患儿外周血cD3+、cD4+、cD8+淋巴细胞和IgG、IgA、IgM及补体c3、c4的含量变化,并和30例健康儿童比较。结果疱疹性咽峡炎患儿组与健康儿童组比较,cD3+、cD8+明显增高(PcD4+及cD4+/cD8+比值均明显降低(P补体c3、c4的含量无明显变化(P>0.05)。结论疱疹性咽峡炎患儿存在细胞免疫和体液免疫失调,血清免疫球蛋白的降低可能与辅助诱导性T细胞亚群(cD4+)的减少和T抑制细胞(cD8+)数量增多和(或)功能不足有关。

关键词：疱疹性咽峡炎 T细胞亚群免疫球蛋白补体c3、c4