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Tyrphostins对大鼠肝酪蛋白激酶Ⅱ活性的影响(英文)

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中国药理学报 1996年第4期17卷 353-356页

作者：黄才康铁邦梁念慈广东医学院医用生化研究所

目的:研究Tyrphostins(AG123,AG1394,AG114,AG1109,AG555)对酪蛋白激酶Ⅱ(CKⅡ)活性的影响。方法:依次采用DEAE-纤维素和肝素-Sepharose层析将大鼠肝CKⅡ纯化了104倍,通过将去磷酸化的酪蛋白和[γ-^(32)P)ATP与CKⅡ保温的方法测定CKⅡ的活性。结果:AG213对CKⅡ有强烈的抑制作用(IC_(50)44.7μmol·L^(-1)[41.5μmol·L^(-1),47.9μmol·L^(-1)]),AG1394(144μmol·L^(-1))对CKⅡ的抑制率为89％。AG114和AG1109对CKⅡ也有明显的抑制作用,而AG555对CKⅡ的活性没有影响。结论:某些tyrphostins是CKⅡ抑制剂。

关键词： Tyrphostins 酪蛋白类蛋白激酶类肝

Tyrphostin AG1478对重组人蛋白激酶CK2全酶的抑制作用及其动力学分析(英文)

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Acta Pharmacologica Sinica 2002年第6期23卷 78-83页

作者：刘新光梁念慈中国 524023 广东医学院生物化学与分子生物学研究所湛江

目的:观察Tyrphostin AG1478[4-(3-氯苯胺基)-6,7-二甲氧喹唑啉]对重组人蛋白激酶CK2全酶的直接作用及其酶动力学机制.方法:在体外等摩尔数混合重组蛋白激酶CK2α和β亚基构成CK2全酶,在不同条件下测定CK2的活性.CK2活性通过测定转移到... 详细信息

目的:观察Tyrphostin AG1478[4-(3-氯苯胺基)-6,7-二甲氧喹唑啉]对重组人蛋白激酶CK2全酶的直接作用及其酶动力学机制.方法:在体外等摩尔数混合重组蛋白激酶CK2α和β亚基构成CK2全酶,在不同条件下测定CK2的活性.CK2活性通过测定转移到CK2底物上的[γ-32P]ATP或[γ-32P]GTP的32P放射活度来检测.结果:重组人CK2是一种Ca2+、[KG*2]cAMP和cGMP等第二信使非依赖性蛋白激酶,与天然CK2的性质一致.AG1478对重组人CK2全酶具有很强的抑制作用,IC50为25.9μmol/L,抑制作用接近于已知的CK2抑制剂N-(2-氨乙基)-5-氯萘-1-硫胺(A3),稍小于5,6-二氯-1-β-呋喃糖苯并咪唑(DRB).AG1478对重组人CK2的动力学研究表明:它与GTP和酪蛋白均呈竞争性抑制作用,是一种双底物抑制剂.结论:AG1478不仅是高效特异的表皮生长因子受体酪氨酸蛋白激酶的抑制剂,而且也是一种新型有效的蛋白激酶CK2抑制剂.重组人蛋白激酶CK2可作为一种较为简便的筛选和开发有效CK2抑制剂的分子靶点.

关键词：酪蛋白类蛋白激酶类重组蛋白质类全酶类 tyrphostins 动力学

磷脂酰肌醇3激酶／蛋白激酶B通路在电烧伤大鼠血清诱导单核-内皮细胞黏附中的作用

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中华烧伤杂志 2014年第3期30卷 237-242页

作者：阮琼芳赵超莉叶子青张卫东谢琼慧谢卫国武汉大学同仁医院暨武汉市第三医院烧伤研究所 430060

目的观察磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B（PI3 K/Akt）通路在电烧伤大鼠血清诱导的单核细胞中的变化,探讨其在单核细胞与血管内皮细胞黏附中的作用. 方法取64只清洁级SD大鼠制作电烧伤模型,制备电烧伤大鼠血清;取24只大鼠不作处理,制备正... 详细信息

目的观察磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B（PI3 K/Akt）通路在电烧伤大鼠血清诱导的单核细胞中的变化,探讨其在单核细胞与血管内皮细胞黏附中的作用. 方法取64只清洁级SD大鼠制作电烧伤模型,制备电烧伤大鼠血清;取24只大鼠不作处理,制备正常大鼠血清.（1）常规培养人单核细胞株THP-1细胞,按照随机数字表法将对数生长期细胞分为正常血清组（将细胞重新悬浮于含体积分数20％正常大鼠血清的RPMI 1640培养液中）和烧伤血清组（将细胞重新悬浮于含体积分数20％电烧伤大鼠血清的RPMI 1640培养液中）,每组设6个复孔.正常血清组于培养24 h,烧伤血清组于培养3、6、24 h,观察THP-1细胞形态,双抗体夹心ELISA法测定2组细胞上清液中TNF-α含量.2组均于培养3、6、24 h收集细胞,蛋白质印迹法检测Akt活化状态.（2）另取THP-1细胞按照随机数字表法分为4组：正常血清组、烧伤血清组,2组各自培养方法同前;正常血清＋阻断剂组、烧伤血清＋阻断剂组,在正常血清组、烧伤血清组的培养液中加入渥曼青霉素100 nmol/L,余培养方法同前.每组设6个复孔.取培养3、6h的THP-1细胞,加入单层人血管内皮细胞株***926细胞,行单核-内皮细胞黏附检测.对数据行单因素方差分析、LSD-￡检验. 结果（1）正常血清组培养24 h,THP-1细胞呈悬浮生长、形态一致.烧伤血清组培养3h,细胞膜完整,细胞形态不规则;培养6h细胞大小不一,细胞膜与细胞质膨胀;培养24 h细胞膜破裂,细胞死亡.正常血清组培养24 h和烧伤血清组培养3、6、24 h,THP-1细胞上清液中TNF-α含量分别为（38.5±1.4）、（75.1±1.5）、（91.5±1.8）、（117.0±1.4）pg/mL,总体比较差异明显（F=1 415.306,P＜0.01）.烧伤血清组培养3、6、24 h THP-1细胞上清液中TNF-α含量均明显高于正常血清组培养24 h（￡值分别为29.614、42.852、63.485,P值均小于0.01）.烧伤血清组培养3、6、24 h,THP-1细胞中磷酸化蛋白激酶B/Akt比值分别是正常血清组培养同时相点的2.66、3.69、1.17倍.（2）正常血清组、正常血清＋阻断剂组、烧伤血清组、烧伤血清＋阻断剂组培养3、6h,每100倍视野下黏附***926细胞的THP-1细胞数量分别为（231 ±45）、（280 ±47）、（703±169）、（335±85）个,（219±49）、（235±21）、（562±123）、（226±29）个,总体比较均差异明显（F值分别为25.630、18.975,P值均小于0.01）.与正常血清组比较,烧伤血清组黏附***926细胞的THP-1细胞数在培养3、6h均明显增多（￡值分别为6.189、6.601,P值均小于0.01）;烧伤血清＋阻断剂组黏附***926细胞的THP-1细胞数在培养3、6h较烧伤血清组均明显减少（t值分别为6.821、6.465,P值均小于0.01）. 结论电烧伤大鼠血清可诱导单核细胞分泌TNF-α,促进单核-内皮细胞黏附.而阻断PI3K/Akt信号通路,可有效抑制单核-内皮细胞的黏附.

关键词：烧伤,电磷脂酰肌醇3-激酶蛋白激酶类血清单核细胞内皮细胞黏附作用

肼酞嗪对蛋白激酶A和蛋白激酶G的体外抑制作用(英文)

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中国药理学报 1995年第3期16卷 278-280页

作者：孙刚 PhilIip J ROBINSON Now in Department of Neurobiology The Second Military Medical University Shanghai 200433 China Endocrine Unit John Hunter HospitalNewcastleNSW 2310 Australia

目的:研究血管扩张药肼酞嗪和KRN2391对蛋白激酶的直接作用以探讨其作用机制.方法:采用层析纯化的蛋白激酶进行体外活性测定.结果:肼酞嗪可以抑制PKA和PKG的活性(0.01-10 mmol·L^(-1)),其IC_(50)分别为1.2和2.5 mmol·L^(-1),而对PKC... 详细信息

目的:研究血管扩张药肼酞嗪和KRN2391对蛋白激酶的直接作用以探讨其作用机制.方法:采用层析纯化的蛋白激酶进行体外活性测定.结果:肼酞嗪可以抑制PKA和PKG的活性(0.01-10 mmol·L^(-1)),其IC_(50)分别为1.2和2.5 mmol·L^(-1),而对PKC作用很小.KRN2391(1—1000μmol·L^(-1))对PKA,PKG和PKC活性均无明显影响.结论:肼酞嗪对PKA和PKG的直接作用可能是其扩张血管的机制之一.

关键词：肼肽嗪蛋白激酶类体外抑制作用

山萘黄素是一种有效的体外重组人蛋白激酶CK2的抑制剂(英文)

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中国药理学与毒理学杂志 2005年第2期19卷 81-86页

作者：林小聪刘新光陈伟珠陈小文梁念慈广东医学院生物化学与分子生物学研究所广东湛江524023

目的　为了筛选蛋白激酶CK2的抑制剂,观察山萘黄素对重组人蛋白激酶CK2的抑制效果及其酶动力学机制。方法　利用基因工程技术进行克隆、表达和纯化,获得重组人CK2的α′及β亚基在体外等摩尔混合构成CK2全酶,通过测定转移到CK2底物上的[... 详细信息

目的　为了筛选蛋白激酶CK2的抑制剂,观察山萘黄素对重组人蛋白激酶CK2的抑制效果及其酶动力学机制。方法　利用基因工程技术进行克隆、表达和纯化,获得重组人CK2的α′及β亚基在体外等摩尔混合构成CK2全酶,通过测定转移到CK2底物上的[γ32 P]ATP的32 P的放射性活性来检测CK2的活性。向反应体系中加入不同浓度的山萘黄素,观察其对CK2的抑制效果;通过固定酪蛋白浓度为2g·L- 1 ,ATP浓度为1 0 ,2 0 ,4 0和80 μmol·L- 1 或固定ATP的浓度为1 0 μmol·L- 1 ,改变酪蛋白浓度( 1 ,2 ,4和8g·L- 1 ) ,观察其酶动力学机制。结果　山萘黄素能显著抑制重组人蛋白激酶CK2的活性(IC50 =1 .9μmol·L- 1 )。抑制作用强于已知的CK2抑制剂白杨素、桑色素和金雀异黄素。酶动力学分析表明,山萘黄素与ATP(Ki=1 .1 μmol·L- 1 )及酪蛋白(Ki=3 .1 μmol·L- 1 )均呈非竞争性抑制CK2的活性。初步的化合物结构分析表明,2′和3位上的羟基对山萘黄素及芹黄素发挥其抑制效果产生实质性的负面影响。结论　山萘黄素是一种新的体外蛋白激酶CK2的有效抑制剂。黄酮类CK2的抑制剂可能通过不同的位点作用于CK2 。

关键词：酪蛋白类蛋白激酶类重组蛋白质类山萘黄素动力学

子宫内膜癌中磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶通路活化及临床意义

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中华病理学杂志 2011年第12期40卷 799-804页

作者：杨曦董颖张晓明梁英张莹孟轶婷王颖王微农琳李挺廖秦平北京大学第一医院妇产科 100034 北京大学第一医院病理科 100034

目的探讨磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶（ PI3 K/AKT）信号通路的重要组分PTEN、PIK3CA和p-AKT在子宫内膜癌组织中的改变及其预后意义.方法免疫组织化学EnVision二步法检测PTEN、p-AKT、雌激素受体（ER）和孕激素受体在71例子宫内膜癌组... 详细信息

目的探讨磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶（ PI3 K/AKT）信号通路的重要组分PTEN、PIK3CA和p-AKT在子宫内膜癌组织中的改变及其预后意义.方法免疫组织化学EnVision二步法检测PTEN、p-AKT、雌激素受体（ER）和孕激素受体在71例子宫内膜癌组织中的表达,聚合酶链反应测序法分析其中34例PIK3CA基因外显子9和20的突变情况.结果（1）71例子宫内膜癌组织中,子宫内膜样癌（ EEC） 65例,非子宫内膜样癌（NEEC）6例.PTEN失表达率为63.4％（ 45/71）,在EEC中的比例（66.2％,43/65）高于NEEC（ 2/6；P=0.18）.PTEN失表达患者（45例）预后优于PTEN正常表达者（26例；P=0.07）.进一步分组分析显示在ER阴性病例中,PTEN失表达者（12例）的预后优于PTEN正常表达者（7例）,差异有统计学意义（P=0.04）.（2）本组34例中PIK3CA突变率为41.2％（14/34）,突变热点为外显子9的***3CA突变在EEC中的发生比例（44.8％,13/29）高于NEEC（ 1/5；P ＞0.05）.外显子9突变全部见于Ⅰ期EEC病例中,且在高、中分化的EEC中发生率高于低分化肿瘤（P＞0.05）.外显子20突变在早期病例组（14.3％,4/28）的发生率显著低于晚期病例组（4/6；P=0.0l）.（3）p-AKT的阳性率为59.2％（42/71）,在EEC中的阳性率（60.0％,39/65）高于NEEC（3/6；P=0.68）；但高、中分化组EEC的阳性比例（75.0％,21/28；53.6％,15/28）高于低分化组（3/9）,差异有统计学意义（P=0.02）.p-AKT阳性与ER阳性相关（r=0.339,P=0.00）.结论 PI3K/AKT信号通路的关键分子,如PTEN失表达、p-AKT阳性提示预后好.PIK3CA基因外显子9和20的突变对子宫内膜癌的预后影响可能不同.子宫内膜癌中PTEN和p-AKT的功能可能受到ER状态的影响.

关键词：子宫内膜肿瘤 1-磷脂酰肌醇3-激酶蛋白激酶类突变预后

靶向蛋白激酶B1和环氧合酶2短发夹RNA对胃腺癌细胞生长的作用

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中华医学杂志 2009年第32期89卷 2292-2295页

作者：张靖付彦超康春生张庆瑜王涛张洁天津医科大学总医院消化科 300052

目的研究靶向蛋白激酶B1（PKB1／Akt1）和环氧合酶2（COX-2）短发夹RNA（shRNA）腺病毒载体对SGC-7901人胃腺癌细胞生长的作用。方法构建腺病毒载体pGSadeno—Akt1＋COX-2（rAd5-A＋C），体外转染人胃癌细胞株SGC-790／后，噻唑蓝比色... 详细信息

目的研究靶向蛋白激酶B1（PKB1／Akt1）和环氧合酶2（COX-2）短发夹RNA（shRNA）腺病毒载体对SGC-7901人胃腺癌细胞生长的作用。方法构建腺病毒载体pGSadeno—Akt1＋COX-2（rAd5-A＋C），体外转染人胃癌细胞株SGC-790／后，噻唑蓝比色分析法（MTT法）和流式细胞术评价转染后胃癌细胞的增殖活性。裸鼠皮下荷瘤模型进--步观察，Ad5-A＋C对SGC-7901生长的抑制效果，并应用原位末端标记技术检测肿瘤细胞的原位凋亡。结果构建的rAd5-A＋C重组腺病毒载体转染SGC-7901后，胃癌细胞的增殖活性明显被抑制。细胞周期分析显示对照组和空载组在G0／G1期，S期和G2／M期的细胞数占细胞总数分别为49．8％、35．2％、15．0％和50．8％、36．5％、12．7％；而治疗组在G0／G1期、S期和G2／M期的细胞数占细胞总数的68．1％、21．8％和10．1％。裸鼠皮下荷瘤模型显示rAd5-A＋C可抑制肿瘤的生长和诱导细胞的凋亡。结论腺病毒介导的Akt1和COX-2shRNA可抑制人胃癌细胞的生长，这可能为胃癌靶向性联合基因治疗提供了新的策略。

关键词：蛋白激酶类环氧化酶2 胃肿瘤腺病毒载体

丝裂素活化蛋白激酶在高血压大鼠心肌中的表达

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中华医学杂志 1997年第9期77卷 680-682页

作者：王明屹王泰龄刘力生唐朝枢张晶何静雯胡镇祥柯元南中日友好医院南中国医学科学院心血管病研究所阜外医院北京医科大学

研究心肌丝裂素活化蛋白激酶（ＭＡＰＫ）活性及其在细胞中的表达，评价ＭＡＰＫ在高血压心肌重构中的作用。方法对３４和５４周龄组的脑卒中型自发性高血压大鼠及正常血压大鼠进行心肌ＭＡＰＫ活性及其免疫组化定位研究。结果高血压大... 详细信息

研究心肌丝裂素活化蛋白激酶（ＭＡＰＫ）活性及其在细胞中的表达，评价ＭＡＰＫ在高血压心肌重构中的作用。方法对３４和５４周龄组的脑卒中型自发性高血压大鼠及正常血压大鼠进行心肌ＭＡＰＫ活性及其免疫组化定位研究。结果高血压大鼠和正常大鼠的心肌重量与体重比显著增加，心肌出现肥大；心肌ＭＡＰＫ活性３４周龄组增加了１．８１倍，５４周龄组增加了１．４６倍。免疫组化研究显示高血压大鼠心肌内有丰富的ＭＡＰＫ表达，且主要分布于心肌间质细胞。结论心肌ＭＡＰＫ激活可能是传递心肌肥大信息的主要通路。

关键词：高血压蛋白激酶类 MAPK 心肌

G蛋白激酶4γA142V转基因小鼠血压升高的机制探讨

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中华心血管病杂志 2006年第5期34卷 411-414页

作者：曾春雨王铮杨志伟何多芬杨成明 Laureano D.Asico Robin A.Felder Pedro A.Jose 第三军医大学大坪医院心内科心血管病研究室重庆400042 Department of Pediatrics Georgetown University Medical CenterWashingtonDCUSA 中国医学科学院实验动物研究所遗传中心 Department of Pathology University of Virginia Health SciencesVAUSA

目的探讨G蛋白激酶(GRK)4γ变异体A142V转基因小鼠血压升高的原因,以期了解GRK4γ在调控血压中的作用。方法以GRK4γA142V转基因小鼠为研究对象,分别对其血压、肾脏尿钠排泄功能、D1多巴胺受体的表达进行测定;并应用GRK4反义核苷酸技术... 详细信息

目的探讨G蛋白激酶(GRK)4γ变异体A142V转基因小鼠血压升高的原因,以期了解GRK4γ在调控血压中的作用。方法以GRK4γA142V转基因小鼠为研究对象,分别对其血压、肾脏尿钠排泄功能、D1多巴胺受体的表达进行测定;并应用GRK4反义核苷酸技术处理HK-2细胞,研究在GRK4表达受到抑制的情况下D1受体的表达变化。结果与对照小鼠相比,GRK4γA142V转基因小鼠血压明显增高,肾脏D1受体介导的利尿、利钠作用明显下降,伴有肾脏皮质膜D1受体表达降低(0.6±0.2比1.5±0.2,n=3)、磷酸化程度增高[(65±7)DU比(35±7)DU,n=3];反义核苷酸抑制GRK4(1.2±0.1比1.3±0.1比0.6±0.1,n=6)表达后,D1受体的表达量增高(0.7±0.1比0.8±0.1比1.5±0.2,n=6),说明D1受体功能下降是GRK4γA142V转基因小鼠血压升高的原因。结论GRK4γ与高血压的发生关系密切,GRK4γA142V转基因小鼠血压升高与肾脏D1受体功能下降有关。

关键词：高血压蛋白激酶类受体多巴胺小鼠转基因