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血清／血浆microRNA及其应用

医学分子生物学杂志 2010年第2期7卷 180-183页

作者：赵康辰崔仑标史智扬江苏省疾病预防控制中心病原微生物研究所南京市210009

微小核糖核酸（microRNA，miRNA）在生物体的生长、发育及疾病的发生发展等过程中起着十分重要的作用。目前，人们关注的主要是miRNA在组织细胞内的功能。然而，最近的研究发现血清／血浆中存在一些循环的miRNA，血清／血浆miRNA在肿瘤... 详细信息

微小核糖核酸（microRNA，miRNA）在生物体的生长、发育及疾病的发生发展等过程中起着十分重要的作用。目前，人们关注的主要是miRNA在组织细胞内的功能。然而，最近的研究发现血清／血浆中存在一些循环的miRNA，血清／血浆miRNA在肿瘤、糖尿病等多种疾病中呈特异性表达，提示血清miRNA可作为潜在的生物标记物用于疾病的诊断和治疗。

关键词：血清/血浆微小核糖核酸诊断治疗

实时荧光定量PCR检测血清/血浆microRNAs临床应用前的准备

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分子诊断与治疗杂志 2015年第3期7卷 211-216页

作者：邓开凤戴盛明广西医科大学第四附属医院医学检验科柳州市肿瘤疾病与防治重点实验室广西柳州545005

现已证明血清/血浆microRNAs(miRNAs)表达谱的变化与多种疾病的发生、发展相关。血清/血浆miRNAs分子稳定,不易降解,且标本采集创伤小、便捷,非常适合应用于临床实验室检测。因此miRNAs极有可能成为未来疾病诊断和预后评估的分子标志物... 详细信息

现已证明血清/血浆microRNAs(miRNAs)表达谱的变化与多种疾病的发生、发展相关。血清/血浆miRNAs分子稳定,不易降解,且标本采集创伤小、便捷,非常适合应用于临床实验室检测。因此miRNAs极有可能成为未来疾病诊断和预后评估的分子标志物乃至治疗靶标。实时荧光定量PCR检测法(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)操作简便,需要的RNA量较少,灵敏度极高,能在短时间内获得结果,并可同时检测多种miRNAs表达,有良好的应用前景。本文将详细探讨现阶段用于血清/血浆miRNAs定量检测的RT-qPCR方法,以及总结血清/血浆miRNAs定量检测应用于临床检验应注意的问题。

关键词： MicroRNAs 血清/血浆实时荧光定量PCR

基于色谱质谱联用的代谢组学样本收集处理程序标准化和代谢综合征研究

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基于色谱质谱联用的代谢组学样本收集处理程序标准化和代谢综合征...

作者：林璋中南大学

学位级别：硕士

摘要：代谢组学是一门新兴的生物学分支,是20世纪90年代末继三大组学即基因组学、转录组学和蛋白质组学之后兴起和发展起来的,是研究生物系统受到了刺激或扰动后其代谢组变化的科学。代谢组学着重研究代谢物质的代谢途径及其所受到各种... 详细信息

摘要：代谢组学是一门新兴的生物学分支,是20世纪90年代末继三大组学即基因组学、转录组学和蛋白质组学之后兴起和发展起来的,是研究生物系统受到了刺激或扰动后其代谢组变化的科学。代谢组学着重研究代谢物质的代谢途径及其所受到各种内、外在因素影响下代谢途径的变化来研究某些病理生理过程中所产生的系列事件。近年来,代谢组学在各研究领域也显现出了广阔的应用前景包括疾病诊断、药物研发、药效和毒性评价、药物作用机理研究及植物代谢组学等。血清是代谢组学中一种理想的用来寻找生物标记物的生物流体。首先,本实验采用了气相色谱-质谱联用技术系统全面地评估了血清样本在收集处理过程中所有可能对代谢轮廓产生影响的因素,主要包括：血液收集过程中收集管的种类、抗凝剂的选择及凝结过程中时间和温度的不同及重复多次的冷冻解冻循环等。结果表明：样本的收集、处理和储存程序中各步骤对血清代谢轮廓的影响程度不同。其次,在代谢组学的实际研究中,血清血浆二者通常被认为在组成和性质上相似而被任意取代来进行相关生物和临床的研究。血清和血浆是否完全一样或二者是否可以任意替代来进行代谢组学的相关研究呢?此处采用基于质谱的两种检测手段(GC-MS;LC-QTOF-MS)来全面分析比较大鼠血清和血浆的代谢指纹图谱的区别。GC-MS的研究结果发现：25.8%的代谢物在血清血浆样本中含量存在显著性差异(t-检验,p血清中的含量普遍高于血浆由此得出血清比血浆更适宜于生物标记物的发现;LC-QTOF-MS研究结果发现,正、负离子模式下分别识别出了13种和7种内源性代谢物主要对血清血浆指纹图谱的分类贡献最大。通过以上两部分基础研究实现了将实验室内部代谢组学的操作程序进行了规范化并建立了相关标准实验操作程序(Standard Operation Procedure, SOP),为后期进行长期的疾病研究和生物标记物的发现奠定了基础。第三,代谢综合征(metabolic syndrome, MetS)是多种代谢成分异常聚集的病理状态,其集簇的危险因子主要包括高血压、血脂异常、糖尿病、肥胖等。基于已建立的标准实验操作程序SOP,这里提出了一种基于气质联用和随机森林的代谢组学方法来研究代谢综合征的血清样本。研究结果发现,相比于传统的主成分分析和偏最小二乘判别分析法,随机森林模型能将疾病组和健康组进行很好的分类,并且找出了相关的生物标记物(2-羟基丁酸、肌醇和d-葡萄糖),并合理地解释了这些生物标记物所涉及到的病理生理过程和代谢通道的紊乱,从而揭示出了采用气质联用和随机森林方法研究代谢综合征样本的可靠性,这对我们进一步进行生物学研究和临床指导有一定的借鉴作用。

关键词：代谢组学代谢综合征血清/血浆色谱质谱联用化学计量学生物标记物

MiR-183在肝癌中的表达水平及其临床意义

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MiR-183在肝癌中的表达水平及其临床意义

作者：梁增辉天津医科大学

学位级别：硕士

第一部分MiR-183在肝癌中的表达水平及其临床意义 MicroRNAs (miRNAs)是一种内源性、非编码的小分子RNA,在肿瘤组织中异常表达,并且在肿瘤的发生发展过程中发挥类似癌基因或抑癌基因的作用。在肝癌的研究中发现,miRNA在肝癌组织中异常表... 详细信息

第一部分MiR-183在肝癌中的表达水平及其临床意义 MicroRNAs (miRNAs)是一种内源性、非编码的小分子RNA,在肿瘤组织中异常表达,并且在肿瘤的发生发展过程中发挥类似癌基因或抑癌基因的作用。在肝癌的研究中发现,miRNA在肝癌组织中异常表达,miRNAs的表达水平与肝癌患者的临床病理因素相关,可能成为新的肝癌患者诊断和预后评估的指标。目的：在本实验室前期研究结果显示,miR-183在肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma, HCC)异常表达。然而,miR-183在良性肝病到HCC过程中表达水平的变化及其与临床病理因素的联系尚不明确。本实验旨在研究miR-183在各种肝病中的表达水平,探讨miR-183与临床病理因素的联系及其在肝癌诊断和预后评估中的价值。方法：应用TaqMan qRT-PCR方法检测健康对照组(n=21)、肝炎组(乙型肝炎或丙型肝炎)(n=10)、肝硬化组(n=18)、肝癌及其癌旁组织(n=92)中miR-183和U6的表达水平;以2-△△cT法计算miR-183相对表达量。结果：MiR-183在健康对照组、肝炎组、肝硬化组、癌旁组及HCC组的相对表达量分别为1.254(0.415～2.592),2.825(1.964～4.670),2.249(0.868～4.821),4.121(1.684～11.179),9.373(2.761～29.437);MiR-183在HCC组的表达水平高于癌旁组、肝硬化组、肝炎组和健康对照组(P=0.001,P0.05),与患者TNM分期(P=0.042)和是否伴有肝硬化(P=0.025)相关。Kaplan-Meier生存分析显示：miR-183与肝癌患者术后生存时间无明显相关。多因素Cox回归模型分析显示肝癌的生长方式(P=0.007)和血管侵犯(P=0.008)是肝癌患者预后独立危险因素,而miR-183与肝癌预后无关。ROC曲线分析组织miR-183区别肝癌和其他组(健康对照、肝炎和肝硬化)的价值：曲线下面积为0.808,敏感性为59.8%,特异性为91.8%;结论：MiR-183可能参与肝癌的发生和发展过程,但是与肝癌患者预后无明显相关。MiR-183是否可以作为肝癌的诊断标志物有待进一步研究。第二部分肝病患者血清/血浆miRNA检测方法的探讨 MiRNAs可以在血清/血浆中稳定表达,能够耐受反复冻融、异常PH环境和高温等恶劣条件。在不同疾病状态下/／血浆miRNA差异表达,并且具有组织特异性,这些特征是血清/血浆miRNA可能成为新诊断标志物的基础。目的：探讨肝病患者血清/血浆niRNA检测方法,为进一步研究血清/血浆miRNA作为肝病诊断标记物提供方法学依据。方法：采用miRcute miRNA提取试剂盒提取健康人血清/血浆各21例,肝炎患者血清/血浆各19例,肝硬化患者血清/血浆各12例,肝癌患者术前血清/血浆各19例;以miRNeasy serum/plasma试剂盒提取肝癌患者术前血清/血浆各19例;利用分光光度计检测血清/血浆miRNA的提取效果,以实时荧光定量PCR技术检测U6和niR-183的表达水平。以2-△△cT法计算miR-183相对表达量。结果：MiRNeasy试剂提取效果(血清和血浆标本260nm下的吸光度、260nm与280nm(260/280)比值、260nm与230nm(260/230)比值、U6和miR-183)均优于miRcute试剂,差异有统计学意义(P值均小于0.05),两种试剂盒提取标本的扩增曲线CT值均小于35;健康对照组和肝硬化组血浆U6含量高于血清(P=0.000,P=0.011);肝炎组血清U6含量有增高趋势,但差异无统计学意义(P=0.312);而肝癌组血清miRNA含量高于血浆(P=0.022);血清MiR-183在健康对照组、肝炎组、肝硬化组和肝癌组的相对表达量分别为2.06(0.271-4.429)、4.427(1.580-5.372)、5.203(0.751-18.472)和2.534(0.332-10.885)。各组之间差异无统计学意义(P值均大于0.05)。血浆MiR-183在健康对照组、肝炎组、肝硬化组和肝癌组的相对表达量分别为1.738(0.455-3.722)、8.202(4.138-20.591)、1.241(0.577-8.073)和33.081(24.606-86.759)。肝癌组miR-183相对表达量高于健康对照、肝炎组和肝硬化组,差异有统计学意义(P=0.000,P=0.008,P

关键词： miR-183 肝细胞肝癌临床病理因素血清/血浆 miRNA 诊断

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循环血中肿瘤特征性游离DNA的研究

重庆医学 2004年第3期33卷 457-459页

作者：夏吉荣陈宏楚重庆医科大学附属第一医院检验科400016

正常人循环血中(血清或血桨)有微量的DNA存在,常小于10ng/ml,其来源主要为细胞核DNA和线粒体DNA.肿瘤组织中存在肿瘤特征性DNA物质已有较多研究,而肿瘤患者循环血中是否也存在相应的DNA特征性物质倍受研究者关注.直到1977年Leon等[1]才... 详细信息

正常人循环血中(血清或血桨)有微量的DNA存在,常小于10ng/ml,其来源主要为细胞核DNA和线粒体DNA.肿瘤组织中存在肿瘤特征性DNA物质已有较多研究,而肿瘤患者循环血中是否也存在相应的DNA特征性物质倍受研究者关注.直到1977年Leon等[1]才证实肿瘤患者血清DNA水平大大高于正常人,后来许多[2～17]研究表明肿瘤患者循环血中DNA水平不仅远远高于正常人,而且还具有肿瘤特征性的DNA改变,并和肿瘤组织中表达的同一基因一致,这些实验证据为循环DNA用于肿瘤的早期诊断、疗效评估、发生机制等研究提供了新的简便途径.

关键词：血清/血浆游离DNA 癌基因

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标准制修订

质量与标准化 2020年第8期 56-57页

YY/T 1645-2019人细小病毒B19 Ig G抗体检测试剂盒本标准规定了人细小病毒B19 Ig G抗体检测试剂盒的要求、试验方法、标签和说明书、包装、运输和贮存。本标准适用于以酶联免疫法、化学发光法等为原理,定性检测人体血清/血浆中人细小病... 详细信息

YY/T 1645-2019人细小病毒B19 Ig G抗体检测试剂盒本标准规定了人细小病毒B19 Ig G抗体检测试剂盒的要求、试验方法、标签和说明书、包装、运输和贮存。本标准适用于以酶联免疫法、化学发光法等为原理,定性检测人体血清/血浆中人细小病毒B19 Ig G抗体的试剂盒。标准修订状况:本标准为首次制定。

关键词：人细小病毒B19 酶联免疫法标准修订定性检测标准制修订化学发光法检测试剂盒血清/血浆