检索结果-南通市图书馆

作者：淳于柳爽广西医科大学

学位级别：硕士

目的对多条人ⅡA型磷脂酶A2(phospholipase A2, PLA2)保守区域衍生多肽的杀菌活性进行研究和比较,了解它们的结构与功能的关系。方法以人ⅡA型PLA2保守区域(HDCCYKRLEKRGCGTKFLSYKFSN)24个氨基酸残基为模板,人工合成6条不同长度衍生多... 详细信息

目的对多条人ⅡA型磷脂酶A2(phospholipase A2, PLA2)保守区域衍生多肽的杀菌活性进行研究和比较,了解它们的结构与功能的关系。方法以人ⅡA型PLA2保守区域(HDCCYKRLEKRGCGTKFLSYKFSN)24个氨基酸残基为模板,人工合成6条不同长度衍生多肽(P47-70、P51-70、P51-67、P54-70、P51-63、 P58-70)。采用琼脂铺板计数法测定多肽的杀菌活性,将不同浓度的6条衍生多肽分别与G+菌(金黄色葡萄球菌)和G-菌(大肠杆菌)在37℃孵育2.5h,然后铺板并置于37℃恒温箱培养18-24h,记录每一琼脂板上的菌落形成数(CFU),计算多肽作用后的杀菌率,并对衍生多肽的杀菌活性与分子结构的关系进行分析。结果(1)6条人ⅡA型PLA2衍生多肽对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均有杀菌活性。(2)6条人ⅡA型PLA2衍生多肽对金黄色葡萄球菌的敏感性由高到低’依次为：P51-67>P51-70>P47-70>P54-70>P58-70;6条人ⅡA型PLA2衍生多肽对大肠杆菌的敏感性由高到低依次为：P51-67>P51-70>P47-70>P54-70>P51-63>P58-70。(3)杀菌活性较强的衍生肽带较多的净碱性氨基酸比,如P51-67、P51-70。结论6条衍生多肽对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的杀菌活性不同,其杀菌强度与所带净正电荷数、净碱性氨基酸所占比、两亲性等因素有关。目的研究人ⅡA型磷脂酶A2(phospholipase A2, PLA2)衍生多肽P51-67的抗菌谱,为P51-67的开发和应用奠定基础。方法以人Ⅱ A型PLA2保守区域(HDCCYKRLEKRGCGTKFLSYKFSN)24个氨基酸残基为模板,人工合成衍生多肽P51-67(YKRLEKRGCGTKFLSYK)分子,采用琼脂铺板计数法测定杀菌活性,将不同浓度衍生肽分别与G+菌(枯草杆菌、金黄色葡萄球菌、屎肠球菌)和G-菌(大肠杆菌、绿脓杆菌、鲍曼不动杆菌)在37℃孵育2.5h,然后铺板并置于37℃恒温箱培养18～24h,记录每一琼脂板上的菌落形成数(CFU),并计算分析多肽作用后的杀菌率。结果衍生肽P51-67对G+菌和G-菌均有较强的杀菌活性,当浓度为1mg/ml时,对枯草杆菌、金黄色葡萄球菌、屎肠球菌的杀菌活性分别为100%、97.68%、92.75%;对大肠杆菌、绿脓杆菌、鲍曼不动杆菌的杀菌活性分别为97.80%、91.08%、95.35%。其净碱性氨基酸所占比为29.41%,疏水性/亲水性氨基酸比为41.67%。结论PLA2衍生多肽P51-67对G+菌和G-菌均有较强的杀菌活性,可能与这一分子的净碱性氨基酸所占比高、疏水性/亲水性氨基酸比恰当有关。目的研究和比较人ⅡA型磷脂酶A2(phospholipase A2, PLA2)衍生多肽P51-67、P26和N1-11对不同细菌在体外的杀菌效应,了解结构与功能的关系。方法根据人Ⅱ A型PLA2氨基酸顺序分别设计合成三个肽分子P51-67(P51-67)、P26(p99-124)、N1-11(P1-11)。采用琼脂铺板计数法测定杀菌活性,将不同浓度衍生肽分别与G+菌(金黄色葡萄球菌)和G-菌(大肠杆菌)在37℃孵育2.5h,然后铺板并置于37℃恒温箱培养18～24h,记录每一琼脂板上的菌落形成数(CFU),计算并比较多肽作用后的杀菌率。结果在1mg/ml时,衍生肽P51-67、N1-11和P26对金黄色葡萄球菌的杀菌活性分别为97.68%、95.37%、80.23%;对大肠杆菌的杀菌活性分别为97.80%、67.41%、80.26%。衍生肽P51-67对金黄色葡萄球菌与大肠杆菌均有较强的杀菌活性,而N1-11和P26对金黄色葡萄球菌有较强的杀菌活性,但对大肠杆菌杀菌活性较弱。结论衍生自人Ⅱ A型PLA2保守区域17个氨基酸残基的肽P51-67对G+菌和G-均有较强的杀菌活性,这可能与P51-67肽分子更易于与细菌结合并发挥作用有关。

关键词：人ⅡA型PLA2 保守区域衍生肽杀菌活性构效关系衍生多肽 P51-67 人ⅡA型磷脂酶A2

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生长因子衍生肽在骨组织工程中的研究进展

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临床医学进展 2024年第3期14卷 2290-2297页

作者：潘卓敏刘雁鸣浙江大学医学院附属第二医院口腔颌面外科浙江杭州

通过生物支架递送生长因子是骨组织工程中的常用策略,在过去的几十年里取得了大量令人满意的结果。但生长因子存在的一些缺点诸如稳定性差、分子量大、成本高等阻碍了其广泛使用。近年来,一些具有相似生物活性的生长因子衍生肽由于合成... 详细信息

通过生物支架递送生长因子是骨组织工程中的常用策略,在过去的几十年里取得了大量令人满意的结果。但生长因子存在的一些缺点诸如稳定性差、分子量大、成本高等阻碍了其广泛使用。近年来,一些具有相似生物活性的生长因子衍生肽由于合成简单、性质稳定等有点受到越来越多关注。本文总结了应用于骨组织工程的生长因子衍生肽。

关键词：骨组织工程生长因子衍生多肽骨再生

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促红细胞生成素衍生肽（HBSP）抑制大鼠心脏缺血/再灌注损伤作用研究

促红细胞生成素衍生肽（HBSP）抑制大鼠心脏缺血/再灌注损伤作用...

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作者：蒋娜第四军医大学

学位级别：硕士

研究背景：冠状动脉粥样硬化性心病发病率在欧美等发达国家居首位，在我国亦高居第二，其中急性冠脉综合征的发病率逐渐上升，并呈现向年轻化发展的趋势。如今随着冠脉介入治疗技术的广泛开展，为急性冠脉综合征提供了除溶栓、抗凝等... 详细信息

研究背景：冠状动脉粥样硬化性心病发病率在欧美等发达国家居首位，在我国亦高居第二，其中急性冠脉综合征的发病率逐渐上升，并呈现向年轻化发展的趋势。如今随着冠脉介入治疗技术的广泛开展，为急性冠脉综合征提供了除溶栓、抗凝等治疗之外的多重临床选择方案，随之也增加了心脏缺血/再灌注损伤的发生率，致使再灌注治疗过程发生严重心血管事件的风险增加，为血管再通治疗带来挑战和困境。然而缺血/再灌注损伤(ischemia/reperfusion injury，I/RI)发生的机制复杂，可导致心肌细胞凋亡增加、炎症反应加重及内皮功能障碍等一系列病理生理变化，到目前为止其发生的具体分子机制仍不明确。促红细胞生成素(Erythropoietin，EPO)作为刺激骨髓造血系细胞因子，在临床上主要应用于晚期肾性贫血的治疗。大量研究表明，EPO还具有心脏、肾脏、神经等多组织器官保护作用。但是由于其能够促进红细胞生成，使循环阻力增大，增加红了细胞增多症、高血压、血管栓塞等患者血栓形成的风险，从而使其发挥细胞保护的作用无法在临床上得到真正的应用。促红细胞生成素衍生肽(helix B surfacepeptide，HBSP)是由EPO三级结构衍生而来的多肽，研究显示其在缺血性心脏和神经组织中，表现出与EPO相似的组织保护作用，并证实其无促红细胞生成的作用。然而HBSP对心脏缺血/再灌注损伤的影响尚未见报道。由此，我们研究HBSP能否对大鼠缺血/再灌注损伤心脏发挥保护作用，并研究其发挥心脏保护作用的分子机制。心脏微血管作为心脏组织的重要组成部分，其主要由心脏微血管内皮细胞构成。研究发现当心脏发生I/R损伤时心脏微血管内皮细胞可能是首要累及的部位，因此探讨HBSP能否对I/RI心脏微血管内皮细胞发挥保护作用具有重要意义。本实验以大鼠心脏I/RI为模型，研究HBSP对心脏是否具有保护作用，为缺血/再灌注治疗提供新的思路，并为HBSP的临床应用提供理论依据。研究目的： 1.验证HBSP能否对大鼠缺血/再灌注损伤心脏发挥保护作用，并与EPO保护作用相比较。 2.探讨HBSP对再灌注损伤心肌的重要作用及其机制。 3.观察HBSP对缺血/再灌注损伤心脏微血管内皮细胞的作用。实验方法： 1.用20050g雄性SD大鼠，结扎冠状动脉前降支，缺血30min后，恢复冠状动脉血流灌注，再灌注前5min分别尾静脉注射生理盐水、rhEPO(人重组促红细胞生成素)、HBSP，制备缺血/再灌注模型。 2.实验分组：假手术(Sham)组、缺血/再灌注(I/R)组、促红细胞生成素(EPO)组、HBSP组及HBSP+LY294002(PI3k特异性抑制剂，于再灌注前15min静脉注射)组。 3.经右颈动脉插管至左心室，检测再灌注3h内血流动力学指标：左室收缩压(LeftVentricular Systolic Pressure，LVSP)和左室内压力变化微分(±LVdp/dt)。采用小动物超声分别检测24h、1w后大鼠心功能，并检测24h大鼠血液红细胞数目。 4.再灌注3h后，再次结扎冠状动脉前降支，采用TTC-Evans blue双染法测定梗死面积。 5.取心脏组织，切片TUNEL/DAPI荧光标记，利用激光共聚焦显微镜检测心肌细胞凋亡。Western blot法检测心肌组织蛋白激酶B(Akt)和磷酸化Akt的表达。 6.用15000g雄性SD大鼠，分离培养大鼠心脏微血管内皮细胞(cardiacmicrovascular endothelial cell，CMEC)，制备模拟缺血/再灌注(缺氧/复氧)模型。 7.实验分组：对照组(Control);模拟缺血/再灌注(simulated ischemia reperfusion，SI/R)组;模拟缺血/再灌注+HBSP(SI/R+HBSP)组。 8.复氧3h后MTT法检测CMECs细胞活力，TUNEL法检测细胞凋亡。实验结果： 1.本实验以心电Ⅱ导联出现ST段抬高性心电图，作为心肌缺血的标志，直至再灌注观测终止时间。 2.血流动力学指标检测结果显示，与假手术组比较，缺血/再灌注损伤大鼠心功能明显降低。与I/R组相比，EPO组和HBSP组再灌注前分别静脉给予rhEPO、HBSP后，再灌注3h，大鼠心脏左室收缩压(LVSP)、左室内压最大上升速率(+dp/dtmax)以及最大下降速率(-dp/dtmax)显著升高。 3.小动物超声检测结果显示：与Sham组比较，I/R大鼠24h、1w后心功能指标均有不同程度的降低趋势。与I/R组相比，EPO组和HBSP组再灌注24h、1w后左室射血分数(LVEF%)、室间隔厚度(IVSS)及左室短轴缩短率(FS%)显著增加，24h后检测大鼠血液红细胞显示HBSP无促红细胞生成的作用。 4.再灌注3h后，TTC-Ev

关键词：缺血/再灌注促红细胞生成素衍生多肽心脏微血管内皮细胞细胞凋亡

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EPO衍生肽HBSP抑制大鼠心肌微血管内皮细胞缺血/再灌注损伤的作用研究

EPO衍生肽HBSP抑制大鼠心肌微血管内皮细胞缺血/再灌注损伤的作用...

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作者：王琛第四军医大学

学位级别：硕士

实验背景及目的:急性心肌梗死是全世界范围内致死及致残的主要病因之一。对于急性心肌梗死的患者,及时的恢复梗死冠脉的血流灌注对于缩小心梗面积、保存左室收缩功能、防止心衰发生,改善预后具有重要意义。然而,再灌注本身可导致额外的... 详细信息

实验背景及目的:急性心肌梗死是全世界范围内致死及致残的主要病因之一。对于急性心肌梗死的患者,及时的恢复梗死冠脉的血流灌注对于缩小心梗面积、保存左室收缩功能、防止心衰发生,改善预后具有重要意义。然而,再灌注本身可导致额外的心肌损伤,即缺血/再灌注损伤(I/RI)。I/RI可引起心肌收缩功能障碍及细胞损伤,抵消血管再通后血流恢复所带来的临床受益,目前尚无有效的防治措施。促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)作为一种调节哺乳动物红细胞生成、刺激红系造血的细胞活性因子,目前被广泛地应用于临床上各种原因所致的贫血的治疗。既往研究表明,除造血作用外,EPO还可对心脏、肾脏、大脑等多组织器官发挥保护作用。大量证据亦证明,EPO可减少缺血/再灌注相关的组织损伤,如心肌梗塞、出血性休克、急性肾损伤等。然而EPO本身的促红细胞生成、促血栓形成等副作用极大地限制了其临床应用推广。Brines等通过分析EPO的空间构象,合成了一种可以和EPO组织保护受体(EPOR-βc R)特异性结合的线性多肽链(Helix B-surface peptide,HBSP),此多肽链由11个氨基酸残基组成;在糖尿病大鼠视网膜病变模型、大鼠中风模型、啮齿类动物坐骨神经挤压伤等多个动物模型中,此多肽均发挥了与EPO相似的组织保护作用,并且没有EPO促红细胞生成等不良反应的发生。本课题组前期研究结果亦证实,HBSP可显著抑制大鼠心肌缺血/再灌注损伤,减少梗死面积。但是HBSP对I/RI的心肌微血管内皮细胞(CMECs)是否具有保护作用及其可能涉及的机制并未见报道。本研究旨在通过建立模拟缺血/再灌注模型,观察HBSP对于缺血/再灌注的CMECs是否有保护作用,并进一步探讨其具体机制。实验方法:分离培养大鼠CMECs,建立模拟缺血/再灌注(SI/R)损伤模型,随机分为对照组(Con组)、模拟缺血/再灌注组(SI/R组)、模拟缺血/再灌注+重组人促红细胞生成素(rh EPO,10 IU/ml)组、模拟缺血/再灌注+HBSP组;HBSP组分别选择2.5、25、50、100ng/ml浓度,通过MTT比色法及TUNEL法分别检测细胞增殖能力及凋亡率,以确定药物作用的最适浓度。确定最适浓度后采取细胞划痕实验及Transwell小室法检测细胞迁移能力,进一步验证HBSP对于CMECs的作用。为了研究HBSP的保护机制,我们将实验分为5组:对照组(Con组)、模拟缺血/再灌注组(SI/R组)、模拟缺血/再灌注+HBSP(最适浓度25ng/ml)组、SI/R+HBSP+PI3K抑制剂LY294002组、SI/R+HBSP+Rapamycin组。其中m TOR为Akt下游分子,Rapamycin为其特异性抑制剂。采用Western blot法检测Akt及磷酸化的Akt、m TOR及磷酸化的m TOR、p70S6K及磷酸化的p70S6K蛋白的表达,采取TUNEL法检测CMECs的凋亡。结果:1、成功地分离和培养了心肌微血管内皮细胞,并构建了SI/R模型。2、与对照组(Con组)相比较,SI/R组CMECs增殖能力明显降低(P<0.01),凋亡率显著上升(3.54%±0.21%vs.41.1%±0.8%,P<0.01),迁移能力下降。与SI/R组比,rh EPO组和HBSP组增殖能力明显上升(P<0.05),凋亡率显著下降(P<0.01),HBSP组迁移能力增强(P<0.01)。3、用PI3K特异性抑制剂LY294002及m TOR特异性抑制剂Rapamycin分别对细胞进行干预后,结果显示:与SI/R组相比,HBSP组Akt磷酸化水平、m TOR磷酸化水平及p70S6K的磷酸化水平均显著提高(P<0.05),细胞凋亡率下降(P<0.01);与SI/R+HBSP组相比,SI/R+HBSP+LY294002组Akt磷酸化水平、m TOR磷酸化水平及p70S6K磷酸化水平均显著下降(P<0.05),SI/R+HBSP+Rapamycin组m TOR磷酸化水平及p70S6K磷酸化水平显著下降(P<0.05)。与SI/R+HBSP组相比,此两组细胞凋亡率均增加(P<0.05)。结论:HBSP可显著抑制I/R诱导的CMECs凋亡,促进CMECs存活,提高迁移能力,改善细胞功能,其保护作用可能与PI3K/Akt/m TOR信号通路的激活有关。

关键词：促红细胞生成素衍生多肽心肌微血管内皮细胞缺血/再灌注损伤细胞凋亡哺乳动物雷帕霉素靶蛋白

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