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北京医科大学学报 1991年第1期23卷 26-28页

作者：肖国芝董苍玉北京医科大学生物化学教研室

本文研究了艾氏腹水癌免疫核糖核酸(EAC-I-RNA)体外对小鼠脾淋巴细胞蛋白质合成的影响。结果表明,EAC-I-RNA能显著促进淋巴细胞蛋白质合成,此作用能被RNase所阻断。本文还用Oligo(dT)纤维素柱亲合层析法研究了EAC-I-RNA的活性组份,结果... 详细信息

本文研究了艾氏腹水癌免疫核糖核酸(EAC-I-RNA)体外对小鼠脾淋巴细胞蛋白质合成的影响。结果表明,EAC-I-RNA能显著促进淋巴细胞蛋白质合成,此作用能被RNase所阻断。本文还用Oligo(dT)纤维素柱亲合层析法研究了EAC-I-RNA的活性组份,结果发现,PolyA(+)组份具有很强的促进活性。

关键词： RNA 蛋白质活性艾氏腹水癌

pH响应性聚合物共修饰对金纳米粒子-蛋白质复合物生物活性的调控

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pH响应性聚合物共修饰对金纳米粒子-蛋白质复合物生物活性的调控

2015年全国高分子学术论文报告会

作者：刘峰薛璐璐王宏炜陈红袁琳苏州大学材料与化学化工学部

金纳米粒子-蛋白质复合物对蛋白质生物活性的调节具有十分重要的作用。以往运用"tailor-made surfaces"的方法以及温度响应性的纳米粒子系统对金纳米粒子-蛋白质复合物活性的调节具有一定的局限性,特别是蛋白质活性调控范围小等问题。因... 详细信息

金纳米粒子-蛋白质复合物对蛋白质生物活性的调节具有十分重要的作用。以往运用"tailor-made surfaces"的方法以及温度响应性的纳米粒子系统对金纳米粒子-蛋白质复合物活性的调节具有一定的局限性,特别是蛋白质活性调控范围小等问题。因此,在本研究中,我们将金纳米粒子表面共修饰无机焦磷酸水解酶（PPase）和聚甲基丙烯酸（PMAA）,构建Au NP-PPase-PMAA复合物。并利用聚甲基丙烯酸N,N-二甲基氨基乙酯（p DMAEMA）,通过调节溶液pH值调控p DMAEMA的电荷量,达到对复合物生物活性的控制。结果显示,AuN P-PPase-PMAA复合物与pD MAEMA作用后,与纯PPase相比,当溶液pH值为7.0时,复合物的相对活性低于10%;当溶液pH值为9.0时,复合物的相对活性可达到92.4%。该研究结果表明,pH响应性的金纳米粒子-蛋白质复合物能通过改变溶液pH值达到"开关式"调控蛋白质活性的效果。其在生物医用材料研究领域,如生物检测、酶工程以及可控释放等方面都具有很好的应用潜力。

关键词： pH响应性聚合物蛋白质活性金纳米粒子无机焦磷酸水解酶

来源： cnki会议评论

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人CXCL4蛋白原核表达与纯化

中国生物工程杂志 2016年第1期36卷 7-13页

作者：周亮叶浩周瓅关文李京敬郜尽韩伟俞雁上海交通大学农业与生物学院上海市兽医生物技术重点实验室上海200240 上海交通大学药学院再生组学课题组上海200240

CXCL4又名血小板因子4(PF4),属于CXC趋化因子亚家族,能够广谱的作用于多种细胞,在炎症,凝血等众多生理及病理反应中发挥重要作用。将CXCL4全长基因构建到原核表达载体p ET43.1a(+),利用大肠杆菌系统表达,继而纯化获得高纯度的目的蛋白... 详细信息

CXCL4又名血小板因子4(PF4),属于CXC趋化因子亚家族,能够广谱的作用于多种细胞,在炎症,凝血等众多生理及病理反应中发挥重要作用。将CXCL4全长基因构建到原核表达载体p ET43.1a(+),利用大肠杆菌系统表达,继而纯化获得高纯度的目的蛋白。实验表明重组人CXCL4蛋白可以有效抑制人肾癌细胞增殖,具有生物学活性。重组人CXCL4原核表达与纯化方法的建立将有助于其生物学结构与功能的研究,并且对趋化因子家族其它蛋白质的表达与纯化具有参考价值。

关键词： CXCL4 原核表达纯化蛋白质活性

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新城疫病毒HN蛋白的酵母表达及其活性鉴定

河南农业科学 2020年第3期49卷 145-150页

作者：李旭锋王垚金前跃周稳柴永笑陈晓丁培阳张改平河南农业大学牧医工程学院河南郑州450002 河南省农业科学院动物免疫学重点实验室河南郑州450002 江苏高校动物重要疾病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009 西北农林科技大学动物医学院陕西杨凌712100

为了制备新城疫病毒(NDV)HN蛋白并研究其免疫原性,将优化的HN基因胞外区插入毕赤酵母表达载体pPICZαA中,构建毕赤酵母表达载体pPICZαA-HN,并将其电转入毕赤酵母X-33感受态中,经PCR鉴定得到阳性转化子,甲醇诱导表达后,经SDS-PAGE和West... 详细信息

为了制备新城疫病毒(NDV)HN蛋白并研究其免疫原性,将优化的HN基因胞外区插入毕赤酵母表达载体pPICZαA中,构建毕赤酵母表达载体pPICZαA-HN,并将其电转入毕赤酵母X-33感受态中,经PCR鉴定得到阳性转化子,甲醇诱导表达后,经SDS-PAGE和Western blot鉴定筛选出目的蛋白表达菌株;通过对诱导剂含量、诱导时间、培养基初始pH值和诱导温度进行优化,研究最佳表达条件;采用镍柱亲和层析对目的蛋白进行纯化,并用SDS-PAGE、Western blot和间接ELISA对目的蛋白进行鉴定;利用去糖基化酶PNGase F对目的蛋白进行处理,验证其糖基化修饰程度.结果显示,HN重组蛋白在毕赤酵母中成功表达,且在28℃ 条件下,培养基初始pH值为7.0,用0.5%甲醇诱导5 d,蛋白质表达量最高;通过镍柱亲和层析可获得纯度高于90%的重组蛋白;间接ELISA结果表明,重组蛋白活性良好;去糖基化试验验证了重组蛋白存在糖基化修饰.综上,利用毕赤酵母X-33成功表达了HN蛋白,且纯化产物纯度较高、活性良好,具有糖基化修饰.

关键词：新城疫病毒 HN蛋白毕赤酵母蛋白质纯化蛋白质活性

OsLEA5c在大肠杆菌中的表达、纯化及对蛋白质的保护效应研究

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河南农业科学 2015年第12期44卷 11-14页

作者：胡廷章陈再刚秦娟黄小云重庆三峡学院生命科学与工程学院重庆404100

为了研究OsLEA5c蛋白对其他蛋白的保护效应,在大肠杆菌DL21中异源表达OsLEA5c蛋白,采用HiTrap^(TM) chelating HP层析柱纯化OsLEA5c蛋白。纯化的OsLEA5c蛋白用于高温、脱水和冻融胁迫下对乳酸脱氢酶的保护效应研究。结果表明,在PBS缓冲... 详细信息

为了研究OsLEA5c蛋白对其他蛋白的保护效应,在大肠杆菌DL21中异源表达OsLEA5c蛋白,采用HiTrap^(TM) chelating HP层析柱纯化OsLEA5c蛋白。纯化的OsLEA5c蛋白用于高温、脱水和冻融胁迫下对乳酸脱氢酶的保护效应研究。结果表明,在PBS缓冲体系中,50℃处理10、20、30 min后,乳酸脱氢酶的活性分别残留43.20%、24.53%、17.55%;而按1∶1的质量比加入纯化的OsLEA5c蛋白后,乳酸脱氢酶活性分别保留85.77%、74.24%、65.27%。干燥脱水5 h后,乳酸脱氢酶活性仅保留2.55%~4.19%;按2∶1、5∶1和10∶1的质量比加入OsLEA5c蛋白,乳酸脱氢酶活性分别保留17.59%、24.73%、36.39%。反复冻融5次,乳酸脱氢酶活性残留9.41%~12.14%;而按2∶1、5∶1和10∶1的质量比加入纯化的OsLEA5c蛋白,乳酸脱氢酶活性分别保留28.09%、69.44%、95.16%。表明OsLEA5c蛋白对其他蛋白质具有保护作用,能减少高温、脱水和冻融胁迫对蛋白质的损伤。

关键词：胚胎发育后期丰富蛋白 OsLEA5c蛋白乳酸脱氢酶蛋白质活性

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功能化金纳米粒子在生物医药方面的应用

功能化金纳米粒子在生物医药方面的应用

作者：李镇华苏州大学

学位级别：硕士

金纳米粒子(AuNP)由于其独特的氧化还原性能、表面等离子体性能以及表面拉曼增强性能等被广泛应用于疾病监测、疾病治疗、生物成像以及生物传感等领域。而这些功能的发挥需要将AuNP与不同生物分子相结合,从而实现不同的生物学功能。本... 详细信息

金纳米粒子(AuNP)由于其独特的氧化还原性能、表面等离子体性能以及表面拉曼增强性能等被广泛应用于疾病监测、疾病治疗、生物成像以及生物传感等领域。而这些功能的发挥需要将AuNP与不同生物分子相结合,从而实现不同的生物学功能。本论文的主要工作是构建功能性的AuNP复合物,实现其在生物医学领域不同的功能,包括:调控蛋白质活性,表面拉曼增强散射实现疾病早期检测,以及靶向基因转染实现疾病治疗。具体研究内容如下:1.利用可逆加成-断裂链转移聚合(RAFT)合成 pH 响应性聚合物聚甲基丙烯酸N,N-二甲氨基乙酯(PDMAEMA)以及聚甲基丙烯酸(PMAA),乙醇胺还原端基形成一端为巯基的聚合物,随后利用Au-S键自组装,将PDMAEMA接枝到金纳米沉积膜表面,然后将半胱氨酸突变的无机焦磷酸酶(Escherichia coli inorganic pyrophosphatase,PPase)与PMAA按一定比例共接枝到AuNP表面,形成三元复合物。研究不同 pH 条件下金纳米沉积膜表面对功能化金纳米粒子的吸附作用,发现其吸附的最适 pH 在7.0,而释放的最适 pH 在10.0。同时,探究了金纳米沉积膜粗糙度对其吸附活性的影响。由于 pH 响应性聚合物自身的性质会随着外界 pH 的变化而发生可逆变化,利用这种可逆变化,能够在 pH 循环条件下控制纳米粒子复合物在材料表面的吸附与释放,实现表面活性的可控,以及材料的循环利用。最后,通过物理吸附的方式在AuNP表面共接枝辣根过氧化物酶(HRP)以及PMAA,将两种粒子依次吸附与共吸附结果表明,两种纳米粒子复合物既能够依次发挥作用,也可以共同吸附发挥作用并完成释放。这种利用聚合物与聚合物之间的静电相互作用实现表面蛋白质吸附释放的功能表面,打破了利用蛋白质与聚合物之间相互作用时,依赖蛋白质等电点的限制,拓宽了其应用范围。该可循环使用的多功能生物活性表面在生物载药、生物检测、分子固定等领域具有显著的潜在应用价值。2.功能化的AuNP在疾病检测方面具有诸多应用,其中,表面拉曼增强散射基于窄的谱带宽度,不受水的影响,不易发生光漂白等优势,发展了SERS标记免疫技术。目前,在这方面的研究重点主要集中在固相基底的制备以及阻止固相基底非特异性吸附两方面。在我们的工作中,利用修饰在GNPL上的抗体与修饰在AuNP上的抗体通过抗原结合形成“固相抗体-待测抗原-标记抗体”夹心复合物。利用这种“三明治”模型进行前列腺抗原的检测,以实现前列腺癌症的早期治疗。实验结果表明,表面修饰后GNPL具有超亲水性能,能够有效阻止非特异性吸附。并且,系统研究了不同的粗糙度对于SERS信号增强的影响,同时,在不同抗原浓度下,检测信号强度,找到抗原与信号强度的对应关系。结果表明,这种以金膜为固相基底的SERS标记免疫检测手段,能够实现对前列腺特异性抗原(PSA)特异性抗原的检测,由于其制备简单、抗非特异性吸附等优势,在SERS标记免疫检测方面具有巨大的应用潜力。3.通过在聚乙烯亚胺(PEI)骨架上修饰癌细胞靶向分子叶酸(folate,FA),合成了两种聚合物包裹的AuNP。分别以PEI与PEI-FA为还原剂与稳定剂,合成PEI包裹的金纳米粒子(PEI-AuNP)以及PEI-FA包裹的金纳米粒子(PEI-FA-AuNP)。详细研究了两种AuNP对于DNA的包裹能力以及在不同N/P下的转染效率与转染细胞毒性。结果表明,由于叶酸中游离的羧基,使得PEI-FA-AuNP的转染能力下降,因此,通过将两种纳米粒子混合,利用PEI-AuNP对DNA的包裹能力的同时,发挥PEI-FA-AuNP的靶向转染能力。实验证明,两种纳米粒子在5/5比例下时,具有最高的转染效率,同时,显示出很好的靶向转染能力。并且,利用DNA染色技术,证明这种转染体系能够很好进行细胞核转染,这种高效低毒性的转染体系有望在癌症治疗方面有重大应用。综上所述,通过将金纳米粒与不同的生物分子相结合,制备功能化的AuNP,能够实现多种生物学功能。AuNP作为良好的生物分子载体,能够负载蛋白质,实现蛋白质活性的调节;通过与标记分子有效结合,实现SERS标记免疫检测;以及与DNA复合,负载其进入细胞,实现靶向基因转染,达到癌症治疗的目的。随着纳米技术的发展,AuNP的研究不断深入,其未来在生物医学领域必将扮演更加重要的角色,在疾病诊断治疗、生物传感等多个领域去的更多进展。

关键词：功能化金纳米粒子蛋白质活性靶向基因转染表面拉曼增强散射

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动态蛋白质复合物挖掘与保守复合物进化研究

动态蛋白质复合物挖掘与保守复合物进化研究

作者：易丽华中师范大学

学位级别：硕士

蛋白质复合物由网络中多个相互连接紧密的蛋白质形成,执行特定的生物功能。动态蛋白质相互作用(PPI, Protein-Protein Interaction)网络在一定程度上能够反映真实世界PPI的动态过程,有利于揭示疾病的形成及发展过程。比较分析表明PPI网... 详细信息

蛋白质复合物由网络中多个相互连接紧密的蛋白质形成,执行特定的生物功能。动态蛋白质相互作用(PPI, Protein-Protein Interaction)网络在一定程度上能够反映真实世界PPI的动态过程,有利于揭示疾病的形成及发展过程。比较分析表明PPI网络往往是保守的,且同源组中保留着物种间的镜像功能。动态蛋白质复合物的挖掘与物种间蛋白质复合物的保守和特异组分具有极其重要的研究意义。目前大多数研究者构建的动态PPI网络和复合物挖掘算法有效性还有待提高,复合物的动态特性也往往被忽略。本文开展基于时序基因表达数据的动态蛋白质网络构建、动态复合物挖掘以及跨物种复合物保守和特异组分分析的研究,主要研究工作和创新包括:第一,设计基于基因表达值偏离程度的蛋白质活性识别方法,并由此构建时间演变的动态蛋白质相互作用网络(TEPIN,Time-Evolving Protein Interaction Network)。由于各个蛋白质之间相互影响程度不同,本文提出基于连接亲和度和基因共表达的PPI网络加权方法,以此量化各个蛋白质之间相互作用的强弱程度。为了验证TEPIN及其加权方法的有效性,本文采用三个经典的算法分别从TEPIN及现有的经典动态网络中挖掘蛋白质复合物。实验结果表明:各算法在TEPIN上的特异性、敏感度、综合评分、匹配程度和功能富集性等方面的性能都比其余网络明显更优越;此外,网络的加权可以较好地反映蛋白质相互作用网络中的生物属性。第二,基于动态的蛋白质相互作用网络和蛋白质复合物本身的拓扑属性和生物特征,本文提出基于动态核依附的蛋白质复合物挖掘算法(DCA, Dynamic Core-Attachment)。 DCA 算法从动态蛋白质相互网络中捕获复合物中具有动态性的核依附特征,将动态时序特性融入蛋白质复合物的挖掘。实验结果表明:DCA算法在准确率、hF-measure、功能富集性分析等多个评价指标上明显优于已有的TS-OCD等九个经典算法,显著提高了蛋白质复合物挖掘的准确率及生物意义。第三,通过对比CAMSE算法和经典的PPI网络聚类算法挖掘的跨物种保守复合物与物种本身的复合物,本文研究在进化过程中保守复合物在老鼠、人类和果蝇三个物种上新增组分的功能富集性。实验结果表明挖掘出的特异组分显著富集特殊的生物功能,并确实在物种内部发挥着重要作用,因此有助于在蛋白质水平上研究物种的进化机理。

关键词：动态蛋白质相互作用网络蛋白质活性基因表达动态蛋白质复合物保守蛋白质复合物物种进化

GSNO上调人血管内皮细胞系***926 PDK1和LDHA mRNA的表达

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基础医学与临床 2020年第3期40卷 392-394页

作者：严洁萍张丽玉浙江省人民医院杭州医学院附属人民医院药学部浙江杭州310014 浙江大学城市学院药学院浙江杭州310015

S-亚硝基谷胱甘肽(S-nitrosoglutathione,GSNO)是机体内源性S-硫醇,具有影响蛋白质活性、稳定性及核质分布的作用,参与血管性疾病发生[1]。在大鼠心肌缺血损伤模型中,GSNO可通过修饰三重基序蛋白TRIM72减轻缺血引起的心脏损伤和减少梗... 详细信息

S-亚硝基谷胱甘肽(S-nitrosoglutathione,GSNO)是机体内源性S-硫醇,具有影响蛋白质活性、稳定性及核质分布的作用,参与血管性疾病发生[1]。在大鼠心肌缺血损伤模型中,GSNO可通过修饰三重基序蛋白TRIM72减轻缺血引起的心脏损伤和减少梗塞面积。

关键词：梗塞面积心脏损伤血管性疾病大鼠心肌血管内皮细胞系蛋白质活性

高活性外源功能蛋白在丝基材料中的遗传杂交：一项“轻装上阵”的策略

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高活性外源功能蛋白在丝基材料中的遗传杂交：一项“轻装上阵”的...