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集成化多维液相色谱系统的构建及在血药检测中的应用

集成化多维液相色谱系统的构建及在血药检测中的应用

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中国化学会第22届全国色谱学术报告会及仪器展览会

作者：孙琼周美珍唐涛王丰琳李彤大连依利特分析仪器有限公司

多维色谱技术具有高峰容量、高分辨的优点,是近年来蛋白质组学、药物组学、代谢组学等复杂样品分离研究的重要方法之一。结合"十二五"科技部"重大科学仪器设备开发专项"的研究成果,利用多种阀接口连接多套色谱系统的流路,实现了在线富... 详细信息

多维色谱技术具有高峰容量、高分辨的优点,是近年来蛋白质组学、药物组学、代谢组学等复杂样品分离研究的重要方法之一。结合"十二五"科技部"重大科学仪器设备开发专项"的研究成果,利用多种阀接口连接多套色谱系统的流路,实现了在线富集、除盐、收集等功能;利用改进的UDP通讯协议,以太网接口,实现了数据工作站对多套系统泵、检测器、进样器、阀的控制,构建了集成化的多维液相色谱系统,并以血清的药物浓度为测试项目,开展了应用评价。

关键词：多维色谱血药检测集成化系统

来源： cnki会议评论

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超疏水复合SERS基底研制及其用于血药浓度的快速检测研究

超疏水复合SERS基底研制及其用于血药浓度的快速检测研究

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作者：吕冰倩烟台大学

学位级别：硕士

世界卫生组织及我国卫生部药物不良反应监测中心的统计资料显示,近年来因用药不当致死的人数呈增长趋势。血液中药物浓度（血药浓度）的高灵敏与快速检测是保障用药安全性的关键措施之一。色谱法是检测血药浓度的经典方法,但需要复杂的... 详细信息

世界卫生组织及我国卫生部药物不良反应监测中心的统计资料显示,近年来因用药不当致死的人数呈增长趋势。血液中药物浓度（血药浓度）的高灵敏与快速检测是保障用药安全性的关键措施之一。色谱法是检测血药浓度的经典方法,但需要复杂的前处理、大量的血浆样本、昂贵的设备和较长的分析时间。表面增强拉曼光谱（SERS）具有原位、灵敏、无损检测的优势,在药物分析中展现出巨大潜力,特别是便携式拉曼光谱仪的推广应用,促进了SERS技术用于血药浓度快速检测的应用探索。蛋白质、氨基酸等血液内源物质容易占据贵金属SERS基底表面,阻碍待测药物分子进入“热点”区域得到充分的SERS信号增强。此外,便携式拉曼光谱仪的检测灵敏度低于大型拉曼光谱仪。因此,如何实现血药浓度高灵敏检测是一个关键挑战。本论文研制超疏水复合SERS基底,借助超疏水富集作用和三维（3D）SERS热点构筑策略,显著提高便携式SERS技术的药物检测性能。在此基础上,开展米托蒽醌（MTO）和亚甲基蓝（MB）两种药物在活体小鼠血浆浓度的快速检测研究。具体研究内容如下:（1）超疏水复合SERS基底的研制。基底由硅片、超疏水银纳米粒子单层膜（简称超疏水银膜）、银包金纳米粒子（Au@AgNPs）构成。超疏水银膜由银纳米粒子（AgNPs）制备而成。通过在AgNPs溶液中加入富有超疏水结构的1H,1H,2H,2H-全氟癸硫醇,在水油界面快速自组装成单层AgNPs薄膜后,转移到亲水硅片上形成。超疏水银膜的接触角是151.9±1°。Au@AgNPs与待测物的混合液滴加到超疏水银膜表面,溶剂挥发后会聚集成约1 mm的3D阵列,待测物富集到基底内部大量的3D热点区域,以增强检测灵敏度。考察了溶剂挥发过程中硅片的放置方式对Au@AgNPs聚集状态的影响,发现硅片倒置可以提高富集能力,减少咖啡环效应。选用结晶紫（CV）为待测物,考察了NPs的浓度对超疏水复合SERS基底形貌与检测灵敏度的影响,发现AgNPs浓缩3倍时（约0.18 mg/m L）,基底形成均匀的单层膜。Au@AgNPs浓度约为1.6 mg/m L、V:V=1:1时,检测灵敏度最佳。复合SERS基底的增强能力显著高于单一的超疏水银膜或单一的Au@AgNPs,可检测低至10M的CV溶液,增强因子（EF）达到2.03×10～6。此外,通过在Au@AgNPs中引入内标（4-巯基苯甲腈）信号,提高了检测的准确性和重复性,相对标准偏差从31.6%降低至13.4%。（2）超疏水复合SERS基底用于血药浓度的检测。选择对SERS有较强响应能力的MTO和MB作为模型药物,利用便携式拉曼光谱仪研究活体小鼠血浆中药物浓度随时间的变化规律。首先,体外建立了两种药物在血浆中的标准曲线,结果表明药物浓度与SERS强度的比率呈较好的线性关系(R=0.988,R=0.989),血浆中的检测限分别为8×10M和3×10M。LC-MC对血液中MTO和MB 0.5 h的浓度分析结果(9.68×10M和1.17×10M)与超疏水复合SERS基底的分析结果(2.38×10M和1.47×10M)相近,验证了SERS分析方法的可靠性。其次,将MTO与MB分别静脉注射到小鼠体内,不同时间点采集血液,经简单的离心步骤获得血浆样本后,直接利用SERS基底进行药物浓度的定量分析。结果发现,随着注射时间的延长,MTO的拉曼强度不断下降,从0.5 h时的240.6μM浓度下降到24 h时无法检出。MB浓度下降更快,从0.5 h的13.6μM下降到7 h时无法检出,表明MTO与MB在血液中清除速率的差异性。进一步尝试MTO与MB的联合给药,结果表明可以实现两种药物的同时检测。综上所述,本论文构建了一种基于Au@AgNPs和超疏水银膜的复合SERS基底,借助携式拉曼光谱仪和简单血液样品处理,实现血药浓度的简单、快速、高灵敏SERS定量检测。本研究为血浆药物分析提供了一种便捷灵敏的新技术,为便携式拉曼技术在实际临床的推广应用带来了可能行。

关键词：超疏水基底表面增强拉曼光谱三维热点血药检测即时检测

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典型抗生素在猪体内的血药浓度检测及实用性评估

典型抗生素在猪体内的血药浓度检测及实用性评估

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作者：张华青河南科技学院

学位级别：硕士

抗生素是一种具有杀灭或抑制微生物生长繁殖的化合物,主要是由真菌、细菌和放线菌等微生物代谢产生或通过化学方法进行合成。上世纪四十年代青霉素被发现和应用后,抗生素很快成为人类对抗细菌感染的主要手段之一,被广泛应用于医疗、农... 详细信息

抗生素是一种具有杀灭或抑制微生物生长繁殖的化合物,主要是由真菌、细菌和放线菌等微生物代谢产生或通过化学方法进行合成。上世纪四十年代青霉素被发现和应用后,抗生素很快成为人类对抗细菌感染的主要手段之一,被广泛应用于医疗、农业、畜牧业和食品工业等方面。抗生素类药物在兽药中占有极大的比重,对养殖业的发展产生极大的影响。为了探究不同厂家生产的兽用抗生素在兽医临床上的有效性,本课题以不同厂家生产的头孢噻呋混悬注射液、氟苯尼考注射液、盐酸多西环素可溶性粉、氟苯尼考预混剂、替米考星预混剂、酒石酸泰万菌素预混剂、复方阿莫西林粉剂为受试目标药物,探究其在猪体内的血药浓度以及对猪的适口性评价验证,对实验数据进行对比分析。根据实验结果,为养猪企业和养猪户在兽医临床上合理有效用药提供参考,并提供相应的数据支撑。本课题选用的实验动物为健康杜长大三元杂交保育猪(杜洛克×长白×大约克),体重约20±5 kg。实验给药处理有肌肉注射、拌饲口服两种,其中头孢噻呋混悬注射液、氟苯尼考注射液选择肌肉注射给药,分别在给药后的0小时(注射前)、12小时、24小时、36小时、48小时、72小时、96小时、120小时八个时间点以及0小时(注射前)、注射后2小时、12小时、24小时、36小时、48小时六个时间点进行前腔静脉采血,血浆样品使用高效液相色谱联合质谱法进行检测,采用外标法定量,将所测得的数据用《Win Nonlin 5.2.1》计算主要药代动力学参数:AUC、C、T、T,根据实验数据对比分析不同厂家生产的药物在猪体内的血药浓度,选出效果最佳的注射抗生素。盐酸多西环素可溶性粉、氟苯尼考预混剂、替米考星预混剂、酒石酸泰万菌素预混剂、复方阿莫西林粉剂通过拌饲口服多次给药,在0 h(实验给药前)、3 h(第1天给药后3 h)、24 h(第2天给药前)、27 h(第2天给药后3 h)、48 h(第3天给药前)、51 h(第3天给药后3 h)、72 h(第3天给药后24 h,即停药24小时后)七个时间点前腔静脉采血,血浆样品使用高效液相色谱联合质谱法进行检测,采用外标法定量,绘制相应的药时曲线;同时还对拌饲口服药物进行了适口性实验,结合药时曲线和适口性分析,选出效果最佳的拌饲口服抗生素。实验优化后的分析方法专属性强、灵敏度高,满足研究要求,可以测定来自不同厂家的同类抗生素药剂在猪血浆中的含量测定。实验结果表明,不同厂家生产的同类抗生素对猪只的作用效果各有差异,在研究选用的来自不同厂家的受试抗生素药物中,主要药代动力学参数AUC和C差异较大,个体间也存在统计学差异,而养殖户普遍认可的厂家所生产的抗生素效果更为显著且用药成本相差不大。在养殖过程中,抗生素的选择推荐大众认可并且有一定名气的厂家所生产的,能更大程度的降低养殖的风险。

关键词：兽用抗生素 HPLC-MS 血药检测适口性药动力学

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