检索结果-南通市图书馆

检索条件"主题词=蛋白激发子受体"

共 2 条记录，以下是1-10 订阅

全选清除本页清除全部题录导出标记到"检索档案"

详细简洁

排序：

真菌蛋白激发子PeaT1与烟草膜蛋白胡作特性研究

真菌蛋白激发子PeaT1与烟草膜蛋白胡作特性研究

引用

作者：孟繁露中国农业科学院

学位级别：硕士

植物对病原微生物的识别机制已经成为植物免疫领域的研究热点，越来越多的人把目光锁定在寻找激发子的受体上，以期从激发子与植物受体互作的角度更深层次地了解植物免疫防御机制。迄今为止，虽然已经有许多关于激发子受体的报道，但整... 详细信息

植物对病原微生物的识别机制已经成为植物免疫领域的研究热点，越来越多的人把目光锁定在寻找激发子的受体上，以期从激发子与植物受体互作的角度更深层次地了解植物免疫防御机制。迄今为止，虽然已经有许多关于激发子受体的报道，但整体研究进展缓慢。本文在前期研究的基础上，从烟草质膜中分离到一种真菌蛋白激发子PeaT1的互作蛋白，克隆获得互作蛋白编码基因序列并成功得到原核细胞表达的重组蛋白，用Far-Western Blot、免疫共沉淀和双分子荧光互补等多种研究蛋白互作的方法验证了PeaT1与其互作蛋白在植物体内和体外的结合特性，推测该互作蛋白可能是蛋白激发子PeaT1在烟草上的潜在识别受体。本研究为植物对真菌蛋白激发子的识别机制研究提供了理论依据，具体研究结果如下： 1.获得了PeaT1在烟草细胞质膜上的互作蛋白并对其进行了功能分析。利用Far Western Blot方法从烟草膜蛋白双向电泳凝胶中钓取PeaT1的互作蛋白，质谱鉴定结果表明，获得的PeaT1互作蛋白是一个22KD的跨膜多肽(GenBank: CAA65195.1)，属于膜蛋白家族DREPP(developmentalregulated plasma membrane protein)。Blast序列比对分析表明，PeaT1互作蛋白与Ca结合蛋白PCaPs的N端序列有同源性，该蛋白N端序列与磷酸化、Ca变化等信号传导的早期事件密切相关，是拟南芥细胞膜上介导信号传递的重要因子。 2.克隆得到了PeaT1互作蛋白的CDS序列。提取烟草叶片的mRNA并反转录成cDNA，根据PeaT1互作蛋白的编码区序列设计特异性引物，克隆得到全长594bp的CDS序列，该序列编码包含197个氨基酸的蛋白多肽，多肽理论分子量为22kDa.。 3． PeaT1互作蛋白定位在烟草细胞膜上。将克隆得到的PeaT1互作蛋白CDS序列分别插入到含有绿色荧光蛋白GFP标签的瞬时表达载体pGDG和含有红色荧光蛋白RFP标签的瞬时表达载体pGDR中，重组载体分别转化农杆菌LBA4404并注射烟草叶片，激光共聚焦显微镜观察发现，表达蛋白定位于烟草质膜，进一步印证了分离到的PeaT1互作蛋白是一种烟草膜蛋白。 4．建立了PeaT1互作蛋白大肠杆菌表达体系，获得了可溶性表达的烟草膜蛋白。将PeaT1互作蛋白的CDS序列插入不同表达载体，通过筛选得到该互作蛋白的最优表达载体pET-30His。将构建好的重组表达载体转化E. coli Transetta细胞，通过诱导表达条件筛选获得可溶性重组表达蛋白，并将该蛋白命名为PeaT1-BP。利用亲和层析和阴离子交换技术纯化重组膜蛋白，并用SDS-PAGE检测其纯度，考马斯亮蓝染色显示一条带。 5.表达蛋白PeaT1-BP能与PeaT1在体外特异结合。用Far-Western Blot方法检测到表达蛋白PeaT1-BP经变性电泳SDS-PAGE后仍能和表达蛋白PeaT1结合，证明二者在变性条件下可以互作;用免疫共沉淀的方法检测到表达纯化的蛋白PeaT1-BP和PeaT1在生理条件下可以稳定结合。 6.膜蛋白PeaT1-BP与PeaT1在烟草细胞内结合。为了进一步证实PeaT1-BP和PeaT1的相互作用，将二者的CDS序列分别连入双分子荧光标记(BiFC)载体pSCYNE和pSCYCE中，重组载体分别转化农杆菌LBA4404，并利用农杆菌渗入法处理烟草叶片。荧光显微镜观察到烟草细胞膜周围有青色荧光，证明两种蛋白在烟草细胞内瞬时表达并稳定结合。

关键词：蛋白激发子受体膜蛋白蛋白互作表达纯化信号传导

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

蛋白激发子PeaT1互作蛋白的鉴定及功能分析

蛋白激发子PeaT1互作蛋白的鉴定及功能分析

引用

中国植物病理学会2012年学术年会

作者：孟繁露邱德文杨秀芬中国农业科学院植物保护研究所

近年来,植物识别病原微生物的机制已经成为植物免疫领域的研究热点,越来越多的人把目光锁定在寻找植物激发子的受体上,以期从激发子与植物受体互作的角度更深层次的了解植物免疫防御系统。迄今为止,虽然已经有不少关于激发子受体的报道... 详细信息

近年来,植物识别病原微生物的机制已经成为植物免疫领域的研究热点,越来越多的人把目光锁定在寻找植物激发子的受体上,以期从激发子与植物受体互作的角度更深层次的了解植物免疫防御系统。迄今为止,虽然已经有不少关于激发子受体的报道,但整体而言缺乏系统性,研究进展相对缓慢。本文用多种研究蛋白互作的方法从烟草质膜中分离得到真菌蛋白激发子PeaT1的互作蛋白PeaT1-BP,通过对其生理生化特性研究发现二者能在植物体内和体外稳定结合,推测PeaT1-BP是蛋白激发子PeaTl在烟草上的潜在识别受体。用荧光素FITC标记PeaT1并分别与烟草悬浮细胞和原生质体孵育,激光共聚焦显微镜观察到FTTC荧光素标记的PeaT1可与烟草悬浮细胞表面结合;免疫荧光法进一步证明PeaT1可与烟草细胞质膜结合,说明在烟草细胞质膜上有蛋白激发子PeaT1的结合位点。利用Far-Western方法从烟草膜蛋白双向电泳凝胶中钓取到一个跨膜多肽,属于膜蛋白家族DREPP。根据CDS序列设计特异性引物,克隆得到该蛋白编码区全长594bp,由197个氨基酸组成,理论分子量为22kDa,将该蛋白命名为PeaT1-BP。Blast序列比对分析表明,PeaT1-BP与Ca结合蛋白PCaPs的N端序列有高度同源性,该蛋白N端序列与磷酸化、Ca变化等信号传导的早期事件密切相关,是拟南芥细胞膜上介导信号传递的重要因子。为了进一步确定PeaT1-BP互作蛋白的亚细胞定位,将Pea Tl-BP蛋白序列插入到含有绿色荧光蛋白GFP标签的瞬时表达载体pGDG中,重组载体转化脓杆菌LBA4404并注射烟草叶片,激光共聚焦显微镜观察发现,烟草质膜边缘发出绿色荧光,说明表达蛋白定位于质膜,进一步印证了分离的PeaT1-BP是一种烟草膜蛋白。将PeaT1-BP的CDS序列插入表达载体pET-30 Ek/LIC载体中,转化*** Transetta细胞,诱导表达获得可溶表达蛋白。利用亲和层析和阴离子交换技术纯化重组膜蛋白,蛋白纯度达90%以上。用多种基于不同原理的蛋白互作技术对PeaT1与PeaT1-BP进行了体内和体外结合验证。Far-Western和免疫共沉淀两种检测方法均表明PeaT1-BP和PeaT1能在细胞外稳定特异结合。用双分子荧光标记(BiFC)技术进一步验证膜蛋白与PeaTl在烟草细胞内结合。以上研究结果为揭示植物对真菌蛋白激发子的识别机制提供了理论依据。

关键词：蛋白激发子受体膜蛋白蛋白互作表达纯化信号传导

来源： cnki会议评论

在线全文

cnki会议

学校读者我要写书评

暂无评论

全选清除本页清除全部题录导出标记到“检索档案”

共1页 << < 1 > >>

回到顶部

执行限定条件

欢迎您,

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

欢迎您,

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：