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微生物学实验模块“蛋白酶产生菌的筛选、培养和选育”的教改研究与实践

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微生物学通报 2010年第11期37卷 1698-1700页

作者：张茵徐旭士何伟袁生南京师范大学生命科学学院江苏南京210046

围绕"蛋白酶产生菌的筛选、培养和选育"主线,设计了一个由5个相互关联、前后衔接、形成一体的实验组成的综合性研究型实验模块,并进行教学实践。它们是:培养基的配制、分装与灭菌;产蛋白酶细菌的分离与纯化;产蛋白酶细菌的培养发酵与条... 详细信息

围绕"蛋白酶产生菌的筛选、培养和选育"主线,设计了一个由5个相互关联、前后衔接、形成一体的实验组成的综合性研究型实验模块,并进行教学实践。它们是:培养基的配制、分装与灭菌;产蛋白酶细菌的分离与纯化;产蛋白酶细菌的培养发酵与条件优化;产蛋白酶细菌的鉴定;产蛋白酶细菌的紫外诱变育种。

关键词：微生物学实验实验模块蛋白酶产生菌

1株传统曲霉型豆豉中高活力蛋白酶产生菌的分离及其鉴定

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江西师范大学学报（自然科学版） 2015年第5期39卷 497-501页

作者：杨林王筱兰杨慧林张菊谢雅雯江西师范大学生命科学学院江西南昌330022

豆豉是一种以大豆作为原料经过微生物发酵而形成的传统发酵食品.在发酵过程中,蛋白酶产生菌是其优势菌株并发挥着重要作用.通过对传统曲霉型豆豉发酵过程中的微生物进行分离、初筛和复筛,筛选获得1株高产蛋白酶的菌株,经测定其酶活力为2... 详细信息

豆豉是一种以大豆作为原料经过微生物发酵而形成的传统发酵食品.在发酵过程中,蛋白酶产生菌是其优势菌株并发挥着重要作用.通过对传统曲霉型豆豉发酵过程中的微生物进行分离、初筛和复筛,筛选获得1株高产蛋白酶的菌株,经测定其酶活力为2 231 U·L-1.通过生理生化及16S DNA分子鉴定该菌株为解淀粉芽孢杆菌.获得的高活力蛋白酶产生菌将为后续制作风味良好的豆豉提供基础,同时也为工业化生产蛋白酶提供菌种资源.

关键词：豆豉蛋白酶产生菌筛选鉴定解淀粉芽孢杆菌

一株耐盐性蛋白酶产生菌的诱变选育及酶学性质研究

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中国调味品 2016年第8期41卷 53-57,64页

作者：付瑞敏蔺芳陈五岭河南教育学院郑州450046 西北大学生命科学学院西安710069 新乡学院生物技术系河南新乡453003

通过富集、初筛和复筛从肉联厂附近的土壤中分离筛选耐盐蛋白酶产生菌DB-12,经形态学、生理生化及16SrRNA序列分析,菌株DB-12被鉴定为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis),产蛋白酶活力为56U/mL。为增强该菌株的耐盐和产蛋白酶能力,... 详细信息

通过富集、初筛和复筛从肉联厂附近的土壤中分离筛选耐盐蛋白酶产生菌DB-12,经形态学、生理生化及16SrRNA序列分析,菌株DB-12被鉴定为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis),产蛋白酶活力为56U/mL。为增强该菌株的耐盐和产蛋白酶能力,对其进行He-Ne激光诱变,获得遗传稳定性良好的突变株DB-12-16,其所产蛋白酶的酶活最高可达132U/mL,此外,还可耐受25%浓度的氯化钠。酶学性质研究结果表明:突变株所产蛋白酶具有较高的温度和pH适应性。作为一种耐盐且高产蛋白酶的菌,该突变株在食品生产及环境修复等方面有极为广阔的应用前景。

关键词：耐盐蛋白酶产生菌 He-Ne激光诱变选育

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蛋白酶产生菌的筛选、鉴定及酶学性质研究

湖北农业科学 2015年第19期54卷 4794-4797页

作者：李婵娟王婧杨洁华中农业大学楚天学院武汉430205 湖北省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所武汉430064

采用干酪素平板透明圈法从垃圾附近的土壤中分离得到1株产蛋白酶的优良菌株,通过测定其16S r DNA基因序列,鉴定该菌为铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）。以酪蛋白为底物对该菌所产蛋白酶粗酶液进行了酶学性质研究,结果表明,该酶... 详细信息

采用干酪素平板透明圈法从垃圾附近的土壤中分离得到1株产蛋白酶的优良菌株,通过测定其16S r DNA基因序列,鉴定该菌为铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）。以酪蛋白为底物对该菌所产蛋白酶粗酶液进行了酶学性质研究,结果表明,该酶最适反应p H为8.5,为碱性蛋白酶;在p H 6.0~9.0的缓冲液中于4℃放置12 h后仍有90%以上的酶活性,说明该酶在中性和碱性条件下非常稳定。该酶最适反应温度为55℃,在70℃和80℃处理30 min后仍分别保有68%和45%的残余酶活性,从而表明该酶具有较好的热稳定性。Mg2＋和Fe2＋对该酶活性几乎没有影响,K＋和Mn2＋对该酶活性有轻微的抑制作用,EDTA对该酶活性有明显的抑制作用;Cu2＋对该酶活性也有26%的抑制作用,只有Ca2＋对该酶活性有10%左右的促进作用。

关键词：蛋白酶产生菌分离鉴定酶学性质

深层培养黑曲霉生产酸性蛋白酶的研究 Ⅰ.酸性蛋白酶产生菌的筛选及其培养条件

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微生物学报 1976年第2期 156-165页

作者： SHANGHAI INSTITUTE OF INDUSTRIAL MICROBIOLOGY, THE SHANGHAI DISTILLERY (Shanghai) 上海市工业微生物研究所上海酒精厂

用5种培养基,从120株霉菌中筛得5株产生酸性蛋白酶的黑曲霉及其突变株。对影响这些菌株生产酸性蛋白酶的各种因素的研究结果表明,黑曲霉生产酸性蛋白酶需要高浓度的氮源,特别是无机氮,这与其他微生物蛋白酶的生产有所不同。另外,CaCl2... 详细信息

用5种培养基,从120株霉菌中筛得5株产生酸性蛋白酶的黑曲霉及其突变株。对影响这些菌株生产酸性蛋白酶的各种因素的研究结果表明,黑曲霉生产酸性蛋白酶需要高浓度的氮源,特别是无机氮,这与其他微生物蛋白酶的生产有所不同。另外,CaCl2、胨、豆饼粉、蚕蛹粉、鱼粉的石灰水解液均能促进酸性蛋白酶的生产。磷酸盐、微量的Cu++、Fe++、Mn++、Ni++、于产酶略有促进作用。培养基中固形物的浓度、通气量、起始pH、种子培养条件以及种龄、种量等都对产酶有明显的影响。

关键词：黑曲霉肉桂色曲霉通气量酸性蛋白酶产酶活性蛋白酶产生菌深层培养酸性

中性蛋白酶产生菌0031菌株的筛选及其产酶特性的初步探索

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杭州大学学报(自然科学版) 1979年第3期 68-77页

作者：陈士怡曾云中胡萸英翁芷芬

我们从9株水解圈比值（水解圈直径/菌落直径）较大的（一般在7以上）初筛株中,经摇瓶复筛,筛选出一株中性蛋白酶产生菌0031菌株.经初步观察其培养特征较接近于枯草芽孢杆菌（A.S.1398）,但其发酵液在盘状电泳上的酶谱,有别于枯草芽孢杆... 详细信息

我们从9株水解圈比值（水解圈直径/菌落直径）较大的（一般在7以上）初筛株中,经摇瓶复筛,筛选出一株中性蛋白酶产生菌0031菌株.经初步观察其培养特征较接近于枯草芽孢杆菌（A.S.1398）,但其发酵液在盘状电泳上的酶谱,有别于枯草芽孢杆菌,其产酶的摇瓶发酵培养基为:豆饼粉3%,玉米粉2%,麸皮3%,KH2PO40.03%,Na2HPO40.4%,pH 8.0（消毒前）.在50 ml（每500 ml 三角烧瓶）的装量,旋转式摇床（转速220次/分偏距2.5cm）温度28℃的条件下发酵,经34—38小时,酶效价稳定在2000单位左右（测定反应温度30℃）最高效价可达2330单位.在该菌株的产酶特性的探索过程中,我们发现1.适当的加大通气量和提高 pH 能提高产酶量和缩短发酵周期,但美中不足的是酶高峰期较短促,较不利于在发酵过程中控制产酶高峰点.2.提高发酵温度（30℃以上）略有抑制产酶的趋势或有明显的酶高峰期推迟的现象.***艹和 Ca艹（试验浓度分别为 ZnSO40.005%和 CaCl2 0.3%）对产酶无促进作用.根据目前所表现的生产性能,0031筛选株是理想的,值得联系实际目的,进一步研究提高其产酶能力.

关键词：产酶特性初步探索蛋白酶产生菌产酶能力

石油发酵蛋白酶产生菌的筛选、鉴定及其酶的基本性质

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复旦学报(自然科学版) 1981年第2期 186-191页

作者：郑兆鑫周士惠徐雅英伦美娇黄美华王亚仙赵云泉郭杰炎上海新型发酵厂上海市工业微生物研究所

石油制品正构烷烃可以作为发酵生产蛋白酶的碳源,已经发现镰刀菌S-19-5、淡紫青霉IFO 8504、铜绿色假单孢杆菌IFO3080和IFO3455以及嗜石油无色杆菌等,它们都可以在含有各种不同的正构烷烃的培养基中生长并合成一定量的蛋白酶。我们从大... 详细信息

石油制品正构烷烃可以作为发酵生产蛋白酶的碳源,已经发现镰刀菌S-19-5、淡紫青霉IFO 8504、铜绿色假单孢杆菌IFO3080和IFO3455以及嗜石油无色杆菌等,它们都可以在含有各种不同的正构烷烃的培养基中生长并合成一定量的蛋白酶。我们从大庆、胜利等油田土壤中分离得到三株产蛋白酶较高的菌株。本文介绍产蛋白酶菌株的筛选方法、三株产酶较高菌株的分类鉴定,并对其中一菌株所产蛋白酶的基本性质进行了初步研究。

关键词：蛋白酶产生菌基本性质菌种蛋白酶菌株酪蛋白溶液酶液正构烷烃碱性蛋白酶摇瓶发酵石油发酵工业发酵

碱性蛋白酶产生菌209的发酵及其酶的基本特性

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微生物学报 1975年第4期 330-334页

作者： Honan Scientific Eeseabch Institute of Leather Industet (Pingdingshan) 河南皮革工业科学研究所

为了适应皮革工业上酶法脱毛的需要,筛选到一株碱性蛋白酶产生菌209菌株,经鉴定为短小芽孢杆菌（Bacillus pumilus）。其产酶的发酵培养基成分是:豆饼粉2.5—3.5%,麸皮3.5—4.5%,Na2HPO4 0.4%,KH2PO4 0.03%,CaCl2 0.3%,Na2CO3 0.5%。pH... 详细信息

为了适应皮革工业上酶法脱毛的需要,筛选到一株碱性蛋白酶产生菌209菌株,经鉴定为短小芽孢杆菌（Bacillus pumilus）。其产酶的发酵培养基成分是:豆饼粉2.5—3.5%,麸皮3.5—4.5%,Na2HPO4 0.4%,KH2PO4 0.03%,CaCl2 0.3%,Na2CO3 0.5%。pH9.0（灭菌后）用50升罐,在35—36℃,通气量1∶0.5—1∶1,发酵31小时,酶活达到5000单位左右,该酶作用的最适 pH是 9—11,最适温度（反应20分钟）50℃,延长反应时间在40℃以下为宜,塑料袋贮藏11个月酶活力不变,对小白鼠试验无毒。

关键词：蛋白酶产生菌基本特性皮革工业轻工业酶活性酶活力产酶豆饼粉碱性蛋白酶发酵培养基酶液最适温度

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1株蛋白酶产生菌的分离及生理特征研究

安徽农业科学 2011年第7期39卷 3793-3795页

作者：晏爱芬余丽保山学院生化系云南保山678000

采用平板透明圈法,经初筛和复筛从高黎贡山土样中分离出1株产蛋白酶活性较高的菌株CM8,并对其形态和生理生化特征进行研究。结果表明,CM8菌株的菌落呈不规则形,乳白色,表面湿润,边缘整齐;在光学显微镜下,菌株呈杆状,具运动性,革兰氏染... 详细信息

采用平板透明圈法,经初筛和复筛从高黎贡山土样中分离出1株产蛋白酶活性较高的菌株CM8,并对其形态和生理生化特征进行研究。结果表明,CM8菌株的菌落呈不规则形,乳白色,表面湿润,边缘整齐;在光学显微镜下,菌株呈杆状,具运动性,革兰氏染色阳性。经测定,其最适生长温度为32℃,最适生长pH值为7.5,菌株可在酪素平板上产生清晰可见的透明圈,透明圈直径和菌落直径的比值为3.71。菌株产高温蛋白酶的酶活力可达34.24 U/m l。

关键词：蛋白酶产生菌分离生理特征

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