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SGK1对Cyclin B/Cdc2通路介导小鼠G_(1)期受精卵卵裂的调控作用及其机制

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吉林大学学报（医学版） 2024年第3期50卷 628-637页

作者：张慧灵韩迪郭文秀庞海垚孟峻内蒙古医科大学附属医院检验科内蒙古呼和浩特010050

目的:探讨血清和糖皮质激素诱导蛋白激酶1(SGK1)在小鼠细胞周期G_(1)期受精卵早期发育过程中的调控作用,并阐明相关机制。方法:取若干只4~6周龄且体质量约为20 g的雌鼠和若干只8周龄以上且体质量约为30 g的雄鼠,雌鼠腹腔注射孕马血清促... 详细信息

目的:探讨血清和糖皮质激素诱导蛋白激酶1(SGK1)在小鼠细胞周期G_(1)期受精卵早期发育过程中的调控作用,并阐明相关机制。方法:取若干只4~6周龄且体质量约为20 g的雌鼠和若干只8周龄以上且体质量约为30 g的雄鼠,雌鼠腹腔注射孕马血清促性腺激素(PMSG),每只10 IU,48 h后腹腔注射人绒毛膜促性腺激素(HCG),每只10 IU,并将注射HCG的雌鼠与雄鼠1∶1合笼过夜。取交配成功的雌鼠受精卵,注射HCG后分别于12~21 h、21~26 h、26~28 h和28~30 h收集细胞周期G_(1)期、S期、G2期及M期的受精卵,并于光学显微镜下观察不同细胞周期的细胞形态表现。收集小鼠超排卵后G_(1)期受精卵,体外转录生成mRNA后,分为未注射组、Tris-EDTA缓冲液注射组(TE注射组)和SGK1-mRNA注射组。采用SGK1抗体与KSOM培养液配置1∶25、1∶50、1∶100、1∶200和0共5种不同浓度SGK1抗体组的培养液,培养小鼠G_(1)期受精卵。Western blotting法检测各组小鼠受精卵中SGK1蛋白表达水平和各组小鼠及不同浓度SGK1抗体组HCG注射不同时间受精卵中磷酸化细胞分裂周期因子2(Cdc2)酪氨酸15位点(Cdc2-pTyr15)去磷酸化情况,相差显微镜观察各组小鼠和不同浓度SGK1抗体组受精卵发育情况,Western blotting法检测HCG注射不同时间小鼠受精卵中磷酸化SGK1-苏氨酸256位点(SGK1-pThr256)和Cdc2-pTyr15蛋白表达水平。结果:与未注射组和TE注射组比较,SGK1-mRNA注射组SGK1蛋白表达水平明显升高(P蛋白表达水平逐渐升高(P蛋白表达水平逐渐降低(P蛋白可能是小鼠G_(1)期受精卵早期发育的调控因子之一,其可能通过Cdc2调节G_(1)期受精卵发育。

关键词：血清和糖皮质激素诱导蛋白激酶1 受精卵细胞分裂磷脂酰肌醇3-激酶卵裂

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SGK1在银屑病发病机制中的作用

SGK1在银屑病发病机制中的作用

作者：孟琴琴上海交通大学

学位级别：硕士

【目的】研究SGK1在银屑病发病机制中的作用,为治疗银屑病提供可能新的靶点。【方法】1.收集银屑病患者和健康成年人血液样本,应用流式细胞术检测SGK1表达水平。2.以人外周血原代巨噬细胞和RAW264.7细胞系为观测对象研究SGK1的抑制对咪... 详细信息

【目的】研究SGK1在银屑病发病机制中的作用,为治疗银屑病提供可能新的靶点。【方法】1.收集银屑病患者和健康成年人血液样本,应用流式细胞术检测SGK1表达水平。2.以人外周血原代巨噬细胞和RAW264.7细胞系为观测对象研究SGK1的抑制对咪喹莫特诱发的银屑病样炎症的影响。3.连续10天向Balb/c小鼠腹腔内注射SGK1抑制剂EMD638683并用咪喹莫特乳膏或生理盐水涂抹Balb/c小鼠背部7天,第11天处死小鼠并取小鼠背部皮损及外周血。4.利用流式细胞术、实时荧光定量PCR、免疫蛋白印迹技术和酶联免疫吸附测定技术检测SGK1及相关炎症因子的表达。5.利用卡方检验进行计数资料比较,应用两独立样本t检验进行两组样本之间的均数比较,多组样本之间均数比较用ANOVA方差分析。【结果】1.银屑病患者外周血巨噬细胞中SGK1的表达较健康成年人明显降低。***1的抑制增加了RAW264.7巨噬细胞中由咪喹莫特诱发的银屑病样炎症反应。银屑病患者外周血原代巨噬细胞经咪喹莫特刺激后较健康成年人炎症通路的活化增加。3.经腹腔注射EMD638683抑制剂后,Balb/c小鼠背部的银屑病炎症程度较注射生理盐水组增加,皮损组织中促炎细胞因子的分泌增多。【结论】SGK1是咪喹莫特诱导的银屑病样炎症通路的潜在负调控蛋白。

关键词：银屑病血清和糖皮质激素诱导蛋白激酶1 TLR7/8-NF-κB通路免疫与癌症

益气活血解毒中药对梗阻性肾病细胞自噬的调控作用

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益气活血解毒中药对梗阻性肾病细胞自噬的调控作用

作者：柴亚男河北中医学院

学位级别：硕士

目的:观察单侧输尿管结扎(Unilateral ureteral obstruction,UUO)模型大鼠肾组织中自噬相关基因5(Autophagy associated gene 5,Atg5)、Beclin-1和微管相关蛋白1轻链3(Microtubular-associated protein 1 light chain 3,LC3)的表达,检测与其调控相关的信号通路血清和糖皮质激素诱导蛋白激酶1(Serum and glucocorticoid-induced protein kinase 1,SGK-1)、磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶1/2(Phosphorylated extracellular signal-regulated protein kinase 1/2,P-ERK1/2)、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(Phosphorylated mammal target of rapamycin,P-mTOR)的表达,探讨益气活血解毒中药对梗阻性肾病细胞自噬的作用。方法:将48只清洁级雄性Wistar大鼠随机分为假手术组(Sham)、模型组(UUO)、缬沙坦组(Val)和中药组(TCM),除假手术组外,其余各组大鼠结扎左侧输尿管复制梗阻性肾病的动物模型。缬沙坦组和中药组分别给予10mg·kg·d缬沙坦和14g·kg·d益气活血解毒中药,10天后摘取梗阻侧肾脏。通过Western blot和免疫组化检测Atg5、Beclin-1、LC3、SGK-1、P-ERK1/2和P-mTOR的表达。结果:1免疫组化检测各组大鼠Atg5、Beclin-1、LC3、P-mTOR的表达Atg5和Beclin-1在假手术组呈弱表达,均见于肾小管上皮细胞的细胞浆,在模型组表达明显增强,缬沙坦组和中药组表达较模型组均明显减弱;LC3在假手术组呈弱表达,见于肾小管上皮细胞的细胞浆和细胞膜,在模型组表达明显增强,主要见于肾小管上皮细胞的细胞膜,缬沙坦组和中药组表达较模型组均明显减弱;P-mTOR在假手术组呈阳性表达,见于肾小管上皮细胞的细胞核,模型组表达减弱,缬沙坦组和中药组表达较模型组增强,但较假手术组减弱。2 Western blot检测大鼠肾组织Atg5、Beclin-1、LC3、SGK-1、P-ERK1/2、P-mTOR的表达模型组大鼠肾组织内Atg5、P-ERK1/2的蛋白表达均较假手术组有明显的上调(P蛋白表达较模型组均有所下调(P蛋白表达均较假手术组有明显的上调(P蛋白表达较模型组均有所下调(P诱导细胞自噬激活,且与盐皮质激素受体(Mineralocorticoid receptor,MR)的活化趋势一致;2益气活血解毒中药可以通过调控SGK-1、P-ERK1/2和mTOR通路,抑制MR的活化,从而纠正梗阻性肾病中细胞自噬的异常。

关键词：益气活血解毒中药盐皮质激素受体自噬自噬相关基因5 Beclin-1 微管相关蛋白1轻链3 血清和糖皮质激素诱导蛋白激酶1 磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白

大黄酸通过抑制SGK1信号通路防治糖尿病大鼠肾纤维化

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滨州医学院学报 2013年第4期36卷 249-252,248页

作者：王学彬王芳芳张晓敏滨州医学院附属医院风湿免疫科滨州256603 滨州医学院附属医院肾内科

目的探讨大黄酸对糖尿病大鼠肾脏中血清和糖皮质激素诱导蛋白激酶1(SGK1)表达及相关纤维化指标的影响。方法雄性Wistar大鼠分为3组:正常对照组(NC组)、糖尿病组(DM组)、大黄酸组(R组)各8只,大黄酸剂量70 mg·kg-1·d-1。第8周末分别检... 详细信息

目的探讨大黄酸对糖尿病大鼠肾脏中血清和糖皮质激素诱导蛋白激酶1(SGK1)表达及相关纤维化指标的影响。方法雄性Wistar大鼠分为3组:正常对照组(NC组)、糖尿病组(DM组)、大黄酸组(R组)各8只,大黄酸剂量70 mg·kg-1·d-1。第8周末分别检测各组血糖、体重、肾重/体重、24 h尿蛋白、内生肌酐清除率。免疫组化方法检测转化生长因子β1(TGF-β1)及纤维连接蛋白(FN)表达,Western Blot检测SGK1的蛋白表达,Real time RT-PCR检测SGK1 mRNA及CTGF mRNA水平。结果与DM组比较,R组血糖、肾重/体重、24 h尿蛋白、内生肌酐清除率明显下降,病理检查发现R组较DM组系膜细胞及基质增生明显减轻。肾皮质SGK1 mRNA及CTGF mRNA水平在R组明显降低,免疫组化结果显示TGF-β1及FN均有不同程度下调。结论大黄酸可能通过抑制SGK1信号传导通路阻止糖尿病大鼠肾脏纤维化,延缓疾病向终末期进展。

关键词：大黄酸血清和糖皮质激素诱导蛋白激酶1 肾脏纤维化

miRNA-29c和miRNA-30b及其预测靶基因在子宫内膜中的表达

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国际生殖健康／计划生育杂志 2015年第2期34卷 116-118页

作者：王煜王丽岩李光鹏陈秀娟内蒙古医科大学附属医院生殖中心呼和浩特010050

目的:检测子宫内膜和蜕膜组织中miRNA-29c和miRNA-30b及其预测靶基因的表达,探讨mi RNA-29c和mi RNA-30b在子宫内膜蜕膜化中的意义。方法:选取分泌期子宫内膜组织14例(分泌期组),正常妊娠早期蜕膜组织16例(早孕组)和自然流产蜕膜组织18... 详细信息

目的:检测子宫内膜和蜕膜组织中miRNA-29c和miRNA-30b及其预测靶基因的表达,探讨mi RNA-29c和mi RNA-30b在子宫内膜蜕膜化中的意义。方法:选取分泌期子宫内膜组织14例(分泌期组),正常妊娠早期蜕膜组织16例(早孕组)和自然流产蜕膜组织18例(流产组),利用实时荧光定量聚合酶链反应(q PCR)技术检测3组中mi RNA-29c和mi RNA-30b的表达量,以及候选靶基因血清和糖皮质激素诱导蛋白激酶1(serum and glucocorticoid-inducible kinase 1,SGK1)和瘦素受体(leptin receptor,LEPR)的m RNA表达量,分析mi RNA-29c和mi RNA-30b表达与SGK1和LEPR的关系。结果:流产组中mi RNA-29c的表达量高于分泌期组,差异有统计学意义(P0.05);SGK1和LEPR在早孕组表达最高,流产组中表达最低,差异有统计学意义(P1参与子宫内膜蜕膜化。SGK1和LEPR在蜕膜中的差异表达对维持早期妊娠有一定的作用。

关键词： miRNAs 血清和糖皮质激素诱导蛋白激酶1 受体瘦素子宫内膜

红景天苷对高同型半胱氨酸诱导的小鼠膀胱胶原沉积及SGK1蛋白表达的影响

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中国药师 2018年第9期21卷 1518-1521页

作者：邢莎莎何平林杨亚飞陈林杨雨婷雷霞杨进成都大学附属医院药物临床试验中心成都610081 成都大学附属医院泌尿外科成都610081

目的:观察红景天苷对高同型半胱氨酸诱导的小鼠膀胱沉积胶原的影响。方法:40只清洁级BABLc雄性小鼠适应饲养7 d后,随机分为空白对照组、模型组(1%高蛋氨酸饮水8周)、红景天苷25 mg·kg^(-1)组(0.01%的含红景天苷饮食喂养16周,后给予1%... 详细信息

目的:观察红景天苷对高同型半胱氨酸诱导的小鼠膀胱沉积胶原的影响。方法:40只清洁级BABLc雄性小鼠适应饲养7 d后,随机分为空白对照组、模型组(1%高蛋氨酸饮水8周)、红景天苷25 mg·kg^(-1)组(0.01%的含红景天苷饮食喂养16周,后给予1%高蛋氨酸饮水8周)和红景天苷50 mg·kg^(-1)组(0.02%的含红景天苷饮食喂养16周,后给予1%高蛋氨酸饮水8周),每组10只。取膀胱组织,Masson染色检测胶原沉积;Western Blot法检测纤维化相关蛋白-血清和糖皮质激素诱导蛋白激酶1(Serum and glucocorticoid-induced protein kinase,SGK1)表达和免疫组化染色检测膀胱组织白介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)蛋白表达。结果:与模型组相比,红景天苷50 mg·kg^(-1)可显著抑制高蛋氨酸诱导的膀胱组织胶原沉积和纤维化相关蛋白SGK1及膀胱组织炎症因子IL-1β的表达(P诱导的小鼠膀胱胶原沉积和SGK1蛋白表达,同时抑制膀胱组织IL-1β蛋白表达。

关键词：红景天苷高同型半胱氨酸血清和糖皮质激素诱导蛋白激酶1 胶原沉积