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应用噬菌体15肽库筛选抗原GalNAc（α1-3）（Fucα1-2）Galβ模拟多肽的研究

应用噬菌体15肽库筛选抗原GalNAc（α1-3）（Fucα1-2）Galβ模拟...

引用

作者：常盼盼华中科技大学

学位级别：硕士

目的: 从噬菌体随机15肽库筛选血型A抗原模拟表位,并对其进行鉴定。方法: 1.采用噬菌体展示技术,以抗A抗体作为靶分子,对噬菌体随机15肽库连续进行四轮筛选。 2.从第4轮洗脱物滴定平板随机挑选单克隆噬菌体扩增,通过ELISA... 详细信息

目的: 从噬菌体随机15肽库筛选血型A抗原模拟表位,并对其进行鉴定。方法: 1.采用噬菌体展示技术,以抗A抗体作为靶分子,对噬菌体随机15肽库连续进行四轮筛选。 2.从第4轮洗脱物滴定平板随机挑选单克隆噬菌体扩增,通过ELISA的方法,对单克隆噬菌体与抗A抗体的结合进行初步鉴定。 3.根据ELISA初步鉴定结果,选取阳性克隆扩增提取DNA测序。 4.参照测序结果,选取相应的噬菌体克隆,通过梯度ELISA,和红细胞抑制试验进一步鉴定噬菌体克隆与抗A的结合。 5.最后通过Autodock软件分析多肽序列与抗A抗体的对接效果。结果: 1.通过四轮筛选,产出/投入比逐渐上升,总富集率达到1600倍。ELISA方法初步鉴定,37个随机噬菌体单克隆中,11个阳性克隆,阳性率达到27.5%。 2.阳性克隆提取DNA测序,11个单克隆中有9个为同一序列TRWLVYFSRPYLVAT。 3.梯度ELISA鉴定,clone8随着稀释倍数的增加,clone8浓度的降低,吸光度逐渐降低,对照组则不呈相关性。同时红细胞凝集抑制实验,发现clone8对红细胞凝集的抑制效果呈浓度依赖性。 4.生物软件分析,得到的多肽序列刚好嵌入抗A抗体上高变区的凹槽,与天然A抗原对接与A抗体上的同一位置。结论: 通过四轮筛选富集的多肽序列,经过鉴定具有模拟A糖抗原的功能。

关键词：噬菌体展示技术血型a糖抗原抗A抗体器官移植

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