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离心跑台运动对小鼠骨骼肌炎性因子、肌再生因子及血管再生因子表达的影响

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中国康复医学杂志 2017年第11期32卷 1220-1226页

作者：刘晓光陈佩杰郑莉芳周永战赵淋淋曾志刚肖卫华上海体育学院运动科学学院上海200438 井冈山大学体育学院

目的:观察小鼠离心运动后骨骼肌炎性因子、肌再生因子以及血管再生因子的表达变化,探讨其在离心运动骨骼肌损伤修复中可能发挥的作用。方法:32只雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组(C组,n=8)和离心运动组(D组,n=24)。根据取材时间,离心运动... 详细信息

目的:观察小鼠离心运动后骨骼肌炎性因子、肌再生因子以及血管再生因子的表达变化,探讨其在离心运动骨骼肌损伤修复中可能发挥的作用。方法:32只雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组(C组,n=8)和离心运动组(D组,n=24)。根据取材时间,离心运动组又分为3个小组(运动后1d,3d和7d组)。离心运动后不同时间点取双侧腓肠肌。HE染色观察骨骼肌形态学变化,比色法检测血浆肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)活性,荧光定量PCR检测炎性因子、肌再生因子及血管再生因子基因表达的变化。结果:小鼠下坡跑后骨骼肌纤维结构无明显破坏,无显著炎性细胞浸润。与对照相比,血浆CK和LDH活性在运动后各时间点均无显著变化(P>0.05)。从基因层面看,炎性细胞标志物(MPO—嗜中性粒细胞标志物;F4/80—巨噬细胞标志物)在下坡跑后显著上升。部分炎症因子(如肿瘤坏死因子-α、白介素-1β、白介素-6)在下坡跑后显著上调。而肌再生调节因子中,只有机械生长因子和白血病抑制因子在运动后出现显著上调。而肌再生关键细胞——肌卫星细胞的特异性标记分子(分子标志—Pax7,增殖标记—Myo D,分化标记—myogenin)在离心运动后未出现显著变化(P>0.05)。此外,其他与肌肉和血管再生密切相关的再生因子(如:胰岛素样生长因子1、肝细胞生长因子、尿激酶型纤溶酶原激活物、环氧合酶2、低氧诱导因子-1α、血管内皮生长因子、血管生成素1等)在离心运动后均未见显著变化(P>0.05)。结论:从形态学表现、血清指标和基因表达综合来看,离心跑台运动并非小鼠骨骼肌损伤建模的理想方式。

关键词：离心跑台运动骨骼肌炎性因子肌再生因子血管再生因子

剔除巨噬细胞可通过抑制肌再生因子和Akt/mTOR信号通路损害骨骼肌再生

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体育科学 2018年第3期38卷 48-56页

作者：刘晓光肖卫华陈佩杰赵淋淋曾志刚周永战郑莉芳上海体育学院运动科学学院上海200438 井冈山大学体育学院江西吉安343009

目的:探讨骨骼肌挫伤修复过程中巨噬细胞与肌再生因子及Akt/mTOR信号通路间的关系,以深入研究巨噬细胞在骨骼肌挫伤修复中的作用及其机制。方法:80只雄性C57BL/6小鼠随机分为骨骼肌损伤组(S,n=32),损伤+巨噬细胞剔除组(T,n=32),未损伤... 详细信息

目的:探讨骨骼肌挫伤修复过程中巨噬细胞与肌再生因子及Akt/mTOR信号通路间的关系,以深入研究巨噬细胞在骨骼肌挫伤修复中的作用及其机制。方法:80只雄性C57BL/6小鼠随机分为骨骼肌损伤组(S,n=32),损伤+巨噬细胞剔除组(T,n=32),未损伤对照组(S Con,n=8),未损伤+巨噬细胞剔除对照组(T Con,n=8)。骨骼肌挫伤后1d、3d、7d和14d取双侧腓肠肌外层。苏木素-伊红(HE)染色观察骨骼肌形态学变化,荧光定量PCR(RT-PCR)及蛋白质印迹法(WB)检测肌再生相关因子及Akt/mTOR蛋白质合成信号分子表达变化。结果:1)HE结果显示,S组和T组骨骼肌在挫伤后第1 d和3 d肌纤维结构破坏、大量肌纤维坏死、肿胀。S组在损伤第7 d出现大量再生肌纤维,而T组在伤后第7 d仅出现少量再生肌纤维,伤后第14 d仍有大量再生肌纤维出现;2)RT-PCR结果显示,S组骨骼肌成肌分化抗原(Myo D)和肌细胞生成素(myogenin)m RNA在挫伤后表达均显著增加(P因子(MGF)外,多种肌再生因子均显著上调表达。与S组相比,T组损伤骨骼肌中多种肌再生因子表达均显著下调。4)S组骨骼肌损伤后低氧诱导因子1α(HIF-1α)和血管生成素1(Angpt1)mRNA表达均显著增加,而血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达下降。与S组相比,T组HIF-1α和Angpt1在损伤后期显著上调表达;5)WB结果显示,骨骼肌损伤后,S组pAkt/Akt、p-mTOR/mTOR、p-p70S6K/p70S6k和p-4EBP1/4EBP1表达均显著增加,而T组pAkt/Akt、p-mTOR/mTOR、p-p70S6K/p70S6k和p-4EBP1/4EBP1与T Con及S组相比均无显著变化(P>0.05)。结论:巨噬细胞在骨骼肌挫伤修复过程中发挥了重要作用,剔除巨噬细胞可损害挫伤骨骼肌再生,其机制可能与肌再生因子表达下调、蛋白质合成信号通路未激活有关。

关键词：骨骼肌损伤修复巨噬细胞肌再生因子血管再生因子蛋白质合成信号通路

通络救脑注射液两有效组分栀子苷、三七总皂苷发挥血管保护作用的配伍机制研究

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通络救脑注射液两有效组分栀子苷、三七总皂苷发挥血管保护作用的...

作者：郭晓谨北京中医药大学

学位级别：硕士

缺血性中风属于中医“络病”的范畴,其病机关键是“毒损脑络”。中药复方“通络救脑注射液”是在“毒损脑络”病机假说基础上研发的纯中药注射液,以解毒通络的治法为依据,选用通泻三焦火毒的栀子为君药,和营止血、通脉行瘀的三七为臣药... 详细信息

缺血性中风属于中医“络病”的范畴,其病机关键是“毒损脑络”。中药复方“通络救脑注射液”是在“毒损脑络”病机假说基础上研发的纯中药注射液,以解毒通络的治法为依据,选用通泻三焦火毒的栀子为君药,和营止血、通脉行瘀的三七为臣药,两者配伍解营卫之毒,和血通络,在缺血性脑损伤中发挥了良好的脑保护作用。前期的研究结果显示：该注射液具有减轻缺血后脑水肿,减少脑梗塞面积、改善神经细胞损害等作用。临床试验也显示该注射液能明显改善中风患者的临床症状,减少神经功能缺损积分。本文从通络救脑注射液有效组分栀子苷、三七总皂苷在抗氧化损伤、血管营养因子表达两个方面的作用机制及配伍特征进行深入研究,以丰富其“解毒通络”的生物学内涵,初步讨论中药复方的配伍特征,为研究现代化中药制剂提供实验依据。目的：本实验以脑微血管内皮细胞为切入点,通过氧糖剥夺制备拟缺血损伤模型,从抗氧化损伤、血管营养因子表达两个方面观察通络救脑注射液及其两有效组分栀子苷和三七总皂苷发挥血管保护作用方面各自的药效特征,以期从分子层面对该注射液的组分配伍规律和药效机制进行科学诠释,为该中药复方组分配伍的科学内涵提供实验依据。方法： 1.采用原代取材方法获得大鼠脑微血管内皮细胞(Microvascular endothelial cell, MVEC),进行培养、纯化和传代。采用氧糖剥夺的方法建立细胞拟缺血损伤模型。 2.筛选通络救脑注射液及其两组分——栀子苷、三七总皂苷的用药浓度：观察三种药物各浓度梯度对拟缺血损伤MVEC活性的影响,采用CCK-8方法检测细胞活性,从而确定三种药物发挥药效的最佳浓度。 3.观察通络救脑注射液及其两组分——栀子苷、三七总皂苷对拟缺血损伤MVEC活性的影响：将MVEC分为正常组、模型组、栀子苷组、三七总皂苷组以及通络救脑注射液组,给予相应处理后,采用CCK-8方法检测细胞活性。 4.观察通络救脑注射液及其两组分——栀子苷、三七总皂苷对拟缺血损伤MVEC氧化应激反应的影响：采用生化法检测三种药物对拟缺血损伤MVEC的丙二醛(malonicdialdehyde,MDA)含量、超氧化物歧化酶(superoxidase dismutase,SOD)活性的变化。 5.观察通络救脑注射液及其两组分——栀子苷、三七总皂苷对拟缺血损伤MVEC血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、脑源性神经营养因子(brain derived nerve factor, BDNF)表达的影响：采用免疫蛋白印记法和细胞免疫荧光法检测VEGF、BDNF在各组MVEC的表达情况。结果： 1.确定了三种药物的最佳用药浓度：通络救脑注射液411/ml,栀子苷33.2μg/ml,三七总皂苷22μg/ml为最佳药物浓度。 2.三种药物对拟缺血损伤MVEC活性的影响：三种药物均能提高拟缺血损伤内皮细胞活性,且均具有统计学差异。与三七总皂苷组比较,通络救脑注射液组细胞活性升高更加明显,且具有统计学差异(P血管营养因子VEGF、DNF表达的影响：免疫蛋白印记法结果显示：三个给药组较模型组比较VEGF的表达均有显著提高,三七总皂苷与通络救脑注射液组较模型组BDNF的表达明显升高,栀子苷组BDNF的表达升高不明显。细胞免疫荧光法结果显示与免疫蛋白印记法基本一致。结论： 1.通络救脑注射液及其有效组分栀子苷、三七总皂苷均可通过抗氧化损伤作用有效减轻MVEC拟缺血损伤,提高细胞活性。栀子苷的抗氧化作用可能与抑制自由基产生和脂质过氧化反应有关,三七总皂苷可能与增强自由基的清除有关,两组分在抗氧化损伤方面,各有侧重,相辅相成,协同配伍,起到“协同、增效”的效果。 2.通络救脑注射液及其有效组分栀子苷、三七总皂苷可能通过上调血管再生因子VEGF、BDNF的表达,促进脑缺血损伤后微血管的新生,从而恢复缺血区的血液供应,改善微血管再生环境方面保护缺血脑组织。三七总皂苷比栀子苷的作用更为明显,两组分配伍共同改善缺血区的氧血供应,保护缺血脑组织。总之,栀子苷发挥血管保护作用可能通过其抑制自由基产生和脂质过氧化反应,这可能与栀子“凉血解毒”的功效有关,三七总皂苷发挥血管保护作用可能通过增强自身自由基的清除与上调血管营养因子VEGF、BDNF的表达,这可能与三七“补虚、通络”的功效有关,二者协同配伍,共奏“解毒通络”之效,显示了中药组方配伍发挥整合调节的治疗优势。

关键词：脑微血管内皮细胞通络救脑注射液栀子苷三七总皂苷氧化应激血管再生因子

巨噬细胞剔除对损伤骨骼肌再生的影响及机制研究

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巨噬细胞剔除对损伤骨骼肌再生的影响及机制研究

作者：刘晓光上海体育学院

学位级别：硕士

研究目的:骨骼肌损伤是最常见,最棘手的运动损伤之一。骨骼肌损伤后巨噬细胞在其修复过程中发挥重要作用。但目前对骨骼肌损伤后巨噬细胞发挥作用的机制并不明了。因此,我们建立小鼠骨骼肌钝挫伤模型和巨噬细胞剔除模型,观察巨噬细胞剔... 详细信息

研究目的:骨骼肌损伤是最常见,最棘手的运动损伤之一。骨骼肌损伤后巨噬细胞在其修复过程中发挥重要作用。但目前对骨骼肌损伤后巨噬细胞发挥作用的机制并不明了。因此,我们建立小鼠骨骼肌钝挫伤模型和巨噬细胞剔除模型,观察巨噬细胞剔除后骨骼肌损伤修复过程中肌卫星细胞增殖分化、炎症因子、肌再生调节因子、趋化因子、血管再生因子、氧化应激因子表达规律及Akt/mTOR信号通路激活状况,以深入探究巨噬细胞在骨骼肌损伤修复中的作用及其机制。研究方法:80只雄性C57BL/6小鼠随机分为骨骼肌损伤组(S,n=32),未损伤对照组(SConn,n=8),损伤+巨噬细胞剔除组(T,n=32),未损伤+巨噬细胞剔除对照组(TCon,n=8)。骨骼肌钝挫伤后1d,3d,7d和14d取双侧腓肠肌。流式细胞术检测巨噬细胞剔除效果,HE染色观察骨骼肌形态学变化,荧光定量PCR及western blotting检测炎症因子、肌再生因子、趋化因子、血管再生因子、氧化应激因子、及Akt/mTOR蛋白质合成信号分子表达变化。研究结果:1.巨噬细胞剔除损害骨骼肌再生HE染色结果显示,骨骼肌钝挫伤后肌纤维结构破坏、大量肌纤维坏死、肿胀(损伤第1d,3d),损伤第7d出现大量再生肌纤维,而剔除组在伤后第7d仅出现少量再生肌纤维。伤后第14d巨噬细胞剔除组仍有大量再生肌纤维出现,提示巨噬细胞剔除损害骨骼肌再生。2.巨噬细胞剔除对肌卫星细胞增殖分化的影响荧光定量PCR结果显示,骨骼肌损伤后第1d和3d肌卫星细胞增殖标志物MyoD和分化标志物myogenin表达均显著高于对照组(p再生因子表达的影响损伤组HGF mRNA在伤后第1d,3d和7d表达量均显著增加(p因子表达的影响促炎细胞因子TNF-α mRNA在伤后第1d,3d,7d和14d表达显著增加(p因子IL-10 mRNA在伤后1-7d表达量显著增加(p因子表达的影响RT-PCR结果显示,损伤组中骨骼肌趋化因子(CCL2,CCL3,CCL8,CXCR4)mRNA在伤后1-7d表达均显著增加,而CCL4mRNA在伤后第14d表达显著降低(p因子表达的影响RT-PCR结果显示,gp91phox mRNA在伤后1d,3d和7d表达均显著增加,剔除组gp91phox mRNA在伤后7d和14d表达均显著增加(p<

关键词：骨骼肌损伤修复巨噬细胞炎症因子肌再生调节因子趋化因子氧化应激因子血管再生因子蛋白质合成信号通路

丁苯酞序贯对血管性痴呆患者认知功能的影响及机制

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慢性病学杂志 2020年第2期20卷 309-311页

作者：王利英孙洋洋河南省开封市中医院针灸科河南开封475000

目的探讨丁苯酞序贯治疗对血管性痴呆患者认知功能的影响及机制,为临床治疗提供参考。方法选取河南省开封市中医院2017年1月至2019年1月收治的100例血管性痴呆患者,按随机数字表法分为对照组和观察组,每组50例。对照组接受静脉注射丁苯... 详细信息

目的探讨丁苯酞序贯治疗对血管性痴呆患者认知功能的影响及机制,为临床治疗提供参考。方法选取河南省开封市中医院2017年1月至2019年1月收治的100例血管性痴呆患者,按随机数字表法分为对照组和观察组,每组50例。对照组接受静脉注射丁苯酞治疗,观察组在对照组基础上口服丁苯酞软胶囊,均持续治疗14周。治疗前后,采用简易精神状态量表(MMSE)、痴呆评定量表(CDR)、日常生活能力量表(ADL)评分分别评估患者的认知功能、痴呆程度及日常生活能力改善情况,测量并比较丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、血管内皮生长因子(VEGF)水平;评价并比较两组临床疗效和不良反应发生情况。结果治疗后,观察组MMSE和ADL评分高于本组治疗前和同期对照组,CDR评分低于本组治疗前和同期对照组,差异均有统计学意义(P血管性痴呆能够显著改善患者认知功能,提高临床治疗效果,可能与其抗氧化功能及促进血管再生有关。

关键词：丁苯酞血管性痴呆血管再生因子抗氧化作用认知功能