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广东海洋大学学报 2024年第2期44卷 76-86页

作者：徐德峰廖威龙郑晓娴叶盛权茅林春谢晶邓尚贵广东海洋大学食品科技学院广东湛江524088 广东医科大学海洋医药研究院广东湛江524023 浙江大学生物系统工程与食品科学学院浙江杭州310058 上海海洋大学食品科学学院上海201306 浙江海洋大学食品与药学学院浙江舟山316004

【目的】探明凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)保活流通过程中低温和无水双重胁迫诱导肌肉品质劣变与差异表达蛋白之间的相关性,识别品质劣变的潜在标记蛋白。【方法】在模拟的海水环境中[溶解氧质量浓度为7.2 mg/L,温度控制在(12±1)... 详细信息

【目的】探明凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)保活流通过程中低温和无水双重胁迫诱导肌肉品质劣变与差异表达蛋白之间的相关性,识别品质劣变的潜在标记蛋白。【方法】在模拟的海水环境中[溶解氧质量浓度为7.2 mg/L,温度控制在(12±1)℃]观察对虾在低温和无水胁迫下的生理反应,通过串联质谱标签蛋白质组学方法,分析环境胁迫导致的肝胰腺蛋白质组显著差异性变化,并将其与肌肉品质进行相关性分析。【结果】与正常对照组相比,低温组和低温+无水组分别鉴定了33和44个显著差异蛋白质(DEPs),这些蛋白质大多在溶酶体、糖酵解或糖异生、黏附等通路显著富集(P蛋白酶-1、二肽基肽酶显著上调(P蛋白、凝溶胶蛋白、层黏连蛋白、内源性蛋白酶和代谢酶表达水平显著相关。【结论】本研究初次探明肝胰腺DEPs与肌肉品质间的内在联系,识别的典型DEPs可作为品质劣变的潜在标志蛋白,为监测无水运输期间凡纳滨对虾肌肉品质劣变提供分子靶标。

关键词：虾低温暴露无水保活品质劣变蛋白组组学蛋白标志物

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蛋白质组学方法研究甘露糖对小麦（Triticum aestivum L.）Cd胁迫的缓解效应

蛋白质组学方法研究甘露糖对小麦（Triticum aestivum L.）Cd胁迫...

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作者：黄维南京农业大学

学位级别：硕士

人类社会及自然活动使的重金属Cd更多的暴露在人类活动范围,导致广泛而严重的耕地Cd污染。Cd进而被植物吸收积累,影响植物生长发育,粮食蔬菜作物也在受害者之列,还影响其产量和营养品质,通过食物链和食物网进入人体,损害人体健康。有研... 详细信息

人类社会及自然活动使的重金属Cd更多的暴露在人类活动范围,导致广泛而严重的耕地Cd污染。Cd进而被植物吸收积累,影响植物生长发育,粮食蔬菜作物也在受害者之列,还影响其产量和营养品质,通过食物链和食物网进入人体,损害人体健康。有研究报告细胞壁半纤维素能使植物在胞外固定更多Cd,甘露糖及所形成的聚糖是植物细胞壁半纤维素的成分之一。还有研究表明甘露糖能缓解小白菜和拟南芥所受到的Cd胁迫,但是甘露糖缓解小麦所受到的Cd胁迫的机制并不清楚,本文采用iTRAQ蛋白质组学等方法,探究叶面喷施甘露糖对小麦Cd胁迫的缓解作用及其机制,确定甘露糖缓解Cd胁迫的根部关键蛋白质,主要结果如下:1、水培实验中,叶面喷施160μM甘露糖促进小麦生长,提高Cd胁迫下小麦地下部分生物量,降低小麦地上部分的Cd含量,缓解Cd对小麦根系造成的胁迫和减少向地上部的转运。2、甘露糖促进小麦根的伸长,增加小麦根部的Cd含量,减少Cd向地上的转移,改善地上的Cd毒害现象,改善小麦叶片的失绿症状。从小麦地下部分来看,甘露糖改变小麦根的形态,提高细胞壁的半纤维素含量,使Cd更多的被固定胞外区域,减少游离Cd离子向地上运输。3、甘露糖改善地上部分叶片失绿症状和一定程度恢复光合作用能力,甘露糖缓解Cd对小麦光合作用的抑制是间接通过半纤维素固定更多Cd,使得向上运输的游离Cd离子减少,进而缓解了 Cd对叶片的损害实现的。4、在对Cd胁迫小麦喷施甘露糖的根系iTRAQ蛋白质组学试验中,GO注释将从所鉴定到的13118个蛋白中得到的222个差异丰度蛋白(DEP)功能分为生物过程(单一生物代谢过程,分子代谢过程,氧化还原过程等)、分子功能(氧化还原酶活性、血红素结合以及催化活性等)和细胞组分(细胞质、细胞外区域等)三类,KEGG通路富集分析发现,DEPs较多通路为次生代谢产物的生物合成、糖酵解/糖异生、谷胱甘肽代谢、苯丙烷生物合成等,将DEPs富集到的通路进一步分类为8个:1)植物激素信号转导(4);2)脂肪酸代谢(8);3)矿质营养同化(19):4)细胞壁相关(3);5)氧化还原过程(8);6)次级代谢过程(15);7)糖酵解/糖异生和糖基化(1 1);8)转运(2)。对8个功能分类分析发现,Cd胁迫下喷施甘露糖的小麦根组织的糖酵解/糖异生、次级代谢过程、矿质营养同化、氧化还原过程、植物激素信号转导都发生显著变化。5、对8个功能分类的蛋白质相关基因的实时荧光定量分析发现:甘露糖上调GTs表达增加半纤维素的含量;增强生长素生物合成相关基因(YUCCA、ARF、AUX1)和抑制生长素氧化酶基因(UGT),提高Cd胁迫下生长素的含量,进而促进根伸长;提高Glu和CAD1的表达降低根的木质化;通过增加Prx135和GST表达实现的增强有毒物质清除能力和增强抗氧化能力;提高GLN1-2表达增加可溶性蛋白含量,进而通过渗透调节物质的浓度和成分。而在KEGG分析注释的功能分类中Prx135和CAD1属次级代谢过程,GLN1-2属于矿质营养同化,Taxi-Ⅳ和PEM属于细胞壁相关,GST属于氧化还原过程,Glu的主要功能分类属于糖酵解/糖异生和糖基化,而YUCCA、ARF、AUX1和UGT属于植物激素信号转导。8个功能分类中的1)和7)两个功能途径的基因和蛋白参与到甘露糖缓解Cd胁迫的内部机制发挥重要作用。6、在盆栽实验中,检测叶面喷施160μM甘露糖的效果,得到能降低最多小麦籽粒Cd含量的最佳喷施时期是灌浆期,最佳喷施天数是5天。综上所述表明,叶面喷施甘露糖通过影响植物激素信号转导功能途径,增加Cd胁迫造成的小麦根中生长素含量减少,促进小麦地下部分的生长,增加根长;同时甘露糖增加了糖基转移酶蛋白,和上调GTs的表达增加小麦根细胞壁半纤维素的含量,Cd更多被固定在细胞壁中,同时减少Cd向小麦茎叶的运输;此外甘露糖上调Glu和CAD1的表达和所编码的蛋白,减轻小麦根的木质化程度,上调Prx135和GST的表达和所编码蛋白,增强抗氧化和有毒物质清除的能力,减轻Cd胁迫诱导的氧化损伤。盆栽实验中检测叶面喷施甘露糖降低小麦籽粒Cd含量的最佳时期为灌浆期喷施5天。

关键词： Cd胁迫甘露糖小麦叶面喷施蛋白组组学

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基于非标记蛋白质组学不同淋巴结状态乳腺癌预后的候选血浆生物标志物筛选

基于非标记蛋白质组学不同淋巴结状态乳腺癌预后的候选血浆生物标...

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作者：赵伟博江南大学

学位级别：硕士

目的:淋巴结状态是浸润性乳腺癌总体生存的重要预测因子。然而,仅在约一半的HER2阳性患者中检测到淋巴结受累。由于淋巴结受累的患者预后较差且复发风险较高因此我们拟通过蛋白质组学的方法探寻HER2阳性浸润性乳腺癌小肿瘤淋巴结转移相... 详细信息

目的:淋巴结状态是浸润性乳腺癌总体生存的重要预测因子。然而,仅在约一半的HER2阳性患者中检测到淋巴结受累。由于淋巴结受累的患者预后较差且复发风险较高因此我们拟通过蛋白质组学的方法探寻HER2阳性浸润性乳腺癌小肿瘤淋巴结转移相关的蛋白标志物。方法:应用非标记定量蛋白质组方法来构建10名HER2阳性小肿瘤(蛋白质组。通过将不同样品的蛋白质肽段化,通过独特肽段鉴定蛋白质。对比人类血浆深层蛋白质数据库及FDA认证蛋白质,同时进行显著差异蛋白互作网络分析、GO、KEGG分析。最后Western bloting验证差异蛋白。结果:筛选出388种差异蛋白质,进一步按照差异倍数log Fold Change>1.5,p蛋白质。蛋白互作网路分析显示23种蛋白质参与,其中有15个蛋白质在淋巴结转移数目升高样本中表达升高,8个蛋白质表达降低,并且这些蛋白质与免疫调节、补体激活、乳腺疾病、癌症通路以及淋巴结形态、淋巴结转移相关。进行GO分析、KEGG分析显示,显著差异蛋白主要与补体激活、免疫激活、酶的活性、细胞内外交换方面的功能相关。通过Western bloting验证表示FBLN5、RARB表达中淋巴结转移组均高于未转移组,WB结果与蛋白质组实验结果一致。结论:经Western bloting验证蛋白质组学实验结果具有可信性。HER2阳性乳腺癌小肿瘤淋巴结转移与免疫调节及补体途径激活有相关性。FBLN5对乳腺癌细胞的侵袭、增殖和转移产生影响。PLG/PLA系统较为复杂,PLG在HER2阳性乳腺癌小肿瘤淋巴结转移的作用需要在PLG/PLA系统中进一步研究。RARB与淋巴结形态、肿瘤通路、免疫调节、乳腺疾病均有相关性。上述蛋白应该与现有检测的手段结合,进一步大样本、多中心实验验证其作为淋巴结转移预测指标的可行性。

关键词：蛋白组组学乳腺癌淋巴结转移血清肿瘤标志物

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