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微小RNA-4318靶向调控外被体蛋白复合物亚基β’在前列腺癌迁移、侵袭转移中的作用

中华实验外科杂志 2022年第5期39卷 970-974页

作者：冯岩岩潘海燕万宏源吴升孙健陈雪芬糜远源祝黎洁江南大学无锡医学院 214122 江南大学附属医院泌尿外科无锡214122 江南大学附属医院盆底康复中心无锡214122

目的探讨微小RNA-4318(miR-4318)靶向调控外被体蛋白复合物亚基β’(COPB2)在前列腺癌侵袭转移中的作用机制。方法通过Target Scan Human 7.0数据库预测COPB23’非编码区(3’UTR)可能结合的miRNA,双荧光素酶报告基因验证miR-4318与COPB... 详细信息

目的探讨微小RNA-4318(miR-4318)靶向调控外被体蛋白复合物亚基β’(COPB2)在前列腺癌侵袭转移中的作用机制。方法通过Target Scan Human 7.0数据库预测COPB23’非编码区(3’UTR)可能结合的miRNA,双荧光素酶报告基因验证miR-4318与COPB2的靶向关系。采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白印迹法(Western blot)检测转染mimics及inhibitors后的蛋白及RNA表达量,通过Transwell法检测细胞的侵袭和迁移能力。组间比较采用独立样本t检验。结果Target Scan Human 7.0数据库预测COPB23’UTR区可能结合的miRNAs,结果显示miR-4318结合可能性最大。通过临床15对前列腺癌与癌旁组织中miRNAs的表达量比对,结果发现上述3种miRNAs中只有miR-4318在大部分癌组织中表达(10.18±9.32)低于癌旁组织(21.46±36.19)。双荧光素酶报告结果表明,对比mimic-NC和WT-COPB2共转染比较双荧光素酶相对活性(2.31±0.02),miR-4318和WT-COPB2共转染明显降低DU145细胞的双荧光素酶相对活性(0.38±0.12),差异有统计学意义(t=92.870,P<0.05)。RT-qPCR结果显示,在PC3、DU145细胞中转染miR-4318 mimics后,miR-4318的表达水平(3.94±0.34、2.42±0.33)显著高于mimic-NC组(1.09±0.07、0.97±0.05),差异有统计学意义(t=11.630、6.157,P<0.05);转染miR-4318 inhibitors(0.26±0.02、0.30±0.06)后,miR-4318的表达水平显著低于inhibitor-NC组(0.89±0.10、1.28±0.05),差异有统计学意义(t=8.768、18.550,P<0.05)。Western blot结果表明,在PC3、DU145细胞中miR-4318 mimics组和mimic-NC组表达量分别为(0.12±0.01、0.14±0.01),(0.30±0.02、0.30±0.02),miR-4318 mimics组明显低于NC组,上调miR-4318明显降低了COPB2的表达量,差异有统计学意义(t=14.020、12.310,P<0.05)。miR-4318 inhibitors组(0.35±0.02、0.59±0.04)的表达量与inhibitor-NC组(0.31±0.02、0.29±0.02)比较,差异有统计学意义(t=1.893、2.919,P<0.05)。Transwell实验结果显示,miR-4318 mimics组的PC3、DU145细胞迁移数分别为(19.15±0.98)、(28.60±3.23)个,显著低于mimic-NC组[(31.90±2.54)、(44.77±1.94)个],差异有统计学意义(t=6.630、6.069,P<0.05),上调miR-4318能够抑制PC3、DU145细胞迁移能力。与inhibitor-NC组[(37.14±1.92)、(38.91±2.45)个]比较,miR-4318 inhibitors组的PC3、DU145细胞迁移数[(41.65±0.75)、(53.04±2.80)个]较高,差异有统计学意义(t=3.081、2.900,P<0.05)。miR-4318 mimics组和mimic-NC组的PC3、DU145细胞侵袭数分别为(16.51±1.21)、(19.49±2.29)个和(24.50±2.60)、(25.14±1.53)个,miR-4318 mimics组明显低于mimic-NC组,差异有统计学意义(t=3.391、5.371,P<0.05)。miR-4318 inhibitors组的PC3、DU145细胞侵袭数[(33.80±4.43)、(30.21±1.27)个]显著高于inhibitor-NC组[(24.72±0.10)、(26.29±0.88)个],差异有统计学意义(t=2.282、3.583,P<0.05)。结论miR-4318能够靶向调控COPB2表达,抑制前列腺癌细胞的侵袭和迁移能力。

关键词： DU145细胞靶向调控双荧光素酶报告基因 PC3 微小RNA 前列腺癌蛋白复合物迁移数

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藻胆蛋白复合物的合成及其分子内能量传递

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生物化学与生物物理进展 1997年第5期24卷 435-440页

作者：赵继全赵井泉杨紫萱张建平蒋丽金中国科学院感光化学研究所北京100101

通过偶联剂 3 ( 2 吡啶联巯基 )丙酸N 羟基琥珀亚胺酯 (SPDP)及改变配料比 ,合成了两个R 藻红蛋白 (R PE)与C 藻蓝蛋白 (C PC)的复合物A和B .利用吸收光谱确定了分子内R PE与C PC的摩尔比为 6∶1和 2∶1 .通过荧光光谱 ,观察到能量传... 详细信息

通过偶联剂 3 ( 2 吡啶联巯基 )丙酸N 羟基琥珀亚胺酯 (SPDP)及改变配料比 ,合成了两个R 藻红蛋白 (R PE)与C 藻蓝蛋白 (C PC)的复合物A和B .利用吸收光谱确定了分子内R PE与C PC的摩尔比为 6∶1和 2∶1 .通过荧光光谱 ,观察到能量传递现象 ,并计算出能量传递效率为 63%和88% .证明分子内能量传递效率很高 .二硫苏糖醇 (DTT)还原连接R PE与C PC的二硫桥键后 ,能量传递被阻断 .这一现象进一步证明复合物中存在分子内能量传递 .

关键词：藻胆蛋白蛋白复合物合成能量传递

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肌肉特化锚定蛋白复合物在心肌细胞肥大中的作用

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中华心血管病杂志 2010年第3期38卷 286-288页

作者：侯磊魏毅东胡大一同济大学附属上海市第十人民医院心内科 200072 北京大学人民医院心内科

在高血压病、心肌梗死、瓣膜病、心肌疾病等导致的充血性心力衰竭的患者中，心肌细胞肥大是其共有的特征之一。心肌细胞肥大是对异常生物机械压力的代偿反应。虽然适当的细胞肥大可以对抗升高的心室壁张力，提高心输出量，过度的细胞肥... 详细信息

在高血压病、心肌梗死、瓣膜病、心肌疾病等导致的充血性心力衰竭的患者中，心肌细胞肥大是其共有的特征之一。心肌细胞肥大是对异常生物机械压力的代偿反应。虽然适当的细胞肥大可以对抗升高的心室壁张力，提高心输出量，过度的细胞肥大则会导致心肌去适应性重塑，是心力衰竭（心衰）的重要危险因素。尽管医学技术不断发展，心衰仍是严重影响人们生活质量和寿命的疾病之一。

关键词：心肌细胞肥大蛋白复合物充血性心力衰竭锚定肌肉心肌疾病心室壁张力高血压病

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蛋白复合物与相互作用谱和表达谱的相关性分析

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科学通报 2003年第18期48卷 1944-1948页

作者：蔡伦薛宏卢宏超赵屹朱小蓬卜东波凌伦奖陈润生中国科学院计算技术研究所北京100080 中国科学院生物物理研究所北京100101

蛋白相互作用是指细胞内蛋白-蛋白间的物理相互作用,通过酵母双杂交系统和基于质谱的蛋白吸附沉淀技术,在酵母细胞中获得了大规模的蛋白相互作用数据.收集了文献报道的共2617个酵母蛋白的11855条相互作用.通过分析酵母细胞的大规模基因... 详细信息

蛋白相互作用是指细胞内蛋白-蛋白间的物理相互作用,通过酵母双杂交系统和基于质谱的蛋白吸附沉淀技术,在酵母细胞中获得了大规模的蛋白相互作用数据.收集了文献报道的共2617个酵母蛋白的11855条相互作用.通过分析酵母细胞的大规模基因表达谱数据,获得不同基因间表达的相关性.蛋白复合物数据也可以获得,并能转换成蛋白两两关系数据.综合分析蛋白复合物、蛋白相互作用数据和基因表达数据可以发现三者之间的相关性.结果显示,有相互作用或表达谱相似的蛋白都比随机抽取的蛋白同属一蛋白复合物的几率高;并且,有相互作用且表达谱相似的蛋白同属一蛋白复合物的几率更高.这一研究表明,对现有的大规模蛋白复合物数据、蛋白相互作用数据和基因表达谱数据进行整合、分析,可以揭示它们之间的关联性,并且有助于获得这些数据蕴含的公共信息.这种研究方法对于其他的大规模数据,如蛋白组数据、表达谱数据、蛋白的细胞定位数据和表型数据的综合分析有很好的借鉴意义.

关键词：蛋白复合物细胞相互作用谱表达谱相关性基因

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SDS-蛋白复合物的性质及其液相色谱分离研究

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生物化学与生物物理进展 1992年第3期19卷 194-198页

作者：徐明波姚志建军事医学科学院基础医学研究所北京100850

利用一些常用的蛋白质液相色谱的分离方法,首次系统地研完了SDS-蛋白复合物的性质及其液相色谱分离规律,并对有关的原理进行了探讨。该项研究为膜蛋白及基因工程产生的包涵体蛋白的研究提供了重要的参数。

关键词：液相色谱分离 SDS 蛋白复合物

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光系统Ⅱ反应中心D1/D2/cyt b559蛋白复合物的纳秒时间分辨光谱研究

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科学通报 1997年第12期42卷 1315-1319页

作者：陈建新张红灏叶彤张启元侯建敏杨昆云于振宝匡廷云汤佩松中国科学院化学研究所分子动态及稳态结构国家重点实验室北京100080 中国科学院植物研究所光合作用研究室北京100044

光合作用是地球上最重要的化学反应.揭示光合作用的奥秘,对解决人类面临的能源、粮食、环境保护等问题十分重要.高等植物光系统Ⅱ可分解水,因此对其机理的研究就显得十分重要,而对光系统Ⅱ反应中心机理的研究,有助于人们深入理解光合作... 详细信息

光合作用是地球上最重要的化学反应.揭示光合作用的奥秘,对解决人类面临的能源、粮食、环境保护等问题十分重要.高等植物光系统Ⅱ可分解水,因此对其机理的研究就显得十分重要,而对光系统Ⅱ反应中心机理的研究,有助于人们深入理解光合作用的原初机理.为此,近些年来人们采用各种时间分辨光谱技术对光系统Ⅱ反应中心D1/D2/cyt b559蛋白复合物的电荷分离及复合过程进行了广泛细致的研究.但因此体系衰变组分较多,光谱重叠严重,所以对各成分的归属意见不一.为此,本文采用纳秒时间分辨光谱技术及光谱解叠方法对D1/D2/cyt b559的电荷复合过程进行了研究.

关键词：光系统II 反应中心光合作用蛋白复合物

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大肠杆菌膜蛋白的亚蛋白质组学分析及其膜蛋白相关复合物研究

大肠杆菌膜蛋白的亚蛋白质组学分析及其膜蛋白相关复合物研究

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作者：黄传钟厦门大学

学位级别：硕士

革兰氏阴性细菌的膜蛋白是细胞与外界自然环境相接触的最主要物质,在应对外界环境的变化中起着重要的作用。因此研究细菌膜蛋白尤其是外膜蛋白的组成,具有深远的理论和现实意义。而对与膜蛋白相关的复合物的研究则有助于我们更深入地了... 详细信息

革兰氏阴性细菌的膜蛋白是细胞与外界自然环境相接触的最主要物质,在应对外界环境的变化中起着重要的作用。因此研究细菌膜蛋白尤其是外膜蛋白的组成,具有深远的理论和现实意义。而对与膜蛋白相关的复合物的研究则有助于我们更深入地了解膜蛋白质的功能。虽然目前已有对大肠杆菌细胞膜上的寡聚蛋白质进行系统的蛋白质组学鉴定的研究,但是仍没有对其膜蛋白的复合物以及与膜蛋白相关联的外周蛋白进行鉴定的相关报道。本文在对膜蛋白质提纯方法比较的基础上,应用月桂酰肌氨酸钠二步法获得大肠杆菌K12的内膜组分,利用IEF技术建立其分子解剖图谱。在2D电泳图谱上所获得的117个蛋白点中共鉴定出76种蛋白,并结合本实验室已建立的大肠杆菌K12的外膜组分图谱,鉴定出迄今为止最多的31种外膜蛋白质。更重要的是,我们更进一步的研究发现了一些之前未被认识的膜蛋白复合物,其中一种通过western blotting、far-western blotting以及免疫共沉淀等技术证明外膜蛋白OmpW与延胡索酸还原酶形成复合物。该复合物在铁离子限制条件下,发生解离。这些研究使我们对大肠杆菌的外膜有了更深的认识。同时,为了对OmpW所形成的多组分复合物有更深入的认识,我们研究了不同浓度的铁离子螯合剂存在下该复合物的存在情况,以及在铁离子受到限制的培养基中补加氯化铁后培养出来的细菌中OmpW多组分复合物的存在情况,另外还研究了4种不同抗生素诱导下大肠杆菌膜蛋白中该复合物的情况,多项研究结果表明该复合物只受到铁离子的影响,并没有受到抗生素的影响。

关键词：膜蛋白蛋白复合物 OmpW

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觅菜与大豆叶绿素—蛋白复合物的研究

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西南农业大学学报（自然科学版） 1989年第2期11卷 194-201页

作者：张修清阎隆飞马仁懿西南农业大学生物学部北京农业大学生物学院

应用温和的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,从苋菜和大豆类囊体膜中分离出10种叶绿素—蛋白复合物。按迁移率由小到大的顺序,命名为CP1a,CP1b,CP1,LHCP^4,LHCP^5,LHCP^1,LHCP^2,CPa,LHCP^3和CPx。其中,CP1b,LHCP^4,LHCP^5和CPx属于新增加的复合物,而CPx还未见报道。经鉴定表明,CPx可能就是光系统I的捕光叶绿素—蛋白LHC-I。两种植物叶绿素蛋白复合物的类型相似,与大豆相比,苋菜有更多的叶绿素与光系统Ⅰ和光系统Ⅱ反应中心叶绿素蛋白复合物结合,存在于捕光叶绿素a/b—蛋白中的叶绿素相对较少。同时还发现,苋菜捕光叶绿素a/b—蛋白复合物的多肽组成比大豆更复杂。两种植物间相应各复合的光谱性质、P—700含量和氨基酸组成无明显差异。

关键词：苋菜大豆叶绿素蛋白复合物

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杂交水稻及其亲本光合特性的研究　Ⅰ．功能叶片叶绿素含量、叶绿素－蛋白复合物及诱导荧光动力学

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热带亚热带植物学报 1996年第4期4卷 60-65页

作者：郭培国李明启广州师范学院生物系华南农业大学农业生物系

研究了杂交水稻青优１５９和广优四号及其亲本功能叶片的光合速率、叶绿素含量、叶绿素－蛋白复合物及诱导荧光动力学特性．这二个杂交水稻的光合速率分别高于其亲本，其超亲优势分别为１８．７２％和１８．２％，平均优势分别为２９．... 详细信息

研究了杂交水稻青优１５９和广优四号及其亲本功能叶片的光合速率、叶绿素含量、叶绿素－蛋白复合物及诱导荧光动力学特性．这二个杂交水稻的光合速率分别高于其亲本，其超亲优势分别为１８．７２％和１８．２％，平均优势分别为２９．６％和２６．２％．杂交水稻功能叶片的叶绿素－蛋白复合物在６５０ｎｍ和６７５ｎｍ处光密度扫描峰面积具有明显的杂种优势，并与光合速率之间有较密切的正相关关系；叶绿素诱导荧光动力学特征参数Ｆｖ／Ｆｍ和Ｆｖ／Ｆｏ比值超过其高值亲本，具有杂种优势；杂交水稻功能叶片的叶绿素含量没有明显的杂种优势，光合速率与叶绿素含量之间没有明显的相关关系。而杂交水稻功能叶片的叶绿素ａ／ｂ比值均低于其亲本，并且叶绿素ａ／ｂ比值与光合速率呈较为密切负相关．

关键词：水稻杂交水稻光合特性叶绿素蛋白复合物

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大肠埃希氏菌K12胞浆盐调节蛋白和复合物组的研究

大肠埃希氏菌K12胞浆盐调节蛋白和复合物组的研究

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作者：赵萍厦门大学

学位级别：硕士

胞浆蛋白在应对外界环境的变化中起着重要的作用。细菌外部环境的变化很多时候是以渗透压的变化的形式表现出来的。因而,研究细菌在不同渗透压条件下胞浆蛋白表达的差异就显得尤为重要,有助于进一步了解胞浆蛋白的作用机制以及胞浆蛋白... 详细信息

胞浆蛋白在应对外界环境的变化中起着重要的作用。细菌外部环境的变化很多时候是以渗透压的变化的形式表现出来的。因而,研究细菌在不同渗透压条件下胞浆蛋白表达的差异就显得尤为重要,有助于进一步了解胞浆蛋白的作用机制以及胞浆蛋白在整个调控体系中所起的作用。论文以模式生物大肠埃希氏菌K12为研究对象。首先是利用高通量、高分辨率的2-DE技术与高灵敏度的质谱技术联用,鉴定了在不同盐度条件下,大肠埃希氏菌K12差异表达的6种胞浆蛋白。接下来采用蛋白质组学、基因工程技术等研究方法,对上述6种蛋白在不同盐度条件下细菌表达的差异加以确认。更重要的是,本文通过native/SDS-PAGE技术、质谱分析和对数据库的搜索,推测了3个大肠埃希氏菌K12胞浆盐调节蛋白的相关复合物。在接下来的实验中,采用了Western blotting、Far-Western blotting和免疫共沉淀等多种技术,对上述3个蛋白复合物中涉及的蛋白之间的关系作了一系列的研究。确认了Tig与GroL、RpsA,SodB与CysK及Mdh与UxaC的复合物关系。最后利用其高表达菌株和敲除菌株研究了它们对大肠埃希氏菌K12在不同盐度条件下生长的影响。最后,论文采用基因工程技术克隆、表达、纯化了部分大肠埃希氏菌双组分调节系统蛋白,并制备了其抗血清。然后利用Western blotting技术,初步探讨了它们与大肠埃希氏菌K12在不同盐度条件下生长的相关性。发现PhoP、PhoR和RcsF在大肠埃希氏菌K12对不同盐度环境的适应中有一定的相关性。对进一步拓展对大肠埃希氏菌双组分调节系统功能的了解具有一定的意义。

关键词：大肠埃希氏菌K12 盐调节蛋白蛋白复合物

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