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血浆蛋白质氨甲酰化与慢性肾脏病的相关性研究进展

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中华临床营养杂志 2016年第3期24卷 186-190页

作者：李阳陈丽萌中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院肾内科 100730

血浆蛋白质氨甲酰化可导致蛋白质结构及功能变化。氨甲酰化主要由氰酸盐与蛋白质结合产生，慢性肾脏病患者尿素氮水平升高，其分解形成氰酸盐增加，为氨甲酰化的主要来源。血浆蛋白质氨甲酰化可对肾脏产生直接影响，并在慢性肾脏病患者... 详细信息

血浆蛋白质氨甲酰化可导致蛋白质结构及功能变化。氨甲酰化主要由氰酸盐与蛋白质结合产生，慢性肾脏病患者尿素氮水平升高，其分解形成氰酸盐增加，为氨甲酰化的主要来源。血浆蛋白质氨甲酰化可对肾脏产生直接影响，并在慢性肾脏病患者的并发症评估、预后及治疗方面具有潜在价值。本文主要综述血浆蛋白质氨甲酰化及其在慢性肾脏病患者中的价值及治疗前景。

关键词：慢性肾脏病血浆蛋白质氨甲酰化

血浆蛋白质在生物材料表面的吸附和竞争吸附研究

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血浆蛋白质在生物材料表面的吸附和竞争吸附研究

作者：周浩重庆大学

学位级别：硕士

蛋白质几乎可以自发地吸附在任何表面上,这种现象很早就已经被人们发现,并在生物医学、生物材料、生物工程等领域得到了广泛的应用。当生物材料与血液接触时,首先发生的是血浆蛋白质在材料表面的吸附和竞争吸附,此蛋白质吸附层是血液与... 详细信息

蛋白质几乎可以自发地吸附在任何表面上,这种现象很早就已经被人们发现,并在生物医学、生物材料、生物工程等领域得到了广泛的应用。当生物材料与血液接触时,首先发生的是血浆蛋白质在材料表面的吸附和竞争吸附,此蛋白质吸附层是血液与材料进一步反应的主要场所。材料吸附蛋白质的种类和数量决定着紧随其后的血小板粘附和其它所有与血栓形成有关的反应,而蛋白质的种类和数量又取决于生物材料的表面性质。因此研究血浆蛋白质在生物材料表面的吸附行为对研究材料的生物相容性具有十分重要的意义。这不仅有助于提高对材料抗凝血机理的认识,也有助于指导抗凝血生物材料的设计与合成。本文以实验室合成的新型生物材料——聚醚氨酯-高分子液晶(PEU-LCP)复合材料为基材,利用荧光定量分析方法,研究了血浆蛋白质在PEU-LCP复合材料表面的吸附和竞争吸附行为。具体研究工作如下:(1)利用异硫氰酸荧光素(FITC)成功地对牛血清白蛋白(BSA)和牛血浆纤维蛋白原(Fg)进行了荧光标记,得到FITC-BSA和FITC-Fg的荧光标准曲线。实验表明,标记的蛋白质在一定温度下非常稳定,标记处理不会影响其吸附行为。(2)研究了PEU-LCP复合材料表面一元蛋白的等温吸附平衡,结果表明,白蛋白吸附量和纤维蛋白原吸附量均随温度的升高而减小。得到白蛋白和纤维蛋白原在PEU-LCP复合材料表面的最大吸附密度分别为1.6328μg/cm2和0.2583μg/cm2,计算出白蛋白与材料间吸附反应的吸附热△H=-6.424 kJ/mol,纤维蛋白原与材料间吸附反应的吸附热△H=-4.384 kJ/mol,说明PEU-LCP复合材料表面的白蛋白吸附和纤维蛋白原吸附均是单分子层吸附,且均为物理吸附过程。(3)采用Langmuir吸附模型和Freundlich吸附模型拟合一元蛋白的等温吸附平衡过程,分别得到了不同温度下的BSA和Fg吸附平衡模型方程,证实了一元蛋白等温吸附可以用Langmuir吸附模型来较好的描述。(4)研究了PEU-LCP复合材料表面一元蛋白的吸附动力学,结果表明,随着吸附时间的延长,一元蛋白在PEU-LCP复合材料表面的吸附量会增大,最终达到饱和吸附。根据蛋白质在材料表面的吸附过程即吸附、脱附和转化三个阶段,提出了改进型的蛋白质吸附动力学模型,采用计算机迭代的计算方法,分别求出白蛋白和纤维蛋白原在复合材料表面的吸附速率常数、脱附速率常数和转化速率常数。(5)研究了白蛋白-纤维蛋白原二元蛋白体系在PEU-LCP复合材料表面的竞争吸附行为,结果表明,竞争吸附中BSA的吸附量明显低于单组分吸附量,而Fg的吸附量与单组分吸附量相当。虽然材料表面的白蛋白吸附量高于纤维蛋白原吸附量,但材料表面纤维蛋白原的竞争吸附能力却大于白蛋白竞争吸附能力。根据统计热力学理论和均一位势模型,推导出BSA-Fg二元蛋白体系在PEU-LCP复合材料表面的竞争吸附模型方程。

关键词：生物材料血浆蛋白质牛血清白蛋白牛血浆纤维蛋白原等温吸附竞争吸附吸附动力学

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脊椎动物血浆蛋白质的进化

生物化学与生物物理进展 1990年第2期17卷 96-100页

作者：郝军山山西大学分子科学研究所

分子生物学的迅猛发展,使我们有可能从分子水平来探讨生物进化这一经典命题。分子进化遂成为进化生物学中的一个新的研究领域。脊椎动物血浆中有数百种蛋白质,依据其一级结构的类似性可划分为仅仅几个家族。蛋白质的进化主要涉及到基因... 详细信息

分子生物学的迅猛发展,使我们有可能从分子水平来探讨生物进化这一经典命题。分子进化遂成为进化生物学中的一个新的研究领域。脊椎动物血浆中有数百种蛋白质,依据其一级结构的类似性可划分为仅仅几个家族。蛋白质的进化主要涉及到基因复制(包括加倍)和外显子改组。对不同种属同一种蛋白质的氨基酸排列顺序的比较,可以给出一些有关蛋白质进化的知识。这方面业已取得的成就极大地推进了进化生物学的发展。

关键词：脊椎动物血浆蛋白质进化

六种鼠苹果酸脱氢酶、血浆蛋白质和血红蛋白的变异分析

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兽类学报 1996年第3期16卷 217-221,239页

作者：金晓玲何新霞周虞灿吴林富干常春浙江师范大学生物系

本文分析了家鼠属（Ｒａｔｔｕｓ）４种鼠和姬鼠属（Ａｐｏｄｅｍｕｓ）２种鼠的苹果酸脱氢酶、血浆中β１区和β２区蛋白质、血浆清蛋白、前清蛋白以及红细胞中血红蛋白的变异。结果表明，ＭＤＨ在进化上是比较保守的，其中ＭＤＨｍ和... 详细信息

本文分析了家鼠属（Ｒａｔｔｕｓ）４种鼠和姬鼠属（Ａｐｏｄｅｍｕｓ）２种鼠的苹果酸脱氢酶、血浆中β１区和β２区蛋白质、血浆清蛋白、前清蛋白以及红细胞中血红蛋白的变异。结果表明，ＭＤＨ在进化上是比较保守的，其中ＭＤＨｍ和ＭＤＨｓ２带在各鼠间位于同一泳动线上，仅ＭＤＨｓ１带的泳动速度出现属间和种间的微小差异；血浆中β１区和β２区的蛋白质带、清蛋白带以及前清蛋白带各鼠间出现明显的变异，表现为黑线姬鼠和社鼠在β１区出现２种多态型区带，褐家鼠在β２区也有２种多态型带；各鼠间的血红蛋白变异比较明显，主要表现在区带数和主成分的泳动度显著不同，而且社鼠的Ｈｂ出现３种多态型，黄毛鼠出现２种多态型，其余各鼠的Ｈｂ皆为单态性。上述１６项生化特性按相似和相异进行配对比较，初步表明黄毛鼠与褐家鼠亲缘上比较相近，白腹巨鼠要比其他３种鼠亲缘上更接近于黑线姬鼠，而社鼠与白腹巨鼠之间进化分歧相对地较大。

关键词：鼠科动物血浆蛋白质苹果酸脱氢酶

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毛细管区带电泳用于血浆蛋白质混合物的分析

中国输血杂志 2012年第4期25卷 346-351页

作者：魏薇李长清林方昭杜晞张学俊肖小璞北京协和医学院中国医学科学院输血研究所四川成都610052

目的探索建立采用毛细管区带电泳(CZE)法分析血浆相关蛋白质的条件和方法。方法 1)以血浆COHN法组分Ⅳ(CFⅣ)抽提液为样品,代表蛋白质混合物,分别从波长、基本缓冲液、添加剂、PH、温度等方面,摸索CEZ分析蛋白质混合物的较优条件和方法... 详细信息

目的探索建立采用毛细管区带电泳(CZE)法分析血浆相关蛋白质的条件和方法。方法 1)以血浆COHN法组分Ⅳ(CFⅣ)抽提液为样品,代表蛋白质混合物,分别从波长、基本缓冲液、添加剂、PH、温度等方面,摸索CEZ分析蛋白质混合物的较优条件和方法;2)将摸索得到的较优条件下的CZE分析CFⅣ抽提液的结果,并与通过高效液相色谱(HPLC)法、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)法及双向电泳(2-DE)法分析CFⅣ抽提液的结果比较;3)采用较优条件下的CZE法分析标准血浆、标准血浆经离子交换层析(IEC)的FⅧ粗提液等,考察该条件是否适用于血浆中的其他组分。结果 1)CZE法分析CFⅣ抽提液的较优条件为:20℃以214 nm紫外吸收波长,0.5 psi压力进样10 s,10 kV恒压分析50 min,缓冲体系为pH 9.0的0.04 mol/L硼酸硼砂、0.05%SDS、0.007 5%腐胺;2)采用此条件的CZE法分析CFⅣ得到14个蛋白峰、分析时间50 min,HPLC法分析得到10个蛋白峰、分析时间60 min,SDS-PAGE法分析得到11条蛋白条带、分析时间120 min,2-DE法分析得到14个蛋白点数(与CZE分析的蛋白峰数数量相同)、分析时间3 d;3)CZE法用于标准血浆、标准血浆经离子交换层析的FⅧ粗提液的分析可分别分辩出22和11个蛋白峰。结论以CZE法分析血浆相关蛋白混合物与现有分析方法比较,能达到较好的分析效果,经摸索确定的较优分析条件具有一定的通用性。

关键词：毛细管区带电泳血浆蛋白质 Cohn法组分Ⅳ 高效液相色谱十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳双向电泳

IgA肾病肾阴虚证的血浆蛋白质双向凝胶电泳分析

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时珍国医国药 2011年第10期22卷 2538-2539页

作者：孙晓敏刘艳艳张乐罗仁赵晓山南方医科大学珠江医院广东广州510280 南方医科大学中医药学院广东广州510515

目的初步观察IgA肾病肾阴虚证患者血浆蛋白质组的变化与表达差异,为进一步探讨肾阴虚证的发生机制奠定基础。方法采用双向凝胶电泳(2-DE)技术分离IgA肾病肾阴虚证患者、肾阳虚证患者与正常人血浆总蛋白,银染显色;PDQest软件对凝胶图像... 详细信息

目的初步观察IgA肾病肾阴虚证患者血浆蛋白质组的变化与表达差异,为进一步探讨肾阴虚证的发生机制奠定基础。方法采用双向凝胶电泳(2-DE)技术分离IgA肾病肾阴虚证患者、肾阳虚证患者与正常人血浆总蛋白,银染显色;PDQest软件对凝胶图像进行定性定量差异表达分析;从中选取差异表达蛋白质斑点,通过基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分析,获取肽质量指纹图谱(PMF);通过Mscot-Wizard软件进行数据库搜索,鉴定蛋白质。结果与正常人和IgA肾病肾阳虚证相比,在IgA肾病肾阴虚证血浆蛋白质双向凝胶电泳图谱中绝对高表达的蛋白质斑点14个,绝对低表达的蛋白质斑点17个;定性差异表达分析发现IgA肾病肾阴虚证血浆蛋白质双向凝胶电泳图谱中特异出现的蛋白质斑点9个,缺失的蛋白质斑点17个。结论同病异证患者血浆中存在差异表达蛋白质,利用蛋白质组学技术有望对中医证候的发生机制进行阐释。

关键词： IgA肾病肾阴虚证血浆蛋白质双向凝胶电泳质谱分析

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骨髓间充质干细胞移植对血浆蛋白质谱的影响

骨髓间充质干细胞移植对血浆蛋白质谱的影响

作者：毕培轩中国协和医科大学

学位级别：硕士

造血干细胞移植(hematopoietic stem cell transplantation, HSCT)是治疗恶性血液病的重要方法,供体细胞在宿主体内的成活是移植成功的关键。骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells, BM-MSCs)因具有支持造血、促进移植的作用而... 详细信息

造血干细胞移植(hematopoietic stem cell transplantation, HSCT)是治疗恶性血液病的重要方法,供体细胞在宿主体内的成活是移植成功的关键。骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells, BM-MSCs)因具有支持造血、促进移植的作用而与HSC共移植,成为临床治疗的新选择和干细胞研究领域的热点。本课题旨在从蛋白质分子水平上分析骨髓间充质干细胞移植对血浆蛋白质谱的影响,寻找与之相关的蛋白,为治疗进程的监测、临床预后的评估以及个体化治疗方案提供新鲜资料。实验以BM-MSC/HSC共移植患者和HSC移植患者不同治疗阶段的血浆样品为研究对象,运用高效液相色谱、双向凝胶电泳、以及高效液相和双向凝胶电泳联用的方法进行样品的分离,筛选出差异蛋白,进行MALDI TOF/TOF MS分析鉴定,找出差异蛋白随时间点的变化规律。实验结果显示这些差异蛋白主要为触珠蛋白β链和α链并伴有多种翻译后修饰,其血浆中含量水平在移植前后呈现明显的递减趋势,这种变化趋势在BM-MSC/HSC共移植患者中更为显著。触珠蛋白有可能成为进行BM-MSC/HSCT疗效评价、疗程监测的重要标志物。本实验建立的一种较为简单而高效的一维离子交换色谱方法,为研究复杂生物样品提供了新的借鉴。

关键词：骨髓间充质干细胞移植血浆蛋白质触珠蛋白高效液相色谱双向凝胶电泳

功能化单壁碳纳米管与人血浆蛋白质相互作用的机制研究

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功能化单壁碳纳米管与人血浆蛋白质相互作用的机制研究

作者：丁云江西师范大学

学位级别：硕士

随着碳纳米管(CNTs)在生物医学和生物技术上的广泛使用,越来越多的人关注纳米材料的毒性,蛋白质和CNTs间的相互作用正受到越来越多的关注。血液中的蛋白质与CNTs通过非共价作用相互结合,形成蛋白质冕,进而会影响CNTs的生物学功能和血液... 详细信息

随着碳纳米管(CNTs)在生物医学和生物技术上的广泛使用,越来越多的人关注纳米材料的毒性,蛋白质和CNTs间的相互作用正受到越来越多的关注。血液中的蛋白质与CNTs通过非共价作用相互结合,形成蛋白质冕,进而会影响CNTs的生物学功能和血液相容性。本文首先研究了不同功能化的单壁碳纳米管(SWCNTs,包括羧基化carboxylated SWCNTs、羟基化hydroxylated SWCNTs、氨基化aminated SWCNTs)与人血清白蛋白(HSA)的相互作用。研究发现,达到吸附平衡时,对HSA的吸附能力依次为:carboxylated SWCNTs>hydroxylated SWCNTs>aminated SWCNTs,这与Stern Volmer猝灭常数K和结合常数K呈正相关。同时,HSA与不同功能化修饰的CNTs结合后构象发生变化。以HepG 2细胞为模型的细胞实验中,发现与HSA吸附能力较强的carboxylated SWCNTs更容易受到HSA的保护作用,其毒性作用能被HSA显著抑制,而与HSA结合能力较弱的hydroxylated和aminated SWCNTs的毒性不能被显著抑制,说明HSA对CNTs细胞毒性影响与其在CNTs上的结合能力密切相关。这些研究表明,通过对CNTs不同的功能化修饰可以影响与蛋白质的结合能力,从而降低CNTs的细胞毒性。接着,我们研究了人血液中三种主要蛋白质,免疫球蛋白G(IgG)、血清白蛋白(HSA)和纤维蛋白原(FG)与carboxylated SWCNTs的结合,并研究了不同蛋白冕对内皮细胞毒性及血液中性粒细胞免疫反应的影响。吸附参数的测定表明蛋白质与SWCNTs紧密结合,SWCNTs对血浆蛋白质的吸附能力:FG>HSA>IgG。此外,碱性氨基酸(Arg,Lys,His)在蛋白质冕复合物的形成和吸附能力中起着非常重要的作用。与蛋白吸附能力相一致,FG比其他两种蛋白质更显著地降低CNTs对人脐静脉内皮细胞的毒性作用。在中性粒细胞中,仅用Ig G处理SWCNTs,会使得碳纳米管诱导的髓过氧化物酶(MPO)释放(即中性粒细胞活化)增强,经MPO降解的碳纳米管引起的细胞毒性要小于未处理的纳米材料。与蛋白质冕这些作用相一致,血清的存在可以减弱碳纳米管细胞毒性以及其引起的血浆中性粒细胞活化。这些研究表明,通过结合不同的血浆蛋白质可以调控CNTs细胞毒性和血液中性粒细胞反应。总之,本文研究了功能化单壁碳纳米管与人血浆蛋白质相互作用的机制,实验结果为预测蛋白质与纳米材料的相互作用提供了可能性,也为纳米材料安全设计方面提供了新的认识。

关键词：单壁碳纳米管血浆蛋白质荧光淬灭纳米材料-蛋白质冕复合物细胞毒性中性粒细胞活化

基于乳腺癌的肿瘤异常黑胆质证共性血浆蛋白质标志物研究

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基于乳腺癌的肿瘤异常黑胆质证共性血浆蛋白质标志物研究

作者：迪拉热·力迪甫新疆医科大学

学位级别：硕士

目的:维吾尔族医学体液病证学(体液论)认为,异常黑胆质证是肿瘤、2型糖尿病、心血管疾病等复杂性疾病的主要维医证型和病理状态。前期工作中,本团队开展不同类型肿瘤患者的异常黑胆质证及其对证方药—异常黑胆质成熟剂治疗研究,通过血... 详细信息

目的:维吾尔族医学体液病证学(体液论)认为,异常黑胆质证是肿瘤、2型糖尿病、心血管疾病等复杂性疾病的主要维医证型和病理状态。前期工作中,本团队开展不同类型肿瘤患者的异常黑胆质证及其对证方药—异常黑胆质成熟剂治疗研究,通过血浆蛋白质组学研究,发现7种肿瘤异常黑胆质证及其方药作用共性的候选差异表达蛋白质,其特异性和准确度尚待进一步验证。故本课题以乳腺癌患者为研究对象,通过维医辩证分型及血浆和肿瘤组织水平的定量验证,探讨乳腺癌异常黑胆质证与上述候选蛋白质指标表达调控的关系,为揭示“异病同证”、“同证同理”等维医基础理论和临床实践的科学性提供依据。方法:(1)选择60例乳腺癌患者,通过维医辩证分型,分为乳腺癌异常黑胆质证38例,非异常黑胆质证(其它证型)22例,以20例健康女性为正常对照,收集了患者和健康人外周血标本;同时在不考虑维医证型的前提下,收集了乳腺癌组织标本56例和正常对照组织24例;(2)在前期工作基础上,选择vWF(血管性血友病因子)、THBS1(血小板反应蛋白质1)、IGFBP2(胰岛素样生长因子结合蛋白)、ORM1(血清类黏蛋白)、FGA(纤维蛋白原A)和SAA1(血清淀粉样蛋白A-1)等6种肿瘤异常黑胆质证共性的候选差异表达蛋白质指标,对外周血标本进行酶联免疫吸附法(ELISA)分析,明确乳腺癌异常黑胆质证与候选蛋白质含量变化的关系;(3)选择候选蛋白质编码基因,设计mRNA序列特异性引物,采用定量RT-PCR分析方法对乳腺癌和正常对照组织进行mRNA表达水平分析,明确乳腺癌与肿瘤组织内候选蛋白质表达调控的关系;(4)通过ELISA和RT-PCR分析数据的Pearson相关性和ROC曲线分析,明确候选蛋白质表达指标变化的相互关系及特异性、灵敏度和准确度。结果:(1)ELISA分析结果显示,乳腺癌异常黑胆质证与非异常黑胆质证及正常对照相比较,体内SAA1、THBS1、vWF、IGFBP2、ORM1和FGA等6种候选蛋白质的血浆含量显著上升(P血浆含量变化均存在一定的相关性;ROC(Receiver Operating Characteristic,受信者操作特性)曲线分析,发现SAA1、vWF、IGFBP2和FGA等4种蛋白质指标检测的准确度较高,其中SAA1和IGFBP2检测的灵敏度和特异性较高;(2)定量RT-PCR分析结果显示,乳腺癌与正常对照相比较,肿瘤组织内SAA1、THBS1、IGFBP2、vWF和ORM1的转录表达水平显著下降(P血浆蛋白质含量上调存在密切关系,证明蛋白质组学研究数据有一定的准确度和可靠性;(2)随着乳腺癌发生,肿瘤组织内SAA1、THBS1、vWF、IGFBP2和ORM1等5种候选蛋白质的转录表达水平可能下调,与肿瘤异常黑胆质证患者体内血浆含量上升相反,其内在调控机制尚需探讨。

关键词：乳腺癌患者异常黑胆质证血浆蛋白质肿瘤组织