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榆栀止血颗粒干预多囊卵巢综合征大鼠的机制研究

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中国中药杂志 2024年

作者：张丛慧韦方娇王秀文汪琨李梦王恩力姚景春山东中医药大学药学院中国海洋大学医药学院鲁南制药集团股份有限公司经方与现代中药融合创新全国重点实验室鲁南制药集团股份有限公司临沂市天然药物免疫药理毒理重点实验室

探讨榆栀止血颗粒对多囊卵巢综合征（polycystic ovary syndrome，PCOS）模型大鼠的治疗作用并运用代谢组学技术探究其作用机制。将大鼠随机分为正常组，模型组，榆栀止血颗粒低、中、高(0.5、1.5、4.5 g·kg-1·d-1)剂量组，阳性药组(... 详细信息

探讨榆栀止血颗粒对多囊卵巢综合征（polycystic ovary syndrome，PCOS）模型大鼠的治疗作用并运用代谢组学技术探究其作用机制。将大鼠随机分为正常组，模型组，榆栀止血颗粒低、中、高(0.5、1.5、4.5 g·kg-1·d-1)剂量组，阳性药组(二甲双胍0.2 g·kg-1·d-1)。除正常组外，其余各组灌胃1 mg·kg-1·d-1来曲唑并饲喂高糖高脂饲料，连续造模40 d后，模型组继续灌胃来曲唑和蒸馏水，给药组灌胃来曲唑和不同剂量榆栀止血颗粒，阳性药组灌胃来曲唑和二甲双胍，正常组灌胃同等体积蒸馏水，每日1次，连续50 d。采用血糖仪检测口服糖耐量（oral glucose tolerance test，OGTT）；酶联免疫吸附测定法（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）检测大鼠血清胰岛素水平；放射免疫法检测大鼠血清中卵泡刺激素（follicle stimulating hormone，FSH）、黄体生成素（luteinizing hormone，LH）、雌二醇(estradiol，E2)和睾酮（testosterone，T）水平；全自动生化分析仪检测血清中高密度脂蛋白胆固醇（high density lipoprotein cholesterol，HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（low density lipoprotein cholesterol，LDL-C）、甘油三酯（triglyceride，TG）水平；苏木精-伊红（hematoxylin -eosin，HE）染色观察大鼠卵巢组织病理改变；蛋白免疫印迹（Western blot）法检测大鼠卵巢组织中磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatidylinositide 3-kinases，PI3K）、蛋白激酶B（protein kinase B，Akt）蛋白及其磷酸化水平；超高效液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）检测PCOS大鼠粪便及血清代谢产物。结果表明，与模型组相比，给药组大鼠糖耐量受损改善，胰岛素敏感性增强；血清HDL-C、E2水平升高，LDL-C、TG、T水平下降；卵巢组织病理多囊样状态改善；卵巢组织p-PI3K、p-Akt蛋白表达水平升高；粪便代谢筛选出46个差异代谢物和10条代谢通路，主要涉及不饱和脂肪酸的生物合成、酪氨酸代谢等；血清代谢筛选出34个差异代谢物和15条代谢通路，主要涉及不饱和脂肪酸的生物合成、氨酰基tRNA生物合成等。综上所述，榆栀止血颗粒可改善PCOS糖脂、性激素紊乱，调节卵巢状态，其机制可能与影响粪便及血清代谢，激活PI3K/Akt通路有关。

关键词：榆栀止血颗粒多囊卵巢综合征内分泌粪便代谢血清代谢

饲料添加β-1,3-葡聚糖对凡纳滨对虾生长性能、血清代谢、免疫相关基因表达和抗亚硝酸氮应激能力的影响

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水生生物学报 2021年第3期45卷 593-600页

作者：赵红霞陈冰莫文艳黄文黄燕华曹俊明广东省农业科学院动物科学研究所广州510640 农业农村部华南动物营养与饲料重点实验室广州510640 广东省畜禽育种与营养研究重点实验室广州510640 广州飞禧特生物科技有限公司广州510640

实验旨在研究β-1,3-葡聚糖的不同投喂方式对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)生长、血清代谢和抗亚硝酸氮应激能力的影响。选用480尾初体重(0.43±0.01) g的凡纳滨对虾,随机分为4组,即G0(全程投喂基础饲料)、G1组(全程投喂0.1%β-1,3... 详细信息

实验旨在研究β-1,3-葡聚糖的不同投喂方式对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)生长、血清代谢和抗亚硝酸氮应激能力的影响。选用480尾初体重(0.43±0.01) g的凡纳滨对虾,随机分为4组,即G0(全程投喂基础饲料)、G1组(全程投喂0.1%β-1,3-葡聚糖饲料)、G2组(0.1%β-1,3-葡聚糖饲料7d+基础饲料7d循环)和G3组(0.1%β-1,3-葡聚糖饲料14d+基础饲料14d循环)。在养殖84d后,应用亚硝酸钠进行120h亚硝酸氮应激实验。结果显示,各实验组凡纳滨对虾生长性能和全虾营养成分没有显著性差异。在养殖84d后, G2和G3组凡纳滨对虾肝胰腺脂肪酶活性显著高于G0和G1组(P血清胆固醇和甘油三酯含量显著高于G0组(P血清总蛋白含量显著升高(P代谢和LGBP、proPO和SOD mRNA表达提高凡纳滨对虾抗亚硝酸氮应激能力。

关键词： β-1 3-葡聚糖凡纳滨对虾生长血清代谢免疫相关基因亚硝酸氮应激

聚乙二醇洛塞那肽治疗肥胖型2型糖尿病患者轴状胃切除术患者的临床研究

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中国临床药理学杂志 2024年第3期40卷 330-334页

作者：谷敬锋刘海霞冯峰张建邢东洋高昊雯王桂琦河北医科大学第一医院减重与代谢外科河北石家庄050011 河北医科大学第一医院普外科河北石家庄050011

目的观察聚乙二醇洛塞那肽注射液联合二甲双胍片对肥胖型2型糖尿病(T2DM)患者轴状胃切除术后血清代谢、血脂水平及肠道菌群的影响。方法将接受轴状胃切除术的肥胖型T2DM患者按队列法分为试验组和对照组。对照组口服盐酸二甲双胍片0.5 ... 详细信息

目的观察聚乙二醇洛塞那肽注射液联合二甲双胍片对肥胖型2型糖尿病(T2DM)患者轴状胃切除术后血清代谢、血脂水平及肠道菌群的影响。方法将接受轴状胃切除术的肥胖型T2DM患者按队列法分为试验组和对照组。对照组口服盐酸二甲双胍片0.5 g,tid。试验组在对照组治疗的基础上,联合聚乙二醇洛塞那肽注射液0.2 mg皮下注射,每周1次。2组患者均连续治疗3个月。比较2组患者的体质量指数(BMI)、血清代谢指标、血脂水平、血糖水平、肠道菌群及药物不良反应发生情况。结果本研究试验组共纳入70例,对照组共纳入50例。治疗3个月后,试验组与对照组的BMI分别为(26.35±2.36)和(29.34±3.59)kg·m^(-2),谷胱甘肽过氧化物酶分别为(192.42±13.18)和(134.27±12.86)U,白细胞介素-6分别为(6.14±1.78)和(7.65±2.09)μg·L^(-1),空腹血糖分别为(5.36±0.41)和(7.43±0.78)mmol·L^(-1),血浆总胆固醇分别为(2.55±0.67)和(3.47±0.79)mmol·L^(-1);试验组的双歧杆菌、拟杆菌、乳酸杆菌、肠杆菌、肠球菌分别为(8.79±1.36)、(9.62±1.37)、(6.74±2.15)、(7.98±0.61)和(7.23±1.29)logN·g^(-1),对照组的分别为(7.98±1.79)、(8.13±1.45)、(5.71±2.41)、(9.21±0.88)和(8.15±1.54)logN·g^(-1),试验组的上述指标与对照组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P0.05)。结论聚乙二醇洛塞那肽注射液联合二甲双胍片对肥胖型2型糖尿病患者轴状胃切除术后有显著效果。

关键词：聚乙二醇洛塞那肽注射液二甲双胍片肥胖型2型糖尿病血清代谢血脂肠道菌群

艾灸干预对胃粘膜损伤大鼠血清代谢物影响的时效机制研究

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艾灸干预对胃粘膜损伤大鼠血清代谢物影响的时效机制研究

学位级别：硕士

目的:胃溃疡是一种常见且复杂难治的消化系统疾病,其典型的病理学变化表现为胃粘膜损伤,因此胃黏膜损伤是许多难治性胃病的初始阶段。胃粘膜损伤的症状主要表现为胃粘膜炎症,糜烂和出血,在临床上有很高的发生率。我们先前的研究已经证明... 详细信息

目的:胃溃疡是一种常见且复杂难治的消化系统疾病,其典型的病理学变化表现为胃粘膜损伤,因此胃黏膜损伤是许多难治性胃病的初始阶段。胃粘膜损伤的症状主要表现为胃粘膜炎症,糜烂和出血,在临床上有很高的发生率。我们先前的研究已经证明,在经络穴位处进行艾灸刺激对抵抗胃粘膜损伤非常有效。然而,关于胃粘膜损伤的发病机理以及艾灸对该病变治疗机制的相关研究尚且不足。方法:72只SD(Sprague Dawley)雄性大鼠按照随机数字法分为四组:正常组(N组)、胃粘膜损伤模型组(M组)、艾灸胃经穴组(MA组)、艾灸非经穴组(MNA组),各组均18只。基于艾灸干预3个不同的时间点(即第1天、第4天、第7天),每个组别之间再分出3个亚组,每个亚组6只。正常组不接受造模,剩余组都建立胃粘膜损伤的动物模型,造模成功后MA组给予艾灸双侧足三里、梁门穴;MNA组艾灸双侧对照点处的穴位。实验过程中密切观察各组大鼠的一般行为学情况,实验结束后在肉眼下或者使用放大镜对大鼠胃粘膜组织进行表面观察,采集胃粘膜组织样本进行HE病理染色观察,收集大鼠的血清样本并使用核磁共振氢谱(1H-NMR)代谢组学检测技术,寻找出潜在的差异性代谢物。MetaboAnalyst用于分析所得到的代谢标志物的通路路径。结果:大鼠一般行为学观察显示:造模后模型大鼠精神变得萎靡,神情淡漠,行动力下降,安静少动,反应灵活性较差;经过艾灸干预后,大鼠精神状态逐渐恢复,活动增加,同时可观察到艾灸胃经穴组大鼠的恢复情况比艾灸非经穴组好。大鼠病理学观察结果显示:N组大鼠的胃粘膜上皮细胞整体的构造较为完整,且胃粘膜表面细胞排列正常。在胃粘膜下层和肌层未观察到明显的炎性细胞浸润;对于M组的大鼠,第1天可见胃粘膜的结构受损,黏膜消失;黏膜下层和肌层无组织,并伴有明显的炎性细胞浸润,这表明胃粘膜损伤建模成功;在第4天和第7天,M组大鼠胃粘膜的表面上皮得以部分恢复,表明在胃粘膜损伤发生过程中发生了自我修复;对于MA组的大鼠,胃粘膜的结构在不同程度上得到改善,炎症细胞浸润较少。在第4天和第7天,在同一时间点比M组好转。同时,MA组和MNA组相比较可以发现,在第4天和第7天,MA组大鼠在胃粘膜表面结构、黏膜下水肿程度和炎性细胞浸润方面都有更好的改善。观察结果表明,通过艾灸胃经穴位可以显著改善胃粘膜损伤。大鼠血清代谢轮廓比较:N组和M组在三个时间点均分离良好,这说明了胃粘膜损伤模型在血清中的整体代谢紊乱。另一方面,M组大鼠和MA组大鼠的代谢轮廓也有明显的区分,提示艾灸胃经穴对胃粘膜损伤具有较好的疗效,艾灸显著改变了模型组中代谢物的分布和含量。艾灸对胃粘膜损伤大鼠的相关代谢标志物变化及其通路的影响:经过核磁共振代谢组学检测方法,共检测出血清中13种差异性代谢物,其相关的代谢途径网络包括“缬氨酸,亮氨酸和异亮氨酸代谢”,“D-谷氨酰胺和D-谷氨酸代谢”,“丙氨酸,天门冬氨酸和谷氨酸代谢”,“甘氨酸,丝氨酸和苏氨酸代谢”,“糖酵解或糖异生”,“牛磺酸和亚牛磺酸代谢”。经过归纳总结后,这些代谢途径主要跟能量的利用、细胞活力及抗氧化能力、以及神经传导有关。结论:艾灸胃经穴可明显改善胃粘膜损伤大鼠的精神状况,其病理损伤情况如炎症、黏膜破坏,水肿等均好转;此外,代谢组学分析显示艾灸显著改变了胃粘膜损伤的代谢轮廓,对胃粘膜损伤的血清代谢物改变显示出积极的效应。艾灸治疗胃粘膜损伤的血清代谢机制是通过调节能量介体,抗氧化剂,氨基酸等,参与了能量利用,细胞活力,抗氧化能力和神经传递等通路途径。这些发现有助于阐明艾灸胃经穴对胃粘膜损伤的的治疗机制。

关键词：胃粘膜损伤艾灸 1H-NMR 足阳明胃经血清代谢

大鼠蒙医赫依病模型的建立及其血清代谢组学研究

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中文科技期刊数据库（文摘版）医药卫生 2021年第2期 88-91页

作者：道日敖额尔敦朝鲁萨出拉付喜全内蒙古民族大学蒙医药学院内蒙古通辽028000 内蒙古自治区国际蒙医医院内蒙古呼和浩特010010 内蒙古民族大学内蒙古通辽028000

初步建立符合蒙医赫依病理论的动物模型并探讨其与血清T4,GAS,CK和代谢组学指标的关系并初步探讨赫依病的本质。基于临床赫依病的症候特征和疾病特征,采用四施干预法建立赫依病动物模型,采用行为学观测、酶联免疫吸附法、代谢组学从多... 详细信息

初步建立符合蒙医赫依病理论的动物模型并探讨其与血清T4,GAS,CK和代谢组学指标的关系并初步探讨赫依病的本质。基于临床赫依病的症候特征和疾病特征,采用四施干预法建立赫依病动物模型,采用行为学观测、酶联免疫吸附法、代谢组学从多个层次对病证结合的动物模型进行评价。方法:SD大鼠随机分为空白对照组、模型组,记录大鼠行为学、体质量、心脏指数;利用 ELISA 检测血清中甲状腺素(T4),胃泌素(GAS),心肌酶(CK);采用 UPLC-QE-MS 检测血清中的差异代谢物信息。结果:行为学测得模型组体质量、心脏指数较空白对照组均显著降低(P血清样本采集的数据统计经分析鉴定出 9 种潜在生物标志物,赫依病症模型主要有7条代谢通路,分别是嘌呤代谢、嘧啶代谢、烟酸和烟酰胺代谢、托烷,哌啶和吡啶生物碱的生物合成代谢、硫代葡萄糖苷生物合成、植物次生代谢产物的生物合成、鸟氨酸,赖氨酸和烟酸生物碱的生物合。结论:四施干预法能建立符合蒙医赫依病理论的动物模型,且赫依病的发生可能与嘌呤代谢、嘧啶代谢、烟酸和烟酰胺代谢、托烷,哌啶和吡啶生物碱的生物合成代谢、硫代葡萄糖苷生物合成、植物次生代谢产物的生物合成、鸟氨酸,赖氨酸和烟酸生物碱的生物合通路有关。蒙医学是由三根理论为基础,以三根的消长和盛衰为主要依据,形成各种体质与疾病。三根包括赫依、希拉、巴达干。赫依、希拉、巴达干系机体生来固有、它不断吸收五元精微而得以滋生,以补充自身损耗,保持体内相对平衡,维持机体生理活动。在人体胚胎发育和出生后的生理活动中,三根和七素、三秽之间的相互依赖、相互对立关系成为机体主要矛盾。其中三根为矛盾的主因,占主导地位。因此三根为人体胚胎形成、正常生存乃至发病、衰老的根源。当赫依、希拉、巴达干处于相对平衡状态时,机体功能得以正常运行,否则势必引起反常变化,导致疾病的发生。[1-2]赫依病的发病原因主要以饮食、行为、气候、外因所致。依据四部医典文献记载[3]给予四施干预,建立蒙医赫依模型。并利用行为学指标、生化指标、代谢组学指标从多个层次对赫依模型进行评价,建立蒙医赫依动物模型的制备规范和评价标准提供依据。

关键词：大鼠蒙医赫依病模型血清代谢

基于UPLC-Q-TOF-MS/MS技术分析川贝母与浙贝母化学成分的差异及代谢组学研究

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基于UPLC-Q-TOF-MS/MS技术分析川贝母与浙贝母化学成分的差异及代...

作者：戢爽青海师范大学

学位级别：硕士

川贝母(Fritillaria cirrhosa D.Don)与浙贝母(Fritillaria thunbergii)是典型的传统大宗药材,暗紫贝母(Fritillaria unibracteata Hsiao et K.C.Hsia)是川贝母主要的基源植物,是川贝母药效作用体现的最佳品种,它们都具有清热化痰、润肺止咳、散结消肿的功效,药用历史悠久。在临床应用上,川贝母与浙贝母区别用药,川贝母主治清热润肺,浙贝母主治清热宣肺,而现代药理学也证明了川贝母中的暗紫贝母具有更好的镇咳祛痰效果,是川贝母基源植物中的珍品。但是目前针对川贝母与浙贝母的药效物质基础尚不明确,并且川贝母与浙贝母的药效具有“多成分,多靶点”的特点,如何完善两者药效物质的基础和如何建立两者质量控制的方法,也是川贝母与浙贝母现代化发展的最大难题和重点,而中药化学成分的研究是阐明中药药效物质、作用机制以及临床疗效的先决条件,因此寻找一种高效、灵敏、快速而系统的分析手段显得尤为重要。故本研究采用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间串联质谱法(UPLC-Q-TOF-MS/MS)技术对川贝母、暗紫贝母、浙贝母以及青海不同地域野生川贝母的化学成分进行快速分析和结构鉴定,再通过代谢组学的方法来分析川贝母、暗紫贝母、浙贝母间化学成分的差异以及青海果洛州、青海玉树州所采集的野生川贝母在不同地域上化学成分的差异,以此来丰富川贝母、暗紫贝母、浙贝母化学成分的构成,为三种贝母和青海不同地域的川贝母药效物质基础的研究和质量标准的制定提供可靠的支撑数据。除此之外,本研究还基于“中药血清药物化学”的方法,对大鼠体内暗紫贝母、浙贝母醇提物的原形入血成分和代谢产物进行分析鉴定,进一步阐明暗紫贝母、浙贝母发挥药效的代谢途径,探讨了暗紫贝母、浙贝母在体内的代谢机制。本研究的主要结果如下:1.川贝母与暗紫贝母化学成分的差异性分析(ESI)首次采用UPLC-Q-TOF-MS/MS技术,在负离子模式下对川贝母、暗紫贝母的化学成分进行全面的定性分析,通过对比化学成分的裂解规律,结合精确相对分子量、二级质谱信息、文献信息和Pub Med、Pub Chem、Mass Bankd等数据库,共鉴定出45个化合物,其中35个来源于川贝母,36个来源于暗紫贝母;共得到7种化学成分类型,包括生物碱类成分15个,脂肪酸类成分13个,苯丙素类成分8个(包括木脂素成分2个),萜类成分4个,皂苷类成分3个,黄酮类成分1个,糖类成分1个;通过主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)筛选得到垂茄次碱苷、半夏酸等4个差异化合物,发现除半夏酸外其余差异化合物的丰度值均为川贝母高于暗紫贝母,为川贝母、暗紫贝母的质量控制及药效物质基础的研究提供了参考,为后期的实验提供了基础建库数据。2.青海不同地域川贝母化学成分的差异性分析在正离子模式下采集数据,共鉴定出54种化学成分,其中生物碱类成分32个(甾体类生物碱9个,异甾体类生物碱23个),脂肪酸类成分8个,核苷类成分5个,糖类成分1个,恶唑烷类成分1个,酰胺类成分1个,未鉴定成分6个;5个化合物经对照品比对确认;18个化合物首次在该属得到鉴定;通过PC A、OPLS-DA分析得到了青海省玉树州、果洛州所采集20种野生川贝母的7个差异化合物,包括腺苷、梭砂贝母碱、垂茄次碱苷、异浙贝甲素、科迪林、湖贝嗪、鄂贝定碱,发现果洛州采集的川贝母在7个差异化合物的丰度值均高于玉树州采集的川贝母,比较了青海不同地域间川贝母化学成分的差异,为川贝母的质量控制、野生资源保护及青海不同地域川贝母道地性的研究提供了科学依据。3.暗紫贝母、川贝母、浙贝母化学成分的差异性分析(ESI、ESI)在正、负离子模式下采集数据,共鉴定出72种化学成分,其中生物碱类成分44个,脂肪酸类成分12个,核苷类成分4个,木脂素类成分4个,糖类成分3个,恶唑烷类成分1个,酰胺类成分1个,氨基酸类成分1个,裂环醚萜类成分1个,其他类成分1个,未鉴定成分9个;32个化合物首次在该属得到鉴定;通过PCA、OPLS-DA分析得到暗紫贝母与川贝母共28个差异化合物,暗紫贝母与浙贝母共22个差异化合物,浙贝母与川贝母共23个差异化合物,进一步完善了三种贝母的化学成分的构成、为三种贝母的临床应用的研究提供了参考,对三种贝母的开发、利用具有重要的意义。4.暗紫贝母与浙贝母在大鼠血清中代谢产物的研究首次采用UPLC-Q-TOF-MS/MS技术并结合UNIFI软件和人工分析,对大鼠灌胃暗紫贝母、浙贝母醇提物后的血清中原形入血成分及代谢产物进行全面表征,共得到贝母素乙,贝母辛,湖贝嗪,西贝母碱,浙贝丙素5个原形入血成分,通过对比空白血清、含药血清的数据,在暗紫贝母醇提物血清组中共鉴定了33个代谢产物、浙贝母醇提物血清组共鉴定了34个代谢产物,其中暗紫贝母醇提物血清组有6个独有的代谢产物,分别由贝母辛、西贝母碱苷、浙贝丙素、湖贝甲素苷、

关键词：川贝母浙贝母暗紫贝母 UPLC-Q-TOF-MS/MS 化学成分差异化合物代谢组学血清代谢

罗非鱼鱼头脂质改善大鼠骨质疏松症的作用及其机制研究

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罗非鱼鱼头脂质改善大鼠骨质疏松症的作用及其机制研究

作者：朱玉杰海南大学

学位级别：硕士

随着我国老龄化人口趋势的加剧,由骨质疏松导致的骨折使老年人的生活质量和生存率严重下降,骨质疏松症已演变成一种严重的公共健康问题。然而,现存治疗骨质疏松药物副作用大不能长期服用。而膳食中天然存在的功能因子因功效良好,副作用... 详细信息

随着我国老龄化人口趋势的加剧,由骨质疏松导致的骨折使老年人的生活质量和生存率严重下降,骨质疏松症已演变成一种严重的公共健康问题。然而,现存治疗骨质疏松药物副作用大不能长期服用。而膳食中天然存在的功能因子因功效良好,副作用小,安全而受到研究者的广泛关注。罗非鱼作为中国最大的养殖淡水鱼类,加工过程中产生大量的副产物,提高副产物的高值化利用对增加企业利润和保护环境有着重要意义。罗非鱼鱼头脂质(Tilapia Head Lipids,THLs)富含n-3不饱和脂肪酸,长期食用可以防止心脏、免疫和炎症等各种疾病的发生。本研究为了探究罗非鱼鱼头脂质改善骨质疏松的作用,建立去卵巢大鼠骨质疏松模型,评价了罗非鱼鱼头脂质改善大鼠骨质疏松症的作用,揭示了罗非鱼鱼头脂质对大鼠肠道菌群和血清代谢的影响,明确了其改善骨质疏松的作用机制。主要研究内容及结果如下:THLs的制备:采用Floch法从湿鱼头中提取THLs,计算得率为3.4%(按湿重计算)。通过硅胶柱层析法对THLs进行脂质分离,结果显示:中性脂、磷脂和糖脂占THLs的比例分别为77.84%、11.86%和6.47%。采用气相色谱法分析鱼头脂质的脂肪酸组成,结果表明:THLs中多不饱和脂肪酸(polyunsaturated fatty acid,PUFA)含量为2.56%。其中,二十二碳六烯酸(Docosahexaenoic Acid,DHA)和二十碳五烯酸(Eicosapentaenoic Acid,EPA)占THLs的比例分别为0.63%和0.11%。THLs对去卵巢大鼠骨质疏松的改善作用:通过对大鼠进行双侧去卵巢手术,建立骨质疏松大鼠模型,经H&E(苏木精-伊红,hematoxylin-eosin)染色和MicroCT评价骨组织改善效果。结果显示,THLs可明显改善骨组织结构,骨密度增大,骨体积分数增加,骨小梁数量增多,骨小梁分离度降低和骨结构模型指数变小。采用ELISA法测定骨代谢指标,结果显示,THLs可明显增加血清中的骨形成指标,如骨源性碱性磷酸酶(bone-specific alkaline phosphatase,BALP)、骨钙素(osteocalcin,OCN)、前胶原Ⅰ型C末端前肽(procollagen type 1 C-terminal propeptide,PICP)和Runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor 2,Runx2)。而血清抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRACP)、羧基末端交联1型胶原末端肽(carboxy-terminal crosslinked telopeptide of type 1collagen,CTX-1)、组织蛋白酶(cathepsin K,Cath-K)、基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinases-9,MMP-9)和尿液脱氧吡啶啉(deoxypyridinoline,DPD)等骨吸收指标则显著降低。以上结果显示,THLs可明显改善去卵巢大鼠的骨质疏松症。THLs通过调节肠道微环境改善骨质疏松的作用机制:为了探究THLs对大鼠肠道微环境的调节作用,本研究通过16S r DNA高通量测序测定各组大鼠肠道菌群,采用H&E染色法评价了十二指肠的组织形态,免疫组化染色法测定了十二指肠M1样巨噬细胞的生物标志物CD68的表达,ELISA法测定了炎症因子的表达。结果表明,THLs显著降低了肠道菌群中引发骨质疏松症的关键菌Alistipes的丰度,改善十二指肠的组织形态,下调CD68的表达,表明炎性细胞浸润减少;炎症因子测定结果显示,THLs干预可显著下调炎症细胞因子M-CSF、TNF-α、IL-6和IL-17等蛋白的表达。以上结果表明,THLs通过调整肠道菌群减轻炎症,挽救骨丢失,改善骨质疏松。为了进一步探究THLs改善骨质疏松的分子机制,分别采用免疫组化法、q RT-PCR、Wsetern-Blot法测定了肠源性血清素(5-羟色胺,5-hydroxytryptamine,5-HT)在大鼠十二指肠的表达以及Wnt/β-catenin通路关键基因和关键蛋白的表达量。结果显示,THLs通过下调5-HT表达,激活Wnt/β-catenin信号通路,从而有效促进成骨细胞的分化,进而对骨形成带来有益的影响,从而改善骨质疏松症。THLs对去卵巢大鼠血清代谢物的影响:为了探究THLs对去卵巢大鼠血清代谢物及代谢途径的影响,采用UPLC-MS/MS方法测定大鼠血清代谢物变化,筛选出血清中的差异代谢物,进一步对差异代谢物进行分析,确认与骨质疏松关系密切的代谢途径。血清代谢物的主成分分析、偏最小二乘法判别分析和差异代谢物筛选等结果表明,THLs可调节OVX大鼠的代谢过程。经过进一步对差异代谢物和代谢通路的分析表明,THLs通过调节

关键词：罗非鱼鱼头脂质骨质疏松肠道菌群血清代谢

当归不同部位多糖构效关系及其对小鼠结肠炎的保护机制探究

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当归不同部位多糖构效关系及其对小鼠结肠炎的保护机制探究

作者：李岑宇四川农业大学

学位级别：硕士

多糖作为当归(Angelica sinensis(Oliv.)Diels)的主要活性成分之一,具有免疫调节、抗炎、抗氧化、抗肿瘤等多种生物活性。当归传统常以归头、归身、归尾以及全归四个部位入药,其药理活性和主要活性成分存在差异。现有研究大多对比其脂... 详细信息

多糖作为当归(Angelica sinensis(Oliv.)Diels)的主要活性成分之一,具有免疫调节、抗炎、抗氧化、抗肿瘤等多种生物活性。当归传统常以归头、归身、归尾以及全归四个部位入药,其药理活性和主要活性成分存在差异。现有研究大多对比其脂溶性成分,如挥发油、阿魏酸的活性和含量差异,但缺乏对其水溶性成分多糖的药理作用和差异性的研究。除此之外,目前关于当归多糖的研究多集中在根部,而地上部分作为当归植物的重要组成部分具有丰富的活性成分和药理活性,却鲜有相关研究。基于此,本研究从归头、归身、归尾、全归、茎叶五个部分分离纯化得到五种均一性多糖,结合体外LPS诱导的IPEC-J2细胞炎症模型,初步分析结构和活性的构效关系。同时将上述实验中筛选得到的高活性多糖组分用于探讨其对DSS诱导的小鼠溃疡性结肠炎的预防保护效果,并通过非靶向代谢组学和炎症因子相关性分析筛选出某一标志性代谢产物,以及通过高通量测序分析阐明其对肠道微生物菌群的影响;同时检测TLR4/My D88/NF-κB通路从而初步阐明当归多糖保护结肠炎机制。最后通过重复试验验证此代谢产物是否和当归多糖具有相似的抗炎效果及抗炎机制。1.五种当归酸性多糖的提取、分离和纯化本研究以水提醇沉法以及离子交换凝胶色谱从当归不同部位分离得到以酸性多糖为主的纯化多糖成分(ASPs):当归头部酸性多糖(ASP-H-AP)、当归身部酸性多糖(ASP-B-AP)、当归尾部酸性多糖(ASP-T-AP)、当归全身酸性多糖(ASP-Hb-AP)、当归茎叶酸性多糖(ASP-Ag-AP),其得率分别为24.0%、36.7%、47.1%、25.9%和28.6%;经分子排阻色谱证明上述酸性组分为均一的纯化组分。结果表明,不同部位酸性多糖纯化得率均存在较大差异,其中当归尾部酸性多糖ASP-T-AP纯化得率最高,ASP-H-AP纯化得率最低。2.五种当归酸性多糖的结构解析及体外抗炎活性研究通过采用高效液相色谱(HPLC)、红外光谱(FT-IR)、气质联用色谱(GC-MS),凝胶渗透色谱(GPC)和粘度仪检测不同部位酸性多糖的单糖组分、有机基团、糖苷键、分子量、粘度,阐明五种酸性多糖的基本结构。并用LPS诱导猪小肠上皮细胞IPEC-J2产生炎症,通过RT-q PCR检测其IL-6、IL-Iβ、TNF-α的m RNA以评估ASPs的体外抗炎能力。结果表明,当归不同部位多糖分子量差异较大,粘度大小和分子量趋势一致。同时在五种酸性多糖内均发现属于果胶多糖的结构域,且都具有良好的抗炎活性,活性和结构均存在差异,活性高低依次为:ASP-H-AP>ASP-Ag-AP=ASP-Hb-AP>ASP-B-AP>ASP-T-AP。由于当归茎叶廉价易得,来源广泛,其酸性多糖组分ASP-Ag-AP亦具有较高的抗炎活性。因此,我们将进一步研究ASP-Ag-AP对DSS诱导的溃疡性结肠炎的预防保护作用。3.当归茎叶酸性多糖(ASP-Ag-AP)对DSS诱导的溃疡性结肠炎的保护作用本研究采用经水饲喂2.5%DSS(m/v)7天诱导的小鼠溃疡性结肠炎小鼠模型为病理模型。选取预饲7天适应环境后的60只C57BL/6N雄性小鼠分为空白对照组、模型组、阳性药物组(美沙拉嗪肠溶片)、ASP-Ag-AP低、中及高剂量组,每组10只,按照组别设置连续灌胃14天。在灌胃第7天开始替换结肠炎小鼠组别的饮用水为2.5%DSS直至实验结束,同时记录体重、饮食、粪便隐血情况以及其他病理症状。在实验第14天断颈处死小鼠后,收集结肠组织以作切片和H&E染色观察肠道组织病理变化,用RT-q PCR测定炎症因子及通路蛋白的基因表达量,用ELISA测定炎症因子蛋白含量;另收集血清用ELISA分析血清中炎症因子蛋白变化;收集盲肠内容物测定短链脂肪酸(SCFAs)含量。结果表明,ASP-Ag-AP对DSS诱导的小鼠溃疡性结肠炎有保护作用,能够降低血清中和结肠中炎症因子IL-6、TNF-α、IL-1β的含量,同时减少血清中升高的LPS含量和结肠中升高的MPO含量;RT-q PCR验证表明,ASP-Ag-AP可以通过抑制TLR4/My D88/NF-κB通路降低炎症因子分泌从而缓解小鼠溃疡性结肠炎。4.ASP-Ag-AP通过调节肠道菌群和血清代谢改善结肠炎在上述实验中,同时收集空白组、模型组和ASP-Ag-AP高剂量组血清进行非靶向代谢组学分析;收集粪便进行高通量测序用以分析肠道菌群变化;通过Spearman关联分析代谢物,肠道菌群和炎症因子的关系,以筛选出生物标志物。非靶向代谢组学分析结果表明结肠炎小鼠的血清代谢谱紊乱,其中受影响的27个代谢物经灌胃ASP-Ag-AP(高剂量)后得到显著恢复;16s高通量序列分析表明结肠炎小鼠的菌群结构发生改变,而ASP-Ag-AP可以使小鼠菌群组成恢复稳定,表现在升高有益菌Lactobacillus和降低有害菌群Bacteroides、Str

关键词：当归多糖结肠炎血清代谢肠道微生物 5-甲基-DL-色氨酸

饲粮中添加甜菜碱对断奶仔猪生长性能和血清生化指标的影响

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动物营养学报 2012年第6期24卷 1085-1091页

作者：董冠杨维仁杨在宾姜淑贞张桂国郭凯山东农业大学动物科技学院泰安271018 山东省济宁市南阳湖农场济宁272000

本试验旨在研究饲粮中添加甜菜碱对断奶仔猪生长性能和血清生化指标的影响。选用体重(7.12±0.11)kg断奶后1周的"杜×长×大"仔猪160头,随机分为4组,每组4个重复,每个重复10头。对照组饲喂基础饲粮,试验组分别饲喂在基础饲粮上添加600、... 详细信息

本试验旨在研究饲粮中添加甜菜碱对断奶仔猪生长性能和血清生化指标的影响。选用体重(7.12±0.11)kg断奶后1周的"杜×长×大"仔猪160头,随机分为4组,每组4个重复,每个重复10头。对照组饲喂基础饲粮,试验组分别饲喂在基础饲粮上添加600、900、1 200 mg/kg甜菜碱的试验饲粮。试验期28 d。结果表明,饲粮中添加甜菜碱能够显著提高仔猪的平均日采食量和平均日增重(P血清生长激素和胰岛素样生长因子Ⅰ的含量(P血清尿素氮和低密度脂蛋白含量(P血清中总蛋白、白蛋白、甘油三酯、胆固醇、高密度脂蛋白含量和代谢酶的活性无显著影响(P>0.05)。由此可见,饲粮中添加甜菜碱可以提高断奶仔猪的生长性能,促进蛋白质的沉积和脂肪代谢,其中以添加量600 mg/kg效果最好。

关键词：甜菜碱断奶仔猪生长性能血清代谢