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云南和广东省流行性出血病病毒血清6型毒株(EHDV-6)的分离与遗传特性

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华南农业大学学报 2020年第4期41卷 8-15页

作者：李占鸿杨振兴林栩慧吕敏娜肖雷寇美玲廖德芳朱建波杨恒李华春云南省畜牧兽医科学院/云南热带亚热带动物病毒病重点实验室云南昆明650224 广东省农业科学院动物卫生研究所/广东省兽医公共卫生公共实验室广东广州510640

【目的】分离流行于我国南方地区的流行性出血病病毒血清6型毒株(EHDV-6),掌握分离毒株的遗传特征。【方法】对设立于我国云南和广东省的哨兵动物定期采血,进行EHDV感染情况监测与病毒分离培养。通过血清中和试验确定分离EHDV的血清型,... 详细信息

【目的】分离流行于我国南方地区的流行性出血病病毒血清6型毒株(EHDV-6),掌握分离毒株的遗传特征。【方法】对设立于我国云南和广东省的哨兵动物定期采血,进行EHDV感染情况监测与病毒分离培养。通过血清中和试验确定分离EHDV的血清型,采用一步法RT-PCR对分离的EHDV-6毒株基因节段2、3、6(Seg-2、-3、-6)进行扩增与序列分析。【结果】2012-2016年,从云南省和广东省的哨兵动物中分离出25株EHDV毒株,其中,11株为EHDV-6型。中国EHDV-6型毒株的Seg-2、-3与-6均属Eastern型,核酸序列相似性分别为99.1%、98.9%和98.8%,在系统发生树上分别聚为1个独立的中国支系。在日本引起疫病暴发的EHDV-6型毒株与中国EHDV-6型毒株具有最近的亲缘关系。日本EHDV-6型毒株在系统发生树上处于中国支系内部,Seg-2、Seg-3与中国毒株的核酸序列相似性分别为98.5%和93.9%。【结论】云南和广东省流行的EHDV-6型毒株核酸与氨基酸序列高度相似;日本和中国的EHDV-6型毒株具有最近的亲缘关系,提示中日之间可能存在EHDV的流动。研究结果为进一步开展我国EHDV-6型毒株流行病学分析、致病性、病原学诊断与疫苗制备等研究提供了基础。

关键词：流行性出血病病毒血清6型分离鉴定序列分析

血清6型猪传染性胸膜肺炎放线杆菌的分离与鉴定

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黑龙江畜牧兽医 2007年第5期 70-72页

作者：冼琼珍黄耿森叶润全顾万军佛山科学技术学院生命科学学院广东南海528231

从广东某猪场出现呼吸困难、肺脏有出血性纤维渗出性病变的病死猪中分离出1株有多形性趋向的革兰阴性球杆菌,卫星现象观察、CAMP试验及V因子依赖性试验均为阳性,用PCR方法能扩增出各血清型猪传染性胸膜肺炎放线杆菌均有的apxⅣA基因长约... 详细信息

从广东某猪场出现呼吸困难、肺脏有出血性纤维渗出性病变的病死猪中分离出1株有多形性趋向的革兰阴性球杆菌,卫星现象观察、CAMP试验及V因子依赖性试验均为阳性,用PCR方法能扩增出各血清型猪传染性胸膜肺炎放线杆菌均有的apxⅣA基因长约422 bp的特异片段,小白鼠攻毒试验显示其有致病性,血清学检测表明该分离菌为血清6型猪传染性胸膜肺炎放线杆菌。

关键词：猪传染性胸膜肺炎放线杆菌血清6型分离鉴定

猪传染性胸膜肺炎放线杆菌血清6型PCR方法的建立及初步应用

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中国兽医杂志 2016年第8期52卷 38-40页

作者：李海利徐引弟朱文豪张青娴游一郎利敏王克领张立宪侯自花河南省农业科学院畜牧兽医研究所河南郑州450002

为了建立猪传染性胸膜肺炎放线杆菌血清6型分子鉴定方法,本研究根据胸膜肺炎放线杆菌从编码荚膜多糖的碱基序列设计1对引物,扩增特异性的720 bp核酸片段。结果表明,以APP为模板,均能扩增出与预期一致的1条720 bp核酸片段,所得PCR产物经... 详细信息

为了建立猪传染性胸膜肺炎放线杆菌血清6型分子鉴定方法,本研究根据胸膜肺炎放线杆菌从编码荚膜多糖的碱基序列设计1对引物,扩增特异性的720 bp核酸片段。结果表明,以APP为模板,均能扩增出与预期一致的1条720 bp核酸片段,所得PCR产物经测序,与Gen Bank已发表的胸膜肺炎放线杆菌血清型6型的同源性达99%以上。本研究建立了PCR检测猪传染性胸膜肺炎放线杆菌血清6型分子鉴定方法,该方法的建立为猪传染性胸膜肺炎放线杆菌病的诊断和防治及鉴定提供了基础。

关键词：猪传染性胸膜肺炎放线杆菌血清6型

胸膜肺炎放线杆菌2,3,6血清型三重PCR检测方法的建立与应用

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畜牧与兽医 2016年第1期48卷 21-25页

作者：李海利朗利敏张青娴游一徐引弟侯自花王克领河南省农业科学院畜牧兽医研究所河南郑州450002

根据Gen Bank中胸膜肺炎放线杆菌(APP)荚膜多糖基因序列,设计3对引物,成功建立了检测APP 2型、3型和6型的三重PCR检测方法。该三重PCR的最低核酸检测量分别为0.25、0.5和0.25 ng/μL,对猪肺炎支原体、猪传染性萎缩性鼻炎病毒、副猪嗜血... 详细信息

根据Gen Bank中胸膜肺炎放线杆菌(APP)荚膜多糖基因序列,设计3对引物,成功建立了检测APP 2型、3型和6型的三重PCR检测方法。该三重PCR的最低核酸检测量分别为0.25、0.5和0.25 ng/μL,对猪肺炎支原体、猪传染性萎缩性鼻炎病毒、副猪嗜血杆菌的扩增结果均为阴性。对112份自然感染病猪样品的检测结果与单一PCR检测结果完全符合。结果表明,该多重PCR方法具有很好的特异性和敏感性,可用于临床APP 2型、3型和6型的检测。

关键词：胸膜肺炎放线杆菌血清2型血清3型血清6型多重PCR

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牛溶血曼氏杆菌的分离鉴定及药敏试验

中国兽医学报 2020年第6期40卷 1131-1135页

作者：刘心彭清洁彭永崇王子健章恺伦周珊锡陈曦陈颖钰郭爱珍华中农业大学动物医学院湖北武汉430070 华中农业大学农业微物国家重点实验室湖北武汉430070 华中农业大学湖北省兽医流行病学国际科技合作基地湖北武汉430070

对1例不明原因死亡牛肺脏进行了病原学分离及鉴定。根据已报道的溶血曼氏杆菌基因序列,设计合成引物。通过细菌分离、染色、16S rRNA、溶血曼氏杆菌特异性PCR扩增、荚膜血清型及生化试验来确定该菌株。结果确定该牛感染了溶血曼氏杆菌,... 详细信息

对1例不明原因死亡牛肺脏进行了病原学分离及鉴定。根据已报道的溶血曼氏杆菌基因序列,设计合成引物。通过细菌分离、染色、16S rRNA、溶血曼氏杆菌特异性PCR扩增、荚膜血清型及生化试验来确定该菌株。结果确定该牛感染了溶血曼氏杆菌,进一步分型确定为血清6型。成功从牛肺脏中分离到该菌株,从药敏试验结果可以看出该菌对大多数药物敏感。该试验对牛溶血曼氏杆菌病临床用药具有参考意义,也为牛溶血曼氏杆菌病临床诊断与治疗提供了技术参考。

关键词：牛溶血曼氏杆菌血清6型 16S rRNA 药敏试验