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作者：田梓琪辽宁中医药大学

学位级别：硕士

目的:了解林蛙主产区的人工驯养现状及存在的问题,制定动物药材哈蟆油的生产及产地加工技术规程草案。通过对林蛙和蟾蜍的输卵管进行性状特征、显微结构、理化性质、化学成分、药效作用方面的对比,分析两者的异同点,对蟾蜍油的毒性成分... 详细信息

目的:了解林蛙主产区的人工驯养现状及存在的问题,制定动物药材哈蟆油的生产及产地加工技术规程草案。通过对林蛙和蟾蜍的输卵管进行性状特征、显微结构、理化性质、化学成分、药效作用方面的对比,分析两者的异同点,对蟾蜍油的毒性成分及急性毒性进行研究,以期为蟾蜍油资源利用提供实验依据。材料与方法:考察对象与材料辽宁、吉林两省具有一定规模的中国林蛙驯养企业;不同产地的哈蟆油样品2批,蟾蜍油样品9批。方法:1中国林蛙人工驯养情况调查实地考察重点对林蛙的生态环境与人工驯养中的孵化、繁育、放养、越冬,以及哈蟆油药材的生产及产地加工等各阶段进行实地调查。主要关注人工驯养中的产卵期繁育技术、蝌蚪期幼体食物饲养、病虫害防治、夏季幼蛙放养、越冬期,以及哈蟆油生产与产地加工技术等内容。2哈蟆油与蟾蜍油对比研究2.1药材对比研究观察哈蟆油和蟾蜍油完整干燥样品,观察二者性状特征;采用普通光学显微镜,观察哈蟆油和蟾蜍油的腺体细胞显微结构,比较细胞形态上的异同;按《中国药典》四部中膨胀度测定法（通则2101）测定二者膨胀度。2.2化学成分对比研究采用分光光度法,对二者的水溶性蛋白质和总磷脂含量进行对比研究;采用HPLC法对二者的1-MH、氨基酸类成分、核苷类成分、磷脂类成分、胆固醇类成分、雌二醇类成分含量进行对比研究。2.3药效作用对比研究采用小鼠游泳实验模型进行抗疲劳药效作用对比,采用小鼠缺氧实验模型进行耐缺氧药效作用对比,并对结果进行统计学分析。2.4蟾蜍油毒性成分测定及急性毒性实验2.4.1蟾蜍油中华蟾酥毒基含量测定以华蟾酥毒基为对照品,采用HPLC法,测定蟾蜍油中华蟾酥毒基成分的含量2.4.2蟾蜍油样品进行急性毒性实验参照《GB 15193.3-2003食品安全性毒理学评价程序》进行急性毒性试验。结果:1中国林蛙人工驯养情况调查林蛙养殖目前处于半人工驯养状态。孵化与繁育技术日益完善,病虫害的防治手段既有有效的预防措施也有针对性的治疗手段,放养期在深林中处于天然放养状态,越冬主要依靠自然环境条件和哈蟆池,技术较为完善。哈蟆油药材目前采用的方法有晾晒剥取、冷冻剥取、新鲜剥取。2哈蟆油与蟾蜍油对比研究2.1药材对比哈蟆油和蟾蜍油干燥样品在外观上具有明显差异,哈蟆油呈块状有特异性窝沟,蟾蜍油呈鸡肠状弯曲多层重叠,二者气味都微腥,但哈蟆油气腥,味微甘,蟾蜍油则有腥臭味;哈蟆油和蟾蜍油腺体细胞显微结构相近,但哈蟆油细胞细胞核和细纹相对较多;蟾蜍油膨胀度平均值为48.1,哈蟆油膨胀度平均值为68.4,蟾蜍油均低于哈蟆油。2.2化学成分对比2.2.1哈蟆油和蟾蜍油的差异性成分是水溶性蛋白质与雌二醇。2.2.2哈蟆油和蟾蜍油的相似性成分是:1-MH、氨基酸、核苷类、磷脂类成分及胆固醇。2.3药效作用对比研究哈蟆油可延长小鼠游泳时间,蟾蜍油组与空白组无统计学差异,但有增加小鼠运动时间的趋势。哈蟆油可延长小鼠耐缺氧时间,蟾蜍油组与空白组无统计学差异,但可明显延迟小鼠出现呼吸急促的现象。2.4蟾蜍油毒性成分测定及急性毒性实验2.4.1蟾蜍油中华蟾酥毒基含量测定在《中国药典》的实验条件下,未检出华蟾酥毒基。2.4.2蟾蜍油样品进行急性毒性实验经过连续14日观察。雌雄小鼠活动正常,睡眠正常,进食进水情况正常,未见不良反应。结论:1综合调查显示,哈蟆油药材其生产及产地加工过程中存在一定问题,为了促进行业发展,制定了《动物药材生产及产地加工技术规程哈蟆油》标准草案。2蟾蜍油与哈蟆油的共性及差异:2.1蟾蜍油与哈蟆油的相似:蟾蜍油的腺体细胞结构与哈蟆油相似,化学成分上磷脂类、核苷类、胆固醇、1-MH、氨基酸含量并无明显差异,蟾蜍油中氨基酸含量更具有营养价值。2.2蟾蜍油与哈蟆油的差异:化学成分中水溶性蛋白质和雌二醇含量具有明显差异。在抗疲劳和抗应激药效作用上,蟾蜍油虽无显著效果但有呈现效果的趋势。3蟾蜍油中未检测出毒性成分华蟾酥毒基,且急性毒性未见不良反应,故蟾蜍油口服具有一定程度的安全性。

关键词：中国林蛙哈蟆油蟾蜍油成分比较药效比较

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哈蟆油与蟾蜍油蛋白质组数据分析

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中国农学通报 2020年第26期36卷 126-135页

作者：宿文杰张鹤李江丹董颖李香艳宋柏林赵大庆长春中医药大学/吉林省中药生物大分子重点实验室长春130117 长春中医院大学附属医院长春130021 鲁西南医院有限公司山东聊城252300

旨在筛选哈蟆油和蟾蜍油中特异性的蛋白质,发现这些差异蛋白与生长环境、冬眠及发育的关系。采用i TRAQ结合质谱技术建立哈蟆油和蟾蜍油蛋白质组数据库,通过比较两个蛋白质组数据库,对筛选的差异蛋白进行Gene ontology功能注释和生物信... 详细信息

旨在筛选哈蟆油和蟾蜍油中特异性的蛋白质,发现这些差异蛋白与生长环境、冬眠及发育的关系。采用i TRAQ结合质谱技术建立哈蟆油和蟾蜍油蛋白质组数据库,通过比较两个蛋白质组数据库,对筛选的差异蛋白进行Gene ontology功能注释和生物信息学分析。结果表明,差异表达蛋白的总数为68个,其中上调蛋白61个,下调蛋白7个。哈蟆油中含量较高的7个差异蛋白主要分为五大类,黏蛋白类(PREDICTED:mucin-5AC-like,PREDICTED:similar to mucin,mCG142254, partial)、胶原蛋白(collagen alpha-1(Ⅲ) chain)、α激酶锚定蛋白13样(PREDICTED:a-kinase anchor protein 13-like)、免疫球蛋白Fc段连接蛋白样(PREDICTED:IgGFc-binding protein-like)、膜联蛋白(annexin A1),以上蛋白主要参与免疫调节、生长发育等过程;同时发现哈蟆油中抗冻成分主要为黏蛋白类,而蟾蜍油中主要为凝集素。哈蟆油中含量较高的7个差异蛋白质可作为哈蟆油区别于蟾蜍油的重要成分,同时哈蟆油的特异性膨胀度可能与含量较高的黏蛋白类密切相关。

关键词：哈蟆油蟾蜍油差异蛋白同位素相对标记与绝对定量技术

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蟾蜍油炮制工艺及质量评价方法研究

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中国现代中药 2024年第2期26卷 357-363页

作者：牟丽燕高萌陆兔林毛春芹季德苏联麟郭志俊高波罗川殷放宙南京中医药大学药学院江苏南京210000 江苏省中药炮制重点实验室江苏南京210000 华润三九现代中药制药有限公司广东惠州516000 安徽华润金蟾药业有限公司安徽淮北235000

目的:优化蟾蜍油干燥工艺,并建立以高效液相色谱法(HPLC)指纹图谱及氨基酸含量测定为主的质量评价方法。方法:以氨基酸和浸出物为指标,进行蟾蜍油热风干燥、自然阴干、冷冻干燥及真空干燥工艺的优选,分别考察了热风干燥的加热温度、加... 详细信息

目的:优化蟾蜍油干燥工艺,并建立以高效液相色谱法(HPLC)指纹图谱及氨基酸含量测定为主的质量评价方法。方法:以氨基酸和浸出物为指标,进行蟾蜍油热风干燥、自然阴干、冷冻干燥及真空干燥工艺的优选,分别考察了热风干燥的加热温度、加热时间、物料厚度,冷冻干燥的预冻时间、冷冻干燥时间,真空干燥的温度及时间对蟾蜍油的影响。采用HPLC建立15批蟾蜍油的指纹图谱,确定共有峰并进行相似度评价;同时,采用柱前衍生化法测定氨基酸含量。结果:蟾蜍油最佳工艺为不叠加样本,50℃热风干燥11 h。HPLC指纹图谱中共确定7个共有峰,相似度均大于0.99;异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸质量分数分别为0.40%~0.57%、0.57%~0.78%、0.54%~0.75%、0.26%~0.86%。结论:所确定的工艺及质量评价方法简便、重复性好,可为蟾蜍油的加工炮制及质量评价提供参考。

关键词：蟾蜍油干燥工艺高效液相色谱法指纹图谱氨基酸

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应用iTRAQ结合2D LC-MS/MS技术分析哈蟆油与伪品蛙油的差异蛋白质组

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辽宁中医杂志 2019年第3期46卷 472-475,I0002页

作者：魏星华王铭张玉尧潘黛安苏航齐滨张鹤赵大庆吉林省科普服务中心吉林长春130021 长春中医药大学吉林长春130117 长春中医院大学附属医院中医药研究中心吉林长春130021

采用iT RAQ结合2D LC-MS/MS技术对哈蟆油、青蛙油、蟾蜍油、牛蛙油的蛋白质组进行研究。采用Q Exactive质谱鉴定并经MASCOT软件搜库,对所鉴定的蛋白质进行理化性质分析、层次聚类分析、Gene ontology(GO)功能注释和生物信息学分析。结... 详细信息

采用iT RAQ结合2D LC-MS/MS技术对哈蟆油、青蛙油、蟾蜍油、牛蛙油的蛋白质组进行研究。采用Q Exactive质谱鉴定并经MASCOT软件搜库,对所鉴定的蛋白质进行理化性质分析、层次聚类分析、Gene ontology(GO)功能注释和生物信息学分析。结果共获得2286个肽段,鉴定到1220个蛋白质,其中1212个蛋白质具有定量信息。鉴定得到的蛋白质分子量主要分布在4. 1～36. 9 kD a,占82. 79%,等电点主要分布在4. 41～9. 89,占94. 84%。对比青蛙油、蟾蜍油和牛蛙油与哈蟆油蛋白质数据库,筛选得到8个差异蛋白(比值> 1. 2或比值油与伪品蛙油的差异性,为进一步分析哈蟆油中蛋白质成分特点、功能奠定基础。

关键词：哈蟆油青蛙油蟾蜍油牛蛙油 iTRAQ 蛋白质组

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