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中国预防兽医学报 2013年第3期35卷 189-192,201页

作者：李业南陈振师步志高华荣虹中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为建立稳定共表达乙型脑炎病毒(JEV)完整M前体蛋白(prM)和E蛋白的BHK-21细胞系,本研究在prM蛋白furin蛋白酶剪切位点编码基因中引入突变,将突变后的prM基因克隆于质粒中构建重组表达质粒pCAG-JEV-prM(R89A)E。将重组质粒转染BHK-21细胞... 详细信息

为建立稳定共表达乙型脑炎病毒(JEV)完整M前体蛋白(prM)和E蛋白的BHK-21细胞系,本研究在prM蛋白furin蛋白酶剪切位点编码基因中引入突变,将突变后的prM基因克隆于质粒中构建重组表达质粒pCAG-JEV-prM(R89A)E。将重组质粒转染BHK-21细胞,转染48 h后细胞用含G418的选择性培养基选择培养,进一步经细胞克隆纯化制备表达剪切位点突变的JEV prM-E蛋白的稳定细胞系。经IFA和western blot鉴定表明,该细胞系能表达JEV prM与E蛋白,所表达的prM蛋白未发生剪切;细胞经多次传代后仍能够稳定地共表达prM与E蛋白。该细胞系的建立为研究prM蛋白剪切对JEV粒子形成的影响以及亚单位疫苗的制备奠定了基础。

关键词：流行性乙型脑炎病毒 prM蛋白蛋白剪切细胞系

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约氏疟原虫鸟苷酸环化酶alpha在红细胞内期功能和蛋白结构的初步分析

约氏疟原虫鸟苷酸环化酶alpha在红细胞内期功能和蛋白结构的初步...

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作者：姜峥峥厦门大学

学位级别：硕士

疟原虫是一种属于顶复体亚门,能在人或动物体内生存,通过按蚊叮咬传播的寄生虫。由于其在寄主血液中进行无性增殖而引起的疾病-疟疾,是世界三大传染病之一,每年会造成数十万人的死亡。疟原虫生活史比较复杂,包含无性增殖和有性生殖两种... 详细信息

疟原虫是一种属于顶复体亚门,能在人或动物体内生存,通过按蚊叮咬传播的寄生虫。由于其在寄主血液中进行无性增殖而引起的疾病-疟疾,是世界三大传染病之一,每年会造成数十万人的死亡。疟原虫生活史比较复杂,包含无性增殖和有性生殖两种生殖方式。其在寄主体内主要进行无性增殖,只有当从人或者动物体内被按蚊吸食到中肠时,才会有部分细胞进行有性发育,形成雌雄配子体,并受精成为合子,然后继续在按蚊体内进行无性增殖。作为顶复体亚门的一员,疟原虫的出宿主细胞、入侵和运动等重要生理过程,严格受到cGMP等第二信使的调控。在疟原虫无性期,GCcα蛋白是第二信使cGMP的唯一来源,其有两个保守功能域,分别为P4型ATP酶结构域（P4-type ATPase Domain,ALD）和一个鸟苷酸环化酶催化结构域（Guanylate Cyclase Domain,GCD）。但目前还没有研究能充分地阐释GCα蛋白是如何参与这些过程,并如何受到调控的。本论文以约氏疟原虫17XNL虫株作为模型,运用CRISPR/Cas9基因编辑系统对PyGCα蛋白进行内源加标签和其它修饰,研究GCα蛋白在红细胞内期的功能与作用。首先,我们构建了gcα基因内源双侧加标签虫株（DTS）,分别在N末端加了4Myc短肽多聚标签,在C末端加了6HA短肽多聚标签。在与其它单侧标签虫株一起的WB结果中,我们发现GCα蛋白的N末端和C末端可能发生了剪切。进一步的,我们构建了以linker部分为主体的过表达肽段,来探究剪切是否能在非内源情况下实现。实验结果显示,在疟原虫体内,GCα蛋白存在天然的剪切,且剪切位点在linker部分的N末端。为了确定这个剪切是否对疟原虫红细胞内期来说是必需的,我们又设计了蛋白截短实验,对gcα基因linker处设计了三个不同的删除修饰。最终,gcα基因linker处前50个氨基酸无法被删除,说明这段氨基酸序列对于红细胞内期的约氏疟原虫来说是必需的。我们又对ALD的保守磷酸化位点进行点突变实验,发现720位点的D无法被错义突变,说明ALD的磷酸化位点的氨基酸残基序列,是高度保守的。并且,以DTS虫株出发的co-IP实验证明,虽然ALD与GCD这两个Domain在蛋白水平上是分开的,但它们在剪切后存在互作。本论文的工作主要运用了CRISPR/Cas9基因编辑系统,系统地揭示了约氏疟原虫鸟苷酸环化酶GCα蛋白,在红细胞内期不同于其它顶复体亚门GC蛋白的性状,探究了GCα蛋白行使功能时的机制,为研究疟原虫红细胞内期的发育提供了新思路,并为抗疟药物的研发提供了新的靶点。

关键词：疟疾红细胞内期鸟苷酸环化酶蛋白剪切磷酸化位点

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MPTP对小鼠多巴胺能神经元细胞MN9D凋亡的影响

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郑州大学学报（医学版） 2024年第2期59卷 167-171页

作者：黄潇枫盛灵慧刘希王喆首都医科大学宣武医院国家老年疾病临床医学研究中心北京100053 郑州大学第一附属医院神经内科郑州450052

目的:探讨MPTP对小鼠多巴胺能神经元细胞MN9D凋亡的影响及其可能机制。方法:MN9D细胞分别以0、1μmol/L MPTP处理(对照组和MPTP组),或分别以pcDNA4、pcDNA4-BACE2转染(对照组和BACE2组),采用Western blot法检测BACE2、Cleaved Caspase-3和内源性DSG2蛋白的表达。MN9D细胞分为DSG2组、DSG2+BACE2组和DSG2+BACE2+BACE抑制剂组,分别转染pENTER-DSG2+pcDNA4、pENTER-DSG2+pcDNA4-BACE2以及转染pENTER-DSG2+pcDNA4-BACE2后用1μmol/L的BACE抑制剂处理,采用Western blot法检测DSG2全长以及DSG2各片段的表达。结果:与对照组相比,MPTP组中BACE2及Cleaved Caspase-3表达均上升(P0.05)。结论:MPTP可通过上调BACE2促进MN9D细胞凋亡,其机制可能与BACE2对DSG2的剪切有关;BACE2和DSG2可能参与了帕金森病的发病。

关键词： MPTP BACE2 蛋白剪切 Caspase-3 帕金森病

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牙本质涎磷蛋白的研究进展

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牙体牙髓牙周病学杂志 2013年第9期23卷 602-606页

作者：胡志强朱庆林第四军医大学学员旅七队陕西西安710032 第四军医大学口腔医院陕西西安710032

牙本质涎磷蛋白及其蛋白剪切产物—牙本质涎蛋白和牙本质磷蛋白是在牙本质发育、矿化中起重要作用的非胶原蛋白。关于牙本质涎磷蛋白的结构、功能、表达以及翻译后修饰等均有大量的研究,使之对牙本质涎磷蛋白的认识不断深入。本文就近... 详细信息

牙本质涎磷蛋白及其蛋白剪切产物—牙本质涎蛋白和牙本质磷蛋白是在牙本质发育、矿化中起重要作用的非胶原蛋白。关于牙本质涎磷蛋白的结构、功能、表达以及翻译后修饰等均有大量的研究,使之对牙本质涎磷蛋白的认识不断深入。本文就近年来关于牙本质涎磷蛋白的研究现状作一综述。

关键词：牙本质涎磷蛋白牙本质涎蛋白牙本质磷蛋白翻译后修饰蛋白剪切

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