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UPLC-Q/TOF-MS法快速分析天麻醒脑胶囊的化学成分及血中移行成分

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世界科学技术-中医药现代化 2023年第11期25卷 3478-3496页

作者：孙元芳甘雨陈关祥李莎莎肖雪者从章严诗楷金慧子上海交通大学药学院上海200240 广州中医药大学第二附属医院广州510006 云南永孜堂制药有限公司昭通657000 广东药科大学中医药研究院广州510006

目的采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱联用技术对天麻醒脑胶囊化学物质组和入血成分进行辨识研究,初步阐明其可能的药效物质基础。方法本研究建立了一种超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱联用方法鉴别天麻醒脑胶囊的化学成分... 详细信息

目的采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱联用技术对天麻醒脑胶囊化学物质组和入血成分进行辨识研究,初步阐明其可能的药效物质基础。方法本研究建立了一种超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱联用方法鉴别天麻醒脑胶囊的化学成分。采集并分析大鼠给药后的血浆样品,探究天麻醒脑胶囊在大鼠体内暴露成分。结果通过UPLC-Q/TOF-MS分析,共鉴别出天麻醒脑胶囊组方中195种化学成分,分为苯酚类、三萜皂苷类、苯乙醇苷类、环烯醚萜类、脂质类和苯丙素类等,包含了天麻、地龙、肉苁蓉、熟地黄、远志、石菖蒲的特征性成分。在给药大鼠血浆样品中鉴定出37个天麻醒脑胶囊原型成分和3个代谢产物。结论该方法简便高效、灵敏准确,初步阐明了天麻醒脑胶囊的药效物质基础,对天麻醒脑胶囊及其入血成分进行了较全面地研究。本研究为天麻醒脑胶囊的药效物质基础的阐明提供了依据,对揭示天麻醒脑胶囊的药理作用机制具有一定参考意义。

关键词：天麻醒脑胶囊化学成分血中移行成分 UPLC-Q/TOF-MS

基于血中移行成分和代谢组学探讨加参方对慢性心力衰竭模型大鼠的作用及机制

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基于血中移行成分和代谢组学探讨加参方对慢性心力衰竭模型大鼠的...

作者：王彩君天津中医药大学

学位级别：硕士

目的:本研究采用结扎大鼠左冠状动脉前降支造成心肌梗死后形成慢性心力衰竭(CHF)模型,进行加参方治疗CHF的药效学研究,在此基础上,基于超高效液相色谱-飞行时间质谱联用技术(UPLC-Q-TOF-MS)技术对加参方治疗CHF的血中移行成分进行分析,... 详细信息

目的:本研究采用结扎大鼠左冠状动脉前降支造成心肌梗死后形成慢性心力衰竭(CHF)模型,进行加参方治疗CHF的药效学研究,在此基础上,基于超高效液相色谱-飞行时间质谱联用技术(UPLC-Q-TOF-MS)技术对加参方治疗CHF的血中移行成分进行分析,进一步揭示加参方治疗CHF的药效物质基础;利用代谢组学技术对CHF大鼠血清及尿液中的代谢物进行分析,寻找CHF发生的代谢标志物,并构建加参方治疗CHF的代谢通路,以期从代谢物组阐释加参方对CHF的影响;最后对加参方治疗CHF的血中移行成分和代谢标志物进行相关性分析,进一步分析加参方治疗CHF的作用机制,为加参方临床用药提供依据。方法:1.加参方治疗CHF的药效学研究采用结扎SD雄性大鼠左冠状动脉前降支5周后造成CHF模型,根据EF值和体重分为4组,包括空白对照组(Con)、假手术组(Sham)、模型组(CHF)和加参方组(6g/kg生药量,JSF),每组9-10只,连续给药4周,ELISA法检测心肌组织N-末端脑利钠肽原(NT-pro BNP)水平、超声检测心脏结构和功能、HE染色检测心肌病理变化、Masson染色检测心肌纤维化、Western-Blot法检测纤维化相关蛋白(TGF-β1、Smad2/3、ColⅠ、ColⅢ、MMP2、MMP9和TIMP1)的表达。2.加参方治疗CHF的血中移行成分研究在加参方治疗CHF的药效基础上,采用UPLC-Q-TOF-MS技术对模型组和加参方组大鼠眼眶血清中的移行成分进行检测,利用Agilent Mass Hunter分析软件进行数据处理,通过对比模型组血清和加参方组血清样品的色谱和质谱信息,区分提取吸收入血原型药物成分及其代谢产物的离子信号,结合文献中的加参方体外化学成分和生理状态大鼠入血成分,并对比保留时间(t )、相对分子质量、分子式、质荷比(m/z)和二级碎片离子等信息对化合物进行鉴定,分析CHF模型基础上的入血原型成分及代谢产物。3.基于代谢组学技术的加参方治疗CHF的作用机制研究在加参方治疗CHF的药效基础上,采用UPLC-Q-TOF-MS技术对假手术组、模型组和加参方组大鼠血清和尿液中小分子代谢物进行检测,利用Waters Mass Lynx软件、Excel等进行数据预处理;采用SIMCA软件进行主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)筛选差异代谢物;利用HMDB代谢物数据平台鉴定分析CHF发生及加参方干预后大鼠体内的代谢标志物;采用Metabo Analyst代谢组学分析平台构建代谢通路。最后采用皮尔逊相关法对加参方治疗CHF的血中移行成分和代谢标志物进行相关性分析。结果:1.加参方治疗CHF的药效学研究(1)加参方对CHF大鼠一般情况的影响空白对照组和假手术组大鼠反应敏捷,行动迅速,精神状态良好。与假手术组比较,模型组大鼠造模后出现明显的脸部肿胀,反应迟钝,行动迟缓,出现拱背等症状,抓取时反抗程度轻。与模型组比较,加参方组大鼠给药后上述症状有所改善。(2)加参方对CHF大鼠心脏结构的影响与假手术组比较,模型组左室舒张末期内径(LVID;d)和左室收缩末期内径(LVID;s)明显升高(P0.05)。给药后,与模型组比较,加参方组LVPW;s明显升高(P0.05),IVS;d、IVS;s和LVPW;d有升高趋势(P>0.05)。(3)加参方对CHF大鼠心脏功能的影响与假手术组比较,模型组射血分数(EF)与短轴缩短率(FS)均显著降低(P0.05)。(4)加参方对CHF大鼠心肌病理损伤的影响心肌组织经HE染色,空白对照组与假手术组大鼠心肌细胞完整、排列整齐、着色均匀,细胞核、细胞浆完整,无炎性细胞浸润。模型组大鼠可见左心室腔扩大(全心横切面),出现明显的梗死灶,肌纤维排列紊乱,纤维细胞增多,心肌细胞减少、排列紊乱、细胞间质水肿,梗死灶及周围可见炎性细胞浸润。与模型组比较,加参方组大鼠心室腔相对缩小,梗死灶相对减小,上述现象减轻。(5)加参方对CHF大鼠心肌纤维化的影响心肌组织经Masson染色,空白对照组和假手术组大鼠心肌细胞间隙有少量胶原纤维,心肌细胞结构形态正常。模型组大鼠左心室前壁可见大量胶原纤维,呈片状分布,纤维

关键词：加参方慢性心力衰竭血中移行成分代谢组学

超高效液相色谱-四级杆飞行时间串联质谱快速分析复方守宫散化学成分及血中移行成分

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安徽中医药大学学报 2022年第1期41卷 92-99页

作者：梁风尘周晋华吴欢胡尚影安徽中医药大学研究生院安徽合肥230012 安徽中医药大学第一附属医院安徽合肥230031 安徽中医药大学科研技术中心安徽合肥230031

目的采用超高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱(ultra-performance liquid chromatography/quadrupole time-of-flight-tandem mass spectrometry,UPLC-Q-TOF/MS)对复方守宫散中化学成分及其血中移行成分进行定性分析,为该制剂的体内有效物质研究提供参考。方法采用沃特世超高效液相色谱仪(ACQUITY UPLC)和沃特世高分辨质谱仪(Waters Synapt G2-Si QTOF)获得复方守宫散原药样品溶液、混合对照品溶液、空白血浆和含药血浆的液相色谱-质谱信息,再通过比对UNIFI(沃特世科学信息平台)质谱数据库中化合物信息以及部分对照品的提取离子流色谱图、质谱碎片裂解信息,鉴定出目标化合物。结果共识别出复方守宫散中77个化学成分(主要有皂苷类25个、黄酮类13个、醌类12个),采用对照品对其中6个成分进行了验证;通过比对空白血浆和含药血浆,发现复方守宫散中绿原酸、槲皮素、虎杖苷、人参皂苷Re等27个成分为入血成分。结论具有高分辨率、高灵敏度的UPLC-QTOF/MS能够快速分析复方守宫散化学成分及其血中移行成分。

关键词：复方守宫散超高效液相色谱-四级杆飞行时间串联质谱化学成分血中移行成分

UHPLC-LTQ-Orbitrap MS结合高能碰撞诱导裂解技术快速鉴定大鼠口服麦冬甾体皂苷后的血中移行成分

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药学学报 2016年第11期51卷 1751-1758页

作者：刘颖蔡伟李宁刘思燚王子健刘珍清张加余赵保胜北京中医药大学中医药研究院北京100029 湖南医药学院侗医药研究湖南省重点实验室湖南怀化418000 香港科技大学深圳研究院广东深圳518057

为了深入研究麦冬活性部位体内药效物质基础,本研究应用UHPLC-LTQ-Orbitrap MS结合高能碰撞诱导裂解技术(HCD)对大鼠口服麦冬甾体皂苷后的入血成分进行快速分析,对比给药后大鼠血浆、大鼠空白血浆、麦冬甾体皂苷提取物以及对照品之间的... 详细信息

为了深入研究麦冬活性部位体内药效物质基础,本研究应用UHPLC-LTQ-Orbitrap MS结合高能碰撞诱导裂解技术(HCD)对大鼠口服麦冬甾体皂苷后的入血成分进行快速分析,对比给药后大鼠血浆、大鼠空白血浆、麦冬甾体皂苷提取物以及对照品之间的色谱和质谱信息,辅以特征诊断离子判别,最终共鉴定了31个血中移行成分,包括13个呋甾烷醇型甾体皂苷和18个(异)螺甾醇型甾体皂苷。其中,8个移行成分的结构可通过与对照品比对被准确鉴定。该结果可为进一步研究麦冬药效物质基础和作用机制提供依据。

关键词： UHPLC-LTQ-Orbitrap MS 高能碰撞技术甾体皂苷血中移行成分麦冬

云南白药配伍环境中草乌活血化瘀作用的血中移行成分研究

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中国中药杂志 2019年第15期44卷 3349-3357页

作者：杨波韩莹张清宇董辉孙晖王喜军黑龙江中医药大学国家中医方证代谢组学研究中心黑龙江哈尔滨150040

采用皮下注射盐酸肾上腺素的方法复制血瘀证大鼠模型,应用云南白药治疗血瘀证大鼠,以血液流变学、凝血功能及组织病理学为指标评价血瘀证模型的成功复制及云南白药的治疗效果;采用超高效液相色谱串联高分辨飞行时间质谱技术(UPLC-Q-TOF-... 详细信息

采用皮下注射盐酸肾上腺素的方法复制血瘀证大鼠模型,应用云南白药治疗血瘀证大鼠,以血液流变学、凝血功能及组织病理学为指标评价血瘀证模型的成功复制及云南白药的治疗效果;采用超高效液相色谱串联高分辨飞行时间质谱技术(UPLC-Q-TOF-MS)快速分析云南白药治疗有效状态下大鼠血清中成分,结合Progenesis QI软件表征云南白药配伍环境中草乌的生物碱类成分。结果显示云南白药能降低血瘀证大鼠血浆黏度及全血黏度,延长凝血酶及凝血酶原时间,降低纤维蛋白原含量,同时能有效改善血瘀证大鼠各脏器瘀血、充血、水肿及炎细胞浸润等病理状态。在此状态下,鉴定了云南白药治疗血瘀证的7个草乌生物碱类入血成分,分别为多根乌头定碱、森布星B、异塔拉定、多根乌头碱、裸翠雀亭、塔拉乌头胺和展花乌头宁。结果表明在云南白药治疗血瘀证有效性的基础上,草乌表达了其治疗血瘀证的体内直接作用物质为多根乌头定碱、森布星B、异塔拉定、多根乌头碱、裸翠雀亭、塔拉乌头胺和展花乌头宁等生物碱类,为草乌在云南白药中的活血化瘀作用药效物质基础。

关键词：云南白药草乌血中移行成分高效液相色谱串联高分辨质谱

复方苦参注射液生物碱类成分及血中移行成分的分析

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安徽中医药大学学报 2023年第4期42卷 93-97页

作者：张莉吴欢尹艳艳安徽医科大学基础医学院药理学教研室安徽合肥230032 安徽中医药大学新安医学教育部重点实验室安徽合肥230038

目的利用超高效液相色谱—电喷雾离子化—四极杆飞行时间质谱(ultra-high-performance liquid chromatography-electrospray ionization-quadrupole time-of-flight mass spectrometry,UHPLC-ESI-QTOF/MS)结合UNIFI构建靶向筛查策略分析复方苦参注射液(Compound Kushen Injection,CKI)的生物碱类成分及血中移行成分。方法首先,采用ESI-QTOF/MS的全信息串联质谱技术采集经UHPLC分离的CKI样品及其空白样品、CKI给药后的大鼠血浆样品及空白血浆样品的信息;然后,建立CKI生物碱化学成分数据库,与MS E数据一同导入UNIFI进行靶向筛查;依据母离子、碎片离子的精确质量对筛查出的化合物进行识别;最后,使用MassLynx 4.1工作站对UNIFI输出的结果进行核实。结果本实验共分离、鉴定了20种CKI生物碱,其中17种生物碱能在大鼠血浆中被检出。结论该方法能够快速分析CKI生物碱类成分及其血中移行成分,可为CKI的质量控制及药效物质研究提供参考。

关键词：超高效液相色谱电喷雾离子化四极杆飞行时间质谱全信息串联质谱技术复方苦参注射液生物碱类成分血中移行成分

茵陈蒿汤及其血中移行成分6,7-二甲氧基香豆素的肝保护作用

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中国药理学通报 2004年第2期20卷 239-240页

作者：王喜军李廷利孙晖黑龙江中医药大学药理学系哈尔滨150040

茵陈蒿汤具有抗肝损伤、利胆等作用［1］，笔者研究了该方给药以后血中的移行成分及其药代动力学［2］，阐明了6，7二甲氧基香豆素（6，7??dimethylesculetin, DME）为该方的主要体内直接作用物质，并阐明了其组织分布及排泄规律［3］... 详细信息

茵陈蒿汤具有抗肝损伤、利胆等作用［1］，笔者研究了该方给药以后血中的移行成分及其药代动力学［2］，阐明了6，7二甲氧基香豆素（6，7??dimethylesculetin, DME）为该方的主要体内直接作用物质，并阐明了其组织分布及排泄规律［3］。本文主要阐明6，7二甲氧基香豆素的活性与茵陈蒿汤保肝作用的相关性。

关键词：茵陈蒿汤血中移行成分 6,7-二甲氧基香豆素肝保护作用

复方安替威胶囊及其富集产物中血中移行成分的含量测定

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药物分析杂志 2006年第5期26卷 631-633页

作者：张宁王喜军孙晖曹洪欣孙文军黑龙江中医药大学药学院哈尔滨150040 中国中医研究院北京100700

目的:利用 HPLC 法同时测定复方安替威胶囊及其富集产物中的2种血中移行成分的含量。方法:采用 RP-HPLC 法建立了复方安替威胶囊及其富集产物的体外和灌胃后大鼠血清样品色谱图谱,在此基础上通过标准品对照确认血中移行成分归属并对其... 详细信息

目的:利用 HPLC 法同时测定复方安替威胶囊及其富集产物中的2种血中移行成分的含量。方法:采用 RP-HPLC 法建立了复方安替威胶囊及其富集产物的体外和灌胃后大鼠血清样品色谱图谱,在此基础上通过标准品对照确认血中移行成分归属并对其进行了含量测定。结果:确认氯原酸和黄芩苷为复方安替威胶囊及其富集产物血中移行成分,测定氯原酸的含量分别为(1.08±0.01)%和(5.03±0.13)%,黄芩苷的含量分别为(1.22±0.03)%和(5.23±0.13)%。结论:该方法简便、快速,并且直接测定入血成分的含量,为复方安替威胶囊及其富集产物的质量控制提供了科学依据。

关键词：复方安替威胶囊血中移行成分氯原酸黄芩苷

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六味地黄丸血中移行成分的分离及结构鉴定

中国天然药物 2007年第4期5卷 277-280页

作者：王喜军孙文军张宁孙晖耿放朴成玉黑龙江中医药大学药学院哈尔滨150040

目的:在前期六味地黄丸血清药物化学初步研究的基础上分离并鉴定六味地黄丸血中移行成分。方法:以血清色谱指纹图为指导,采用大孔吸附树脂柱色谱、硅胶柱色谱及RP-C18柱制备色谱进行分离纯化,根据波谱数据进行结构鉴定。结果:对11种六... 详细信息

目的:在前期六味地黄丸血清药物化学初步研究的基础上分离并鉴定六味地黄丸血中移行成分。方法:以血清色谱指纹图为指导,采用大孔吸附树脂柱色谱、硅胶柱色谱及RP-C18柱制备色谱进行分离纯化,根据波谱数据进行结构鉴定。结果:对11种六味地黄丸血中移行成分进行分离和结构鉴定,共分离得到了8个化合物,分别鉴定为5-羟甲基-2-糠酸(A)、莫诺苷(B)、獐牙菜苷(C)、马钱子苷(D)、2-羟基-苯乙酮-4-葡萄糖醛酸苷(E)、4-甲氧基-5-磺酸基苯乙酮-2-葡萄糖醛酸苷(F)、2,4-二羟基-苯乙酮(G)、(H)2,5-二羟基-4-甲氧基苯乙酮。其中5-羟甲基-2-糠酸(A)为熟地、山茱萸和泽泻中的成分代谢形成;莫诺苷(B)、獐牙菜苷(C)、马钱子苷(D)为山茱萸所含成分直接入血而形成;2-羟基-苯乙酮-4-葡萄糖醛酸苷(E)、4-甲氧基-5-磺酸基苯乙酮-2-葡萄糖醛酸苷(F)、2,4-二羟基-苯乙酮(G)、(H)2,5-二羟基-4-甲氧基苯乙酮为丹皮酚的代谢产物。结论:将血清药物化学方法引入到化合物的分离制备领域中,成功地分离鉴定了六味地黄丸的体内直接作用物质。

关键词：六味地黄丸血中移行成分分离结构鉴定血清药物化学