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血小板凝胶的制备方法及其影响因素

中国组织工程研究 2013年第8期17卷 1449-1454页

作者：温天杨王爱红许樟荣北京大学解放军306医院教学医院内分泌科、全军糖尿病诊治中心北京市100101

背景:血小板凝胶制备方法繁多,分类标准不统一。目的:总结血小板凝胶制备方法,并讨论影响因素。方法:由第一作者检索1990至2011年PubMed数据库及万方数据库。英文检索词为"Plateletgel,Classification,Parameters",中文检索词为"血小板... 详细信息

背景:血小板凝胶制备方法繁多,分类标准不统一。目的:总结血小板凝胶制备方法,并讨论影响因素。方法:由第一作者检索1990至2011年PubMed数据库及万方数据库。英文检索词为"Plateletgel,Classification,Parameters",中文检索词为"血小板凝胶,分类,影响因素"。结果与结论:依据凝胶产量与成分、凝胶中纤维蛋白结构两个主要影响因素可将血小板凝胶制备方法分为4大类,即纯富血小板血浆凝胶、富白细胞-血小板血浆凝胶、纯富血小板纤维蛋白凝胶和富白细胞-血小板纤维蛋白凝胶;根据制备流程不同,血小板凝胶的每一种制备方法还可以再分为手工制备方法和全自动制备方法,但各种分类方法均存在不足之处。

关键词：生物材料生物材料综述血小板凝胶制备分类影响因素综述

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血小板凝胶制备方法的体外实验研究

中国输血杂志 2011年第4期24卷 270-274页

作者：单桂秋李艳辉张雅妮刘广亚吕品周谋丘勇新广州军区广州总医院输血科广东广州510010 广州中医药大学

目的优化血小板凝胶（platelet gel,PG）的制备方法。方法采用CCK-8试剂盒检测不同浓度外源性凝血酶、不同浓度血小板、血小板与激活剂不同比例制备的PG对ECV304细胞增殖的影响;通过细胞迁移试验检测不同浓度外源性凝血酶对ECV304细胞... 详细信息

目的优化血小板凝胶（platelet gel,PG）的制备方法。方法采用CCK-8试剂盒检测不同浓度外源性凝血酶、不同浓度血小板、血小板与激活剂不同比例制备的PG对ECV304细胞增殖的影响;通过细胞迁移试验检测不同浓度外源性凝血酶对ECV304细胞迁移的影响;采用ELISA试剂盒检测不同浓度外源性凝血酶和不同浓度血小板对VEGF释放量的影响。结果 PG促进ECV304细胞增殖和迁移;加入外源性凝血酶PG形成时间为40~60s,而不加外源性凝血酶PG形成时间600~1 200 s,但是不同浓度（0、100、1 000 U/ml）的凝血酶对ECV304细胞增殖和迁移影响甚微;PG促ECV304细胞增殖作用随血小板浓度的增加而增强,血小板浓度处于（1 500~2 500）×109/L时趋于稳定;富血小板血浆（PRP）与激活剂的比例为10∶1时促细胞增殖效果略优于5∶1;PG上清中VEGF含量随着PRP中血小板含量的增加而增加,不同浓度（0、100、1 000U/ml）凝血酶制备的PG上清中VEGF含量的差异,无统计学意义（P〉0.05）。结论常规采集PRP的血小板浓度（1 000×109/L左右）已能保证细胞增殖效果、满足用于临床的PG需求;PG是否添加激活剂凝血酶应根据临床实际情况选择。

关键词：血小板凝胶 ECV304细胞增殖迁移血管内皮生长因子

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血小板凝胶促进创伤愈合的实验与临床研究

血小板凝胶促进创伤愈合的实验与临床研究

作者：李艳辉广州中医药大学

学位级别：硕士

目的1通过动物实验观察人来源混合血小板凝胶对新西兰兔急性创伤愈合的有效性与安全性。2通过临床试验观察异体血小板凝胶治疗和常规治疗两种方法对临床糖尿病难愈合创面的疗效比较。方法1动物实验研究1.1血小板凝胶(platelet gel, PG)... 详细信息

目的1通过动物实验观察人来源混合血小板凝胶对新西兰兔急性创伤愈合的有效性与安全性。2通过临床试验观察异体血小板凝胶治疗和常规治疗两种方法对临床糖尿病难愈合创面的疗效比较。方法1动物实验研究1.1血小板凝胶(platelet gel, PG)制备采用献血者捐献的全血,按国家标准检验合格后进行血小板分离,将8个同型富血小板血浆(platelet-rich plasma, PRP)混合调整血小板浓度为1000×109/L,将其与血小板激活剂按照10：1的比例混合后制备无菌PG纱布,三组激活剂为含有1000U/ml、100U/ml和0U/ml凝血酶的10%葡萄糖酸钙溶液。1.2实验动物分组新西兰兔24只雌雄各半随机分为四组,每组6只,每只于动物背脊两侧切取全层皮肤做3cm×3cm的创面。创面采用不同的敷料外敷：对照组敷料为无菌纱布,三组实验组敷料为含有不同浓度凝血酶的激活剂制备的PG纱布。在术后第5、10、15、20天更换敷料并测量各创面面积,计算创面愈合率,并切取病理组织标本进行HE染色观察。2临床研究2.1血小板凝胶制备采用献血者捐献的全血,按国家标准检验合格后进行血小板分离,调整血小板浓度为1000×109/L。将同型PRP与血小板激活剂按照体积比10：1混合后制备PG无菌纱布。使用两种激活剂,其中一种仅为10%的葡萄糖酸钙溶液,不含凝血酶,适合于表面溃疡创面;另一种含有100U/ml的凝血酶与10%的葡萄糖酸钙溶液的混合液,适合于窦道型创面。2.2临床处理临床上患糖尿病且有难愈合创面者32例,分为皮肤溃疡型和窦道型两类,各类分别设立对照组与实验组,皮肤溃疡型各10例,窦道型各6例,对照组采用临床常规方法(贝复剂,泡沫敷料),实验组采用PG治疗,观察并记录创面愈合情况,测量愈合面积或体积,进行统计学分析。结果1动物实验研究实验组与对照组在创面愈合率的差异上无统计学意义(P>0.05),组织学观察显示,实验组成纤维细胞排列整齐紧密有序,细胞增生较快,新生血管出现早且丰富,新生皮肤质量明显优于对照组。2临床研究32例糖尿病溃疡患者综合疗效评价统计结果显示,糖尿病皮肤表面溃疡型和窦道型溃疡种类型的PG治疗效果明显优于对照组,实验组12周痊愈率达到87.5%,而对照组仅为12.5%。皮肤溃疡型和窦道型创面治疗第3、6、12周时的愈合率实验组明显高于对照组,其差异有统计学意义。实验组具有疗程短、换药间隔时间长、愈合质量好等优势。结论1人源血小板凝胶对新西兰兔急性创面有促进愈合作用,为进一步临床研究提供依据。2同源异体血小板凝胶用于治疗糖尿病难治性溃疡效果明显优于常规治疗方法,无不良反应,是一种简单易行、安全有效的治疗糖尿病难治性创面愈合的方法

关键词：富血小板血浆血小板凝胶糖尿病难治性溃疡

骨髓间充质干细胞、血小板凝胶和体外冲击波联合应用治疗骨不连

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山东大学学报（医学版） 2016年第6期54卷 1-6页

作者：宋轲刘寰武文亮刘海春李尚志陈允震山东大学齐鲁医院骨外科山东济南250012

目的观察血小板凝胶(PG)和体外冲击波(ESW)对骨髓间充质干细胞(BMSCs)治疗骨不连的影响,确定骨不连治疗的最佳方案。方法制备Wistar大鼠萎缩性骨不连模型125只,随机分为骨不连组、BMSCs组、BMSCs+PG组、BMSCs+ESW组和BMSCs+PG+ESW组,每... 详细信息

目的观察血小板凝胶(PG)和体外冲击波(ESW)对骨髓间充质干细胞(BMSCs)治疗骨不连的影响,确定骨不连治疗的最佳方案。方法制备Wistar大鼠萎缩性骨不连模型125只,随机分为骨不连组、BMSCs组、BMSCs+PG组、BMSCs+ESW组和BMSCs+PG+ESW组,每组25只,并给予相应的治疗。治疗后第4、8周行显微CT和X线检测,第8周处死大鼠对骨折端行组织学染色分析。结果 X线结果显示,BMSCs+PG+ESW组骨折愈合率明显高于其他各组(P血小板凝胶和体外冲击波均可增强BMSCs治疗骨不连的疗效;三因素联合应用效果优于双因素和单因素。

关键词：骨不连骨髓间充质干细胞血小板凝胶体外冲击波显微CT

自体血小板凝胶在糖尿病足溃疡治疗中的应用研究

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中国糖尿病杂志 2014年第12期22卷 1102-1105页

作者：齐昆青程团结朴金龙尚祥岭河南大学第一附属医院内分泌科开封475001

目的观察自体富血小板凝胶治疗糖尿病足溃疡（DFU）的疗效. 方法 72例DFU患者按照数字随机法分为两组.治疗组采用自体富血小板凝胶外敷;对照组采用常规疗法.比较两组DFU治愈率、好转率及愈合时间. 结果两组间年龄、糖尿病病程、FPG、F... 详细信息

目的观察自体富血小板凝胶治疗糖尿病足溃疡（DFU）的疗效. 方法 72例DFU患者按照数字随机法分为两组.治疗组采用自体富血小板凝胶外敷;对照组采用常规疗法.比较两组DFU治愈率、好转率及愈合时间. 结果两组间年龄、糖尿病病程、FPG、FIns、HbA1c、稳态模型评估胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）、BMI、TG、TC、LDL-C、HDL-C、溃疡面积及溃疡体积比较差异均无统计学意义（P＞0.05）.两组Wagner Ⅰ级DFU治疗的疗效比较差异均无统计学意义（P＞0.05）.在WagnerⅡ、Ⅲ级DFU病例中,治疗组治愈率（66.7％、70.0％）、总有效率（94.4％、90.0％）均高于对照组（治愈率：26.3％、57.9％;总有效率：10.0％、30.0％）（P＜0.05）;治疗组Wagner Ⅰ～Ⅲ级DFU愈合时间均短于对照组[WagnerⅠ级：（14.75±1.82） vs （22.00±1.63）d;WagnerⅡ级：（27.12±2.15） vs （34.93±1.44）d;WagnerⅢ级：（41.89±3.22） vs （53.83±1.17）d] （P＜0.05）. 结论自体富血小板凝胶可能具有促进DFU愈合的作用.

关键词：血小板凝胶糖尿病足溃疡糖尿病足溃疡治疗

同源异体血小板凝胶治疗糖尿病性难愈合创面的研究

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中国输血杂志 2011年第4期24卷 279-282页

作者：单桂秋李艳辉张雅妮邓爱民李红梅吕品周谋刘广亚广州军区广州总医院输血科广东广州510010 广州中医药大学广州军区广州总医院内分泌科

目的评价同源异体血小板凝胶促进糖尿病性难治创面愈合的疗效。方法采用同源异体单采血小板为原料制备血小板凝胶(platelet gel,PG)。32例患者分为皮肤溃疡型和窦道型2类,各类分别设立对照组与实验组,皮肤溃疡型各10例,窦道型各6例,对... 详细信息

目的评价同源异体血小板凝胶促进糖尿病性难治创面愈合的疗效。方法采用同源异体单采血小板为原料制备血小板凝胶(platelet gel,PG)。32例患者分为皮肤溃疡型和窦道型2类,各类分别设立对照组与实验组,皮肤溃疡型各10例,窦道型各6例,对照组采用临床常规方法,实验组采用PG治疗,观察并记录创面愈合情况,测量愈合面积或体积,进行统计学分析。结果 32例糖尿病性溃疡患者综合疗效评价统计结果显示,糖尿病性皮肤表面溃疡型和窦道型溃疡种类型的PG治疗效果明显优于对照组,实验组12周痊愈率达到87.5%,而对照组仅为12.5%。皮肤溃疡型和窦道型创面治疗第3、6、12周时的愈合率实验组高于对照组。实验组具有疗程短、换药间隔时间长、愈合质量好等优势。结论同源异体血小板凝胶用于治疗糖尿病性难治性溃疡效果明显优于常规治疗方法,无不良反应,是一种简单易行、安全有效的治疗糖尿病性难治性创面愈合的方法。

关键词：同源异体血小板凝胶糖尿病创面愈合

2种方法制备的血小板凝胶释放PGFs含量及生物活性的初步研究

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中国输血杂志 2012年第2期25卷 133-137页

作者：于晶晶王红刘曦贺曾刘嘉馨中国医学科学院北京协和医学院输血研究所四川成都610052

目的了解血小板凝胶(PG)释放血小板生长因子(PGFs)的动力学过程及其对细胞增殖作用的影响,比较凝血酶-Ca和CaCl22种PG制备方法。方法将8份浓缩血小板每份分为2份组成2组,分别加入凝血酶-Ca和CaCl2处理,并在处理前(0点)以及处理后的1、2... 详细信息

目的了解血小板凝胶(PG)释放血小板生长因子(PGFs)的动力学过程及其对细胞增殖作用的影响,比较凝血酶-Ca和CaCl22种PG制备方法。方法将8份浓缩血小板每份分为2份组成2组,分别加入凝血酶-Ca和CaCl2处理,并在处理前(0点)以及处理后的1、2、4和6 h分别取样,用ELISA方法检测其中PGFs的含量;将L929细胞在含有1%、5%、10%、20%和30%、40%的PG上清的培养基中培养,无血清培养基为阴性对照,10%FBS为阳性对照,分别在培养的24、48和72 h应用CCK-8试剂盒测定细胞数量,考察2种方法处理6 h的样品对细胞增殖的影响。结果 CaCl2和凝血酶-Ca法制备的PG在6 h释放的PDGF-AB含量分别为(101.37±26.09)vs(127.64±33.81)ng/ml,TGF-β1含量分别为(101.08±20.36)vs(107.09±13.72)ng/ml;PG上清对细胞增殖具有明显的促进作用,细胞培养72 h相对于阴性对照的细胞增殖倍数,CaCl2组由1%～40%浓度分别为(1.53±0.24)、(1.88±0.21)、(1.92±0.50)、(1.73±0.61)、(1.71±0.50)、(1.39±0.67)倍,凝血酶-Ca组分别为(1.68±0.29)、(1.90±0.19)、(1.88±0.70)、(1.53±0.65)、(1.51±0.59)、(1.09±0.55)倍,2组不同浓度的上清细胞增殖促细胞增殖作用均高于阴性对照组(P<0.05),同一时间点,2组PG上清浓度从1%增至10%,促作用随之增加,当浓度达到20%时,促细胞增殖作用开始下降。结论凝血酶-Ca法和CaCl2法制备的PG均在1 h内基本完全释放PDGF-AB、TGF-β1 2种主要PGFs;2种方法制备的PG上清均在一定的浓度范围内对细胞增殖具有促进作用。

关键词：血小板凝胶 L929细胞增殖血小板源性生长因子转化生长因子-β1

混合血小板凝胶促进新西兰兔创面愈合的实验研究

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中国输血杂志 2011年第4期24卷 275-278页

作者：李艳辉单桂秋张雅妮刘广亚吕品周谋丘勇新广州军区广州总医院输血科广东广州510010 广州中医药大学

目的研究人源性混合血小板凝胶对新西兰兔创面愈合的影响。方法采用手工分离的人源性混合血小板为原材料,加入不同激活剂(含有1 000 U/ml、100 U/ml、0 U/ml凝血酶的10%葡萄糖酸钙溶液)制备PG,血小板与激活剂按体积10∶1混合。新西兰兔2... 详细信息

目的研究人源性混合血小板凝胶对新西兰兔创面愈合的影响。方法采用手工分离的人源性混合血小板为原材料,加入不同激活剂(含有1 000 U/ml、100 U/ml、0 U/ml凝血酶的10%葡萄糖酸钙溶液)制备PG,血小板与激活剂按体积10∶1混合。新西兰兔24只雌雄各半随机分为4组,6只/组,每只制备2个创面,创面采用不同的敷料外敷:对照组敷料为无菌纱布,另3组(实验组)敷料为不同浓度凝血酶的激活剂制备的PG纱布。在术后d5、10、15、20更换敷料并切取病理组织标本,HE染色观察。结果实验组与对照组在创面愈合率的差异上无统计学意义(P>0.05),但肉眼观察创面愈合质量有较明显差异。组织学观察显示,实验组成纤维细胞排列整齐,紧密有序,细胞增生较快,新生血管出现早且丰富,新生皮肤质量明显优于对照组。结论人源性混合血小板凝胶能促进新西兰兔创面愈合,有临床研究和应用价值。

关键词：混合血小板血小板凝胶创面愈合动物实验

自体富血小板凝胶在难治性糖尿病皮肤溃疡中的应用及可能的作用机制探讨

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自体富血小板凝胶在难治性糖尿病皮肤溃疡中的应用及可能的作用机...

作者：袁南兵四川大学

学位级别：硕士

第一部分自体富血小板凝胶在糖尿病难治性皮肤溃疡中的应用—预试验研究目的：评价自体富血小板凝胶(Autologous Platelet-Rich Gel，APG)治疗糖尿病难治性皮肤溃疡的可行性、有效性和安全性，探索治疗糖尿病难治性皮肤溃疡的新方法。... 详细信息

第一部分自体富血小板凝胶在糖尿病难治性皮肤溃疡中的应用—预试验研究目的：评价自体富血小板凝胶(Autologous Platelet-Rich Gel，APG)治疗糖尿病难治性皮肤溃疡的可行性、有效性和安全性，探索治疗糖尿病难治性皮肤溃疡的新方法。对象与方法：自2005年7月至2007年4月，我科共收治糖尿病皮肤溃疡患者117例。将入院后经严格控制血糖、血压、抗凝、抗感染及溃疡局部标准(清创、引流、减压、交换敷料等)治疗，2周后溃疡无好转迹象或恶化的患者定义为难治性皮肤溃疡。13例难治性皮肤溃疡入选APG治疗，其中12例有窦道，1例有骨髓炎;背部深部溃疡2例，褥疮3例(Ⅳ级)，小腿溃疡1例，足部溃疡7例(Wagner分级Ⅲ-Ⅳ级)。取患者自身外周静脉血，经离心、分离、浓缩制得的富含血小板血浆(platelet-rich plasma，PRP)按一定比例与凝血酶—钙剂混合凝固形成APG，然后用双通注射器将APG均匀喷洒至溃疡表面或注射至深部窦道内。治疗前和治疗后每周测量溃疡面积直至溃疡愈合或第12周末，有窦道的患者测量窦道体积，同时记录患者的体温和不良反应。结果：治疗12周后溃疡愈合率为69.2%(9/13)，显效率7.7%(1/13)，有效率7.7%(1/13)，无效率15.4%(2/13)，无效者1例足底窦道有骨髓炎，1例为左髋部褥疮;治疗前3周溃疡面积愈合速度最快(P＜0.05);APG对窦道治愈率为83.3%，能在短时间内使窦道愈合;治疗过程中无不良反应发生。结论：APG用于治疗糖尿病难治性皮肤溃疡是安全有效的，特别适用于溃疡面积较大和有窦道的患者，局部血供较好的神经性糖尿病足溃疡患者，但不适用于缺血性溃疡及存在骨髓炎且感染未得到控制的患者。第二部分自体富血小板凝胶的制备及其所含生长因子分析目的：探讨手工操作二次差速离心制备APG的方法，通过改变离心速度比较不同的离心力对血小板富集的影响，以期找到较好的离心方法，提高血小板的富集率;分析全血和APG中转化生长因子(TGF-β1)、血管内皮生长因子(VEGF)、血小板源性生长因子(PDGF-BB)、表皮生长因子(EGF)和胰岛素样生长因子(IGF-1)浓度。方法：(1)富血小板血浆(platelet-rich plasma)的制备：抽取静脉血，注入无菌离心管，离心后汲取上层血浆至红细胞层;将汲取的血浆再次离心，弃去上层血浆，下层即为PRP。共选择3种离心速度：A：先以2600rpm离心4分钟，再以3800rpm离心6分钟;B：先以2000rpm离心4分钟，再以4000rpm离心6分钟;C：先以1500rpm离心5分钟，再以4000rpm离心5分钟，离心前后进行血细胞计数。(2)APG的制备：将PRP与凝血酶-钙剂以10：1混合凝固后为APG。(3)酶联免疫吸附法测定全血和APG中PDGF-BB、VEGF、IGF-1、EGF和TGF-β1等5种生长因子浓度。统计采用配对t检验和Pearson相关分析。结果：①3种离心速度的结果比较：B法PRP中血小板数量最高为1363.80x10～9/L，比治疗前提高5.91倍，血小板回收率为75.2%，是3种方法中最好的离心方法;②离心后血小板数量平均为957.63×10～9/L，提高4.35倍;红细胞和血红蛋白明显减少，白细胞数量增多;③全血和APG中生长因子浓度比较，APG中含有的PDGF-BB、EGF、IGF-1、TGF-β1浓度高于全血(P＜0.05)，VEGF浓度升高，但两者间没有显著差异;④血小板数量与PDGF-BB和TGF-β1浓度呈正相关。结论：二次差速离心法中B法(以313×g力离心4分钟，再以1252×g力离心6分钟)为最佳离心方法;APG中生长因子浓度高于全血中生长因子浓度;血小板数量与PDGF-BB、TGF-β1浓度呈正相关。第三部分自体富血小板凝胶治疗糖尿病难治性皮肤溃疡可能的作用机制目的：通过对APG治疗前后不同治疗时间段溃疡肉芽组织生长因子水平的测定，观察组织中生长因子浓度变化与溃疡愈合之间的关系，探讨APG治疗糖尿病难治性皮肤溃疡可能的作用机制。材料与方法：分别于治疗前和治疗后3、6、9、15天取溃疡局部肉芽组织，-80℃冰箱保存;使用酶联免疫吸附法测定组织中转化生长因子(TGF-β1)、血管内皮生长因子(VEGF)、血小板源性生长因子(PDGF-BB)、表皮生长因子(EGF)和胰岛素样生长因子(IGF-1)浓度;观察相应时间溃疡缩小面积。统计采用配对t检验和Wilcoxon秩和检验。结果：组织中生长因子浓度均在治疗后第

关键词：自体血小板凝胶糖尿病皮肤溃疡窦道褥疮糖尿病足富血小板血浆血小板浓度离心血小板凝胶生长因子自体富血小板凝胶生长因子酶联免疫吸附糖尿病难治性皮肤溃疡作用机制