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作者：于华香天津医科大学

学位级别：硕士

目的年龄相关性黄斑变性(age-related macular degeneration,AMD)是引起中老年人低视力和盲的主要原因之一,脉络膜新生血管(choroidal neovascularization,CNV)的形成是AMD致盲的首要原因。本课题选择玻璃膜疣所含成分—补体膜攻击复合... 详细信息

目的年龄相关性黄斑变性(age-related macular degeneration,AMD)是引起中老年人低视力和盲的主要原因之一,脉络膜新生血管(choroidal neovascularization,CNV)的形成是AMD致盲的首要原因。本课题选择玻璃膜疣所含成分—补体膜攻击复合物(membrane attack complex,MAC),以激光诱导的小鼠CNV模型,观察MAC在CNV形成中的表达及作用,并用补体消耗剂蛇毒因子(cobra venomfactor,CVF)腹腔注射干预CNV形成。探索补体激活与CNV的关系,进一步阐释AMD的免疫学相关机制,为CNV的治疗提供理论依据和新方法。方法1.选择36只C57BL/6J小鼠,6-8周大,体重25-30g,雌雄不限,均经直接检眼镜、裂隙灯检查后无眼部疾病。随机分为三组,一组为对照组(n=12);二组为CVF干预组(n=12):自激光光凝前2天及激光光凝后,每天对小鼠腹腔注射0.1μg/gCVF;三组为单纯激光光凝组(n=12)。***模型制造:小鼠腹腔内注射10%水合氯醛0.3ml/100g麻醉,复方托品酰胺散瞳,爱尔凯因点眼表面麻醉,实验眼结膜囊内滴适量1%甲基纤维素,眼前放置载玻片作为角膜接触镜,能量设置:氪红激光(波长647nm),光斑直径50μm,曝光时间0.1s,输出功率能量120mw,在后极部打4个激光斑,距视盘约2视盘直径,光凝后有气泡产生为击破Bruch膜的标志,直接检眼镜观察眼底激光斑。3.分别在1、3、5、7天取出眼球,行冰冻切片,利用SABC-FITC免疫荧光染色方法观察激光区域染色阳性情况,连续冠状切片后,每只眼球选取2张激光区域完整视网膜结构分别行SABC-FITC荧光染色和HE染色,每张切片随机选取5个视野(×200倍),计数每个视野中补体9(complement9,C9)的累积光密度(integratedoptical density,IOD),HE染色光镜下观察视网膜形态学变化。4.统计学方法采用SPSS 13.0统计软件,经正态性检验和方差齐性检验,满足条件后对单一处理组或单一时间点数据采用单因素方差分析,对不同处理组不同时间点数据采用双因素方差分析,用SNK法进行比较,P＜0.05具有统计学意义。结果***染色1组小鼠视网膜为正常视网膜,表现为视网膜各层清晰,内外核层排列规则,视网膜色素上皮层(retinal pigment epithelium,RPE),Bruch膜及脉络膜结构完整。2组小鼠视网膜光凝后1天光镜下光凝区视网膜全层水肿,隆起Bruch膜和RPE层明显破坏,视网膜内、外层结构絮乱,部分缺失。光凝后3天光凝区视网膜依然水肿,隆起,可见移行增生的RPE细胞,脉络膜毛细血管充血明显,内皮细胞增生,未见新生血管形成。光凝后7天光镜下光斑区少量CNV形成。视网膜组织有水肿,轻度浆液性脱离,可见视网膜下形成瘢痕灶,瘢痕灶内有细胞排列成不规则管腔样结构,损伤部位RPE分解破碎。3组小鼠视网膜光凝后1天光镜下光凝区视网膜水肿较2组轻,余基本相同,光凝后3天光凝区视网膜依然水肿,脉络膜毛细血管充血较2组轻,光凝后7天未见新生血管生成。***-FITC组织免疫荧光染色不同处理组和不同时间点,对于小鼠C9的SABC-FITC染色的荧光强度表现不尽相同,经方差齐性检验方差齐,成正态分布。在不同处理组和不同时间点经双因素方差分析,小鼠C9的IOD差异有统计学意义(P=0.000),尚可认为各处理组和各时间点小鼠C9的IOD不同;进一步用SNK法行各组两两比较,除1,3组之间和B、C组之间小鼠C9的IOD差异没有统计学意义外(P=0.990,P=0.999),其他各组之间差异均有统计学意义(P=0.000)。在单一处理组条件下,经单因素方差分析,除1组,3组小鼠C9的IOD差异没有统计学意义外(P=1.000,P=1.000),其余组差异均有统计学意义,进一步行SNK法检验,除2组A,B与C组之间(P=0.993,P=0.924,P=0.917),小鼠C9的IOD差异没有统计学意义外,其余各组之间差异均有统计学意义(P＜0.05)。在单一时间条件下,经单因素方差分析,各组差异均有统计学意义(P=0.000)进一步经SNK法检验,除各时间段*与#组小鼠C9的IOD差异没有统计学意义(P=0.995,P=0.983,P=1.000,P=0.977)外,其余各组之间差异均有统计学意义。结论本实验成功建立了激光诱导C57BL/6J小鼠脉络膜新生血管的动物模型,通过视网膜

关键词：激光脉络膜新生血管补体9 眼镜蛇毒因子动物模型

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补体介导出血性脑损伤机制及CVF干预的实验研究

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皖南医学院学报 2005年第4期24卷 253-256页

作者：马领松周向阳费世早吴家幂储照虎张帆徐国祥皖南医学院附属弋矶山医院神经内科安徽芜湖241001 皖南医学院附属弋矶山医院病理科安徽芜湖241001

目的研究补体成分C9、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在大鼠实验性脑出血后血肿周围的表达情况,探讨C9、TNF-α在脑出血后脑水肿中的作用及应用眼镜蛇毒因子(CVF)干预后的影响.方法采用立体定向技术,将自体不凝血注入大鼠尾状核制备脑出血模型... 详细信息

目的研究补体成分C9、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在大鼠实验性脑出血后血肿周围的表达情况,探讨C9、TNF-α在脑出血后脑水肿中的作用及应用眼镜蛇毒因子(CVF)干预后的影响.方法采用立体定向技术,将自体不凝血注入大鼠尾状核制备脑出血模型,将动物分为假手术组、出血组和CVF干预组,分别在不同时间断头取脑,连续切片作C9、TNF-α免疫组化染色和HE染色,并进行脑组织含水量测定(干湿重法).结果脑出血后2h开始表达C9,24 h达高峰;TNF-α 24 h表达明显增加,48 h达高峰,各组与假手术组之间比较有差异(P＜0.05);TNF-α的表达与C9的表达呈正相关关系(r=0.833,P＜0.05);血肿周围脑组织含水量在ICH后2 h开始增加,24～72 h达高峰(P＜0.01),此后逐渐回落,1周基本恢复正常水平,对侧半球相应部位及假手术对照组脑组织含水量没有明显变化;经CVF干预后,血肿周围组织C9、TNF-α表达量明显下降,干预组与出血组之间比较有显著差异(P＜0.01).CVF干预组脑组织含水量明显低于常规ICH组(P＜0.01).结论脑出血后补体级联激活C9及TNF-α表达明显增加,CVF干预后,C9及TNF-α表达下降,脑水肿减轻,能达到神经保护作用.

关键词：脑出血补体9 肿瘤坏死因子眼镜蛇毒因子

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