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温度、相对湿度和pH对蜜蜂球囊菌孢子萌发的影响

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应用生态学报 2000年第6期11卷 869-872页

作者：梁勤陈大福王建鼎福建农林大学蜂学系福州350002

研究了温度、相对湿度和 pH对蜜蜂球囊菌 (Ascosphaeraapis)孢子萌发 3个阶段 (活化、膨大、产生萌发管 )的影响 .结果表明 ,孢子活化和膨大在 15～ 40和 (2 5～ 40 )± 0 5℃范围内受温度的影响不明显 (P >0 0 5 ) ;萌发管仅发生在 ... 详细信息

研究了温度、相对湿度和 pH对蜜蜂球囊菌 (Ascosphaeraapis)孢子萌发 3个阶段 (活化、膨大、产生萌发管 )的影响 .结果表明 ,孢子活化和膨大在 15～ 40和 (2 5～ 40 )± 0 5℃范围内受温度的影响不明显 (P >0 0 5 ) ;萌发管仅发生在 2 5～ 37± 0 5℃ ,最适温度位于 (31～ 35 )± 0 5℃ .相对湿度越大 ,越有利于孢子萌发 ,而相对湿度低于 80 %对孢子萌发极为不利 .孢子萌发的 3个阶段在 pH为 5～ 7 8时几乎不受 pH变化的影响 ,而在 pH值较低影响很大 .可见 ,A .apis是一种高度专一的蜜蜂幼虫病原体 .

关键词：蜜蜂球囊菌孢子萌发温度相对湿度 pH

影响蜜蜂球囊菌侵染蜜蜂幼虫的因素及侵染过程观察

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昆虫学报 2012年第7期55卷 790-797页

作者：李江红郑志阳陈大福梁勤福建农林大学蜂学学院福州350002

为探究蜜蜂球囊菌Ascosphaera apis只侵染封盖前后蜜蜂幼虫的原因及相关侵染机制,本研究利用实验室饲养的意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica幼虫,给其接种球囊菌孢子,探究不同接种量(0,1.0×102,1.0×103,1.0×104,1.0×105和1.0×10... 详细信息

为探究蜜蜂球囊菌Ascosphaera apis只侵染封盖前后蜜蜂幼虫的原因及相关侵染机制,本研究利用实验室饲养的意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica幼虫,给其接种球囊菌孢子,探究不同接种量(0,1.0×102,1.0×103,1.0×104,1.0×105和1.0×106孢子/mL)、接种时期(3,4,5和6龄幼虫)以及28℃低温处理6h对蜜蜂球囊菌侵染的影响。同时对处于不同侵染阶段的蜜蜂幼虫做病理学切片,探究球囊菌侵染的过程。结果显示:球囊菌孢子接种量与蜜蜂的发病率密切相关(r=0.9883),蜜蜂幼虫对低于1.0×103孢子/mL的侵染有抗性,与不接孢子的对照组差异不显著(P>0.05)。蜜蜂不同龄期接种发病率的差异是因不同龄幼虫食量不同导致的摄入孢子剂量的不同引起的,28℃低温处理能够显著提高处于幼虫到蛹转化期蜜蜂的发病率(P蜜蜂幼虫没有影响。病理学研究表明,在整个幼虫期,摄入的孢子因中肠没有氧气不生长,对幼虫没有致病性,幼虫的取食和发育过程正常,至幼虫期结束进入蛹期后,蜜蜂的中后肠接通,摄入的孢子伴随蜜蜂的蛹便进入后肠并在此迅速萌发生长,在1～2d内菌丝即突破体表,导致蜜蜂死亡。蜜蜂球囊菌选择营养物质储存最多而防御能力较低的幼虫到蛹转化期侵染,降低了侵染成本,提高成功率。该研究阐明了蜜蜂球囊菌侵染蜜蜂的机制,丰富了昆虫与病原菌之间相互作用的内容。

关键词：蜜蜂蜜蜂球囊菌意大利蜜蜂侵染孢子剂量接种时期致病性

基于PacBio测序数据的蜜蜂球囊菌SNP与InDel位点发掘及分析

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昆虫学报 2022年第2期65卷 187-196页

作者：蔡宗兵张文德隆琦余岢骏孙明会吴鹰许雅静刘佳美郭意龙徐细建陈大福郭睿福建农林大学动物科学学院(蜂学学院) 福州350002 福建农林大学蜂疗研究所福州350002 江西省养蜂研究所南昌330000

【目的】本研究拟利用已获得的蜜蜂球囊菌Ascosphaera apis菌丝的PacBio单分子实时(single molecule real-time,SMRT)测序数据对蜜蜂球囊菌的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)和插入缺失(insertion-deletion,InDel)突变位点进行发掘和分析,旨在丰富蜜蜂球囊菌的SNP和InDel位点信息,并为新型分子标记的开发和应用提供基础。【方法】采用SAMtools对蜜蜂球囊菌菌丝PacBio SMRT测序数据进行全长转录本识别,再利用ANNOVAR软件将识别的全长转录本与蜜蜂球囊菌参考基因组(assembly AAP 1.0)进行比对以检测和分析SNP位点和InDel位点。通过相关生物信息学软件将上述SNP位点和InDel位点基因分别比对GO和KEGG数据库进行功能和通路注释。【结果】在蜜蜂球囊菌菌丝中共鉴定到6743个SNP位点,主要分布于外显子,包括6091个纯合位点和652个杂合位点;其中发生转换和颠换的SNP位点分别有4887和1856个;SNP位点密码子突变类型中数量最多的是同义单核苷酸突变;SNP位点基因可注释到34个GO条目和76个KEGG通路。共鉴定到597个InDel位点,包括349个纯合位点和248个杂合位点,这些InDel位点在基因下游区分布的数量最多;InDel位点密码子突变类型中非移码插入最为丰富;InDel位点基因可在39个GO条目和87条KEGG通路。【结论】鉴定到蜜蜂球囊菌的大量SNP和InDel位点,明确了SNP和InDel位点的突变类型、基因组功能元件分布和密码子突变类型,并揭示了SNP和InDel位点与关键生物学过程的潜在关联。

关键词：蜜蜂球囊菌第三代测序技术单分子实时测序单核苷酸多态性插入缺失

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金属离子对蜜蜂球囊菌几丁质酶活力的影响

福建农林大学学报（自然科学版） 2008年第1期37卷 96-98页

作者：刘鹏虎周刚陈大福梁勤福建农林大学蜂学学院福建福州350002

探讨了不同金属离子对蜜蜂球囊菌几丁质酶活力的影响.结果表明:在0-100 mmol.L-1范围内,一价金属离子Na+、K+随离子浓度的增大,对几丁质酶活力的影响表现为先促进后抑制;在1-10 mmol.L-1范围内,二价金属离子Mg2+、Mn2+起抑制作用,Zn2+... 详细信息

探讨了不同金属离子对蜜蜂球囊菌几丁质酶活力的影响.结果表明:在0-100 mmol.L-1范围内,一价金属离子Na+、K+随离子浓度的增大,对几丁质酶活力的影响表现为先促进后抑制;在1-10 mmol.L-1范围内,二价金属离子Mg2+、Mn2+起抑制作用,Zn2+基本没有影响,Ca2+、Fe2+起促进作用;在1-10 mmol.L-1范围内,三价金属离子A l3+起促进作用,Fe3+基本没有影响.

关键词：蜜蜂球囊菌金属离子几丁质酶活力

基于RNA-seq数据大规模挖掘蜜蜂球囊菌的SSR分子标记

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福建农林大学学报（自然科学版） 2017年第4期46卷 434-438页

作者：李汶东熊翠玲王鸿权侯志贤童新宇张璐付中民郑燕珍陈大福郭睿福建农林大学蜂学学院福建福州350002

基于已获得的球囊菌转录组数据预测微卫星标记(SSR),并进行SSR位点的信息分析和SSR引物的挖掘.利用软件MISA对球囊菌转录组中42610条unigenes进行搜索,共预测出7968个SSRs,分布于5233条unigenes中,其中最主要的重复类型为三核苷酸重复(5... 详细信息

基于已获得的球囊菌转录组数据预测微卫星标记(SSR),并进行SSR位点的信息分析和SSR引物的挖掘.利用软件MISA对球囊菌转录组中42610条unigenes进行搜索,共预测出7968个SSRs,分布于5233条unigenes中,其中最主要的重复类型为三核苷酸重复(53.15%),其次为二核苷酸重复(32.32%)和四核苷酸重复(8.46%).二核苷酸重复中的基序主要是AG/CT(占总量的15.8%).针对所有的SSR位点,利用Primer Premier 5软件设计出6956对SSR特异性引物,随机选取20对引物对两个不同来源的球囊菌样品进行SSR位点扩增,共有6对引物成功扩增出符合预期的目的片段.研究结果表明,利用球囊菌转录组数据开发SSR引物是可行的.

关键词：蜜蜂球囊菌微卫星标记转录组 RNA-seq

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不同辐照剂量对蜜蜂球囊菌的杀灭效果

不同辐照剂量对蜜蜂球囊菌的杀灭效果

作者：董文滨山东农业大学

学位级别：硕士

养蜂业是我国农业生产的一个重要有机组成部分,但蜜蜂的生长繁殖一直受到各种病原微生物特别是蜜蜂白垩病的危害。蜜蜂白垩病是由蜜蜂球囊菌感染而引起蜜蜂幼虫死亡的真菌性传染病,20世纪90年代初开始在我国暴发流行,以后时有发生,给我... 详细信息

养蜂业是我国农业生产的一个重要有机组成部分,但蜜蜂的生长繁殖一直受到各种病原微生物特别是蜜蜂白垩病的危害。蜜蜂白垩病是由蜜蜂球囊菌感染而引起蜜蜂幼虫死亡的真菌性传染病,20世纪90年代初开始在我国暴发流行,以后时有发生,给我国的养蜂生产造成了严重危害。但非常遗憾的是,到目前为止,至今没有有效的防控方法。研究发现,市售蜂花粉中常含有蜜蜂球囊菌,养蜂场在购买此类花粉作为蜜蜂饲料后,蜂群易患白垩病,通过60Co辐照杀灭蜂花粉中的蜜蜂球囊菌是切断白垩病传播途径的有效手段,而目前辐照剂量并不明确,导致辐照效果参差不齐。本研究以蜜蜂球囊菌为研究对象,探究不同辐照剂量对蜜蜂球囊菌的杀灭效果,以期明确有效杀灭蜜蜂球囊菌的最低辐照剂量,为60Co辐照蜜蜂饲料(特别是蜂花粉)时的辐照剂量选择提供依据。本研究利用细菌纯化技术从患白垩病(Bee Chalkbrood Disease)的意大利蜜蜂幼虫体内分离纯化得到蜜蜂球囊菌(Ascosphaera apis),并结合形态学、乳酸酚棉兰染色以及5.8S rDNA序列分析技术进行鉴定。同时制备不同梯度浓度的A. apis孢子悬液加入到幼虫饲料中,对3日龄意蜂幼虫体外接种试验,利用人工饲养蜜蜂幼虫技术,统计幼虫患病率,通过寇式法计算得出蜜蜂球囊菌对意大利蜜蜂幼虫的半数致死浓度,对添加半数致死浓度的孢子的饲料进行不同剂量辐照处理并进行侵染意大利蜜蜂幼虫实验,最终确定对添加半数致死浓度的蜜蜂球囊菌孢子饲料的最低有效辐照剂量。试验结果表明：从患白垩病的意大利蜜蜂幼虫体内分离纯化得到蜜蜂球囊菌的菌落形态与文献报道一致;显微镜下观察其孢囊直径,孢子球直径和孢子的长宽比等形态特征与文献报道相同或接近;对分离纯化的蜜蜂球囊菌进行分子鉴定,扩增片段大小符合理论值,经与GenBank所公布的蜜蜂球囊菌特异性片段序列做blast对比,重合度99%;计算得出蜜蜂球囊菌对人工饲养条件下的意蜂幼虫的半数致死浓度为5.6×104个/ml;经60Co对添加半数致死浓度的蜜蜂球囊菌孢子饲料进行辐照后饲喂幼虫,在7.0kGy剂量辐照条件下,幼虫患病率与未辐照组有显著差异(P<0.05)。

关键词：蜜蜂球囊菌辐照剂量蜜蜂饲料白垩病

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营养生态条件对蜜蜂球囊菌生长及产孢的影响

中国生态农业学报 2001年第4期9卷 31-34页

作者：梁勤陈大福王建鼎福建农林大学蜂学系福州350002

从碳源、氮源、维生素、矿质元素等方面研究了营养生态条件对蜜蜂球囊菌(Ascosphaera apis Olive＆Spiltoir)生长及产孢的影响。结果表明,营养生态条件的变化对蜜蜂球囊菌的影响极大。***菌丝体生长最好的碳源是果糖,产孢量最高的是葡萄... 详细信息

从碳源、氮源、维生素、矿质元素等方面研究了营养生态条件对蜜蜂球囊菌(Ascosphaera apis Olive＆Spiltoir)生长及产孢的影响。结果表明,营养生态条件的变化对蜜蜂球囊菌的影响极大。***菌丝体生长最好的碳源是果糖,产孢量最高的是葡萄糖,不利用山梨糖和甘露糖;该菌优先利用有机氮源,不利用无机氮源中NaNO_2、H_2NCSNH_2;维生素对***产孢量有极为显著的影响,复合维生素比单一维生素能更好地促进菌丝体生长,尤其对产孢更为有利;矿质元素中Mg^(2+)、P^(5+)、K^+、Zn^(2+)促进菌丝体生长和孢子的形成,Na^+对菌丝体的生长有抑制作用。

关键词：蜜蜂球囊菌营养生态菌丝体生长产孢蜜蜂病害白垩病

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蜂胶挥发油提取与抑蜜蜂球囊菌的研究

蜂胶挥发油提取与抑蜜蜂球囊菌的研究

作者：蒋金龙福建农林大学

学位级别：硕士

本文主要对河南蜂胶挥发油的提取、成分鉴定及理化性质、清除DPPH自由基能力、抑蜜蜂球囊菌活性进行了研究,结果如下:(1)采用有机溶剂浸提法提取蜂胶挥发油,比较了石油醚、正己烷、乙醚、四氯化碳四种溶剂的提取率,确定石油醚为最佳溶... 详细信息

本文主要对河南蜂胶挥发油的提取、成分鉴定及理化性质、清除DPPH自由基能力、抑蜜蜂球囊菌活性进行了研究,结果如下:(1)采用有机溶剂浸提法提取蜂胶挥发油,比较了石油醚、正己烷、乙醚、四氯化碳四种溶剂的提取率,确定石油醚为最佳溶剂。采用正交试验优化微波-超声波辅助技术提取蜂胶挥发油的工艺,其最佳工艺条件为:料液比1:20,浸提温度40℃,微波炉选择中档功率,提取时间15 min。该条件下的提取率高达12.32%,说明微波-超声波协同辅助这种新技术具有很强的可行性。(2)采用GC-MS技术对石油醚、正己烷、乙醚、四氯化碳四种溶剂浸提物(分别为PEP、HEP、TEP、DEP)的成分进行鉴定分析。其中PEP鉴定出60种化合物,HEP 49种化合物,TEP 46种化合物,DEP 47种化合物,其相对百分含量分别为34.18%,30.03%,47.66%,35.14%。主要成分有烷烃、烯、醇、酸、醛、酮、酯类等化合物,但各成分在含量上存在很大的差异,表明溶剂的极性会影响其对蜂胶挥发性成分的选择性。(3)参考GB/T 14454,GB/T 14455等国家标准对蜂胶挥发油PEP的9项理化指标进行了初步的检测,结果显示:PEP为黄色透明油状液体,有浓郁香味;在25℃时,PEP的相对密度为0.936;折光率为1.43505;熔程为25℃～47℃;凝点为24℃;PEP在乙醇中的溶混度表示为1 mL的PEP能完全溶解于17.6 mL的90%乙醇溶液中;PEP的酸值与酯值分别为14.8和16.7;羰基化合物含量和含酚量分别为11.8 %,60.4 %。(4)以DPPH自由基清除能力评价了TEP、PEP、HEP及DEP的抗氧化活性。Duncan多重比较分析结果显示:TEP、PEP、HEP及DEP之间的抗氧化活性差异极显著(PPEP>HEP>DEP;TEP和蜂胶的抗氧化活性在5%水平上差异不显著,但均表现出很强的清除DPPH自由基能力。TEP、PEP、HEP及DEP的抗氧化活性都呈现量效关系,即DPPH自由基清除率随着浓度增大而升高;清除自由基的IC50分别约为5μg/mL,10μg/mL,50μg/mL,200μg/mL。TEP具有很强抗氧化活性与其含大量的高良姜素、松属素等黄酮类物质有关;而DEP的抗氧化活性很弱可能与DEP中含有具有抗氧化活性的酯类和酚类物质非常少有关。(5)采用生长速率法和试管连续稀释法分析蜂胶与蜂胶挥发油PEP抑蜜蜂球囊菌活性,并与制霉菌素的抑菌效果作对比分析。生长速率法试验结果显示:蜂胶的抑菌活性强于蜂胶挥发油,蜂胶挥发油PEP在高浓度时对球囊菌有一定的抑制作用;蜂胶与蜂胶挥发油的抑菌效果不及制霉菌素效果好。试管稀释法测定蜂胶、PEP、制霉菌素的最低抑制浓度(MIC)分别为:0.078 mg/mL,0.156 mg/mL,0.156 mg/mL,蜂胶和PEP的MIC比制霉菌素的要低或相等,试管稀释法结果表明蜂胶与蜂胶挥发油对球囊菌均具有一定的抑菌活性。

关键词：蜂胶挥发油微波-超声波辅助技术 DPPH GC-MS 蜜蜂球囊菌

蜜蜂球囊菌胞外蛋白酶活性与菌株毒力关系的研究

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中国蜂业 2015年第10期66卷 36-38,50页

作者：陈大福王吉州梁勤福建农林大学蜂学学院福州350002

为了探讨蜜蜂球囊菌(Ascosphaera apis)胞外蛋白酶活性(PU)与其毒力的关系,评价胞外蛋白酶活力作为毒力指标的可靠性。本研究测定了9个不同来源地的蜜蜂球囊菌菌株的胞外蛋白酶活性及接种后各日累积蜜蜂幼虫死亡率和致死中时(LT50),将... 详细信息

为了探讨蜜蜂球囊菌(Ascosphaera apis)胞外蛋白酶活性(PU)与其毒力的关系,评价胞外蛋白酶活力作为毒力指标的可靠性。本研究测定了9个不同来源地的蜜蜂球囊菌菌株的胞外蛋白酶活性及接种后各日累积蜜蜂幼虫死亡率和致死中时(LT50),将胞外蛋白酶活性与接种后各日累积死亡率及致死中时(LT50)进行回归分析,以确定胞外蛋白酶活性与其对蜜蜂幼虫的毒力间的相关性。结果表明各菌株胞外蛋白酶活性与其毒力间的存在显著相关性。因此,蜜蜂球囊菌胞外蛋白酶活性可作为大量菌株筛选的参考毒力指标,但不能作为测定相关性的唯一指标。

关键词：蜜蜂白垩病蜜蜂球囊菌胞外蛋白酶活性毒力