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细菌鞭毛蛋白免疫佐剂活性作用机制及应用研究进展

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中国预防兽医学报 2020年第8期42卷 850-855页

作者：庞胜美吴文文丁雪燕刘思国王晓钧段强德朱国强扬州大学兽医学院江苏扬州225009 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

鞭毛是位于细菌表面的一种长丝状附属物,由基体部(Basal body)、鞭毛钩(Hook)和鞭毛丝(Fila-ment)3部分组成,其中fliC是鞭毛蛋白编码基因的主要结构成分。鞭毛蛋白是一种重要的病原体相关分子模式(Pathogen-associated molecular patter... 详细信息

鞭毛是位于细菌表面的一种长丝状附属物,由基体部(Basal body)、鞭毛钩(Hook)和鞭毛丝(Fila-ment)3部分组成,其中fliC是鞭毛蛋白编码基因的主要结构成分。鞭毛蛋白是一种重要的病原体相关分子模式(Pathogen-associated molecular patterns,PAMPs),能激活细胞表面Toll样受体5(Toll-like receptor 5,TLR5)[1]和/或细胞溶质NOD样受体蛋白4(NLR family CARD domain-containing protein 4,NL⁃RC4)[2],发挥免疫佐剂活性[3-4]。

关键词：免疫佐剂鞭毛蛋白 Toll样受体5 细胞溶质结构成分细菌鞭毛蛋白免疫 TLR5

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基因免疫和蛋白免疫制备抗P16抗血清

Acta Biochimica et Biophysica Sinica 1998年第4期30卷 35-39页

作者：覃林花黄长晖傅继梁第二军医大学医学分子遗传学军队重点实验室

蛋白免疫是传统的抗体制备法，基因免疫是新型的抗体制备法。为了制备抗Ｐ１６抗血清以及比较基因免疫和蛋白免疫制备抗体，分别以融合蛋白谷胱甘肽Ｓ—转移酶－Ｐ１６（ＧＳＴ－Ｐ１６）和克隆有ｐ１６肿瘤抑制基因相关ｃＤＮＡ的裸露... 详细信息

蛋白免疫是传统的抗体制备法，基因免疫是新型的抗体制备法。为了制备抗Ｐ１６抗血清以及比较基因免疫和蛋白免疫制备抗体，分别以融合蛋白谷胱甘肽Ｓ—转移酶－Ｐ１６（ＧＳＴ－Ｐ１６）和克隆有ｐ１６肿瘤抑制基因相关ｃＤＮＡ的裸露真核表达载体ｐＣＭＶ－ｐ１６经皮内多点注射法接种家兔，制备抗Ｐ１６抗血清，Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法检测到蛋白免疫的抗Ｐ１６抗血清滴度为１∶６２５，明显高于基因免疫制备的抗Ｐ１６抗血清滴度（１∶５）。说明了基因免疫普及于制备抗体前，还需对其特点和加强免疫反应的方法深入研究

关键词：基因免疫蛋白免疫 p16基因

LEF-1协助TCF-1决定蛋白免疫应答中滤泡辅助T细胞的功能研究

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LEF-1协助TCF-1决定蛋白免疫应答中滤泡辅助T细胞的功能研究

作者：张瑜中国人民解放军陆军军医大学

学位级别：硕士

由B细胞介导的体液免疫应答是机体对抗外界抗原入侵的重要手段。目前,绝大部分疫苗都是通过诱导记忆B细胞（Memory B cell）和长寿命浆细胞（Long-lived Plasma Cells）的分化形成来发挥其预防功能。经抗原刺激后形成的记忆B细胞和长寿... 详细信息

由B细胞介导的体液免疫应答是机体对抗外界抗原入侵的重要手段。目前,绝大部分疫苗都是通过诱导记忆B细胞（Memory B cell）和长寿命浆细胞（Long-lived Plasma Cells）的分化形成来发挥其预防功能。经抗原刺激后形成的记忆B细胞和长寿命浆细胞都是由生发中心（Germinal Center,GC）B细胞经克隆增殖、体细胞高频突变、抗体类别转化等过程最终分化形成而来的。滤泡辅助T细胞（Follicular Helper Tcells,Tfh）是CD4T细胞的一个特殊亚群,在B细胞应答过程中,发挥了关键的辅助作用。Tfh细胞的关键转录因子是Bcl6,CXCR5是Tfh细胞的主要表面标志。表达CXCR5的Tfh细胞在淋巴滤泡产生的CXCL13的趋化作用下,被招募到淋巴滤泡并与B细胞发生共定位和相互作用,从而发挥辅助B细胞的功能。Tfh细胞在辅助B细胞分化、成熟的过程中,受到了众多因素的调控,其中,转录因子是非常重要的调控分子。分别由Tcf7和Lef1基因编码的T细胞转录因子1（T cell factor 1,TCF-1）和淋巴样增强因子1（lymphoid enhancer factor 1,LEF-1）是Tcf/Lef转录因子家族的成员。从T细胞形成初期到分化为CD4T细胞和CD8T细胞以及CD4T细胞分化的各个亚群中,TCF-1与LEF-1均呈现出高表达状态。两者的C端都包含一个高迁移率基团（high mobility group,HMG）DNA结合域,具有高度保守性。N端含有可与β-连环蛋白（β-catenin）相互结合的结构域,能与β-连环蛋白相互结合,从而参与以Wnt-β-Catenin-TCF/LEF为轴的经典Wnt信号通路的调控。游离的β-Catenin进入细胞核内并与转录因子TCF/LEF结合,形成β-Catenin-TCF/LEF转录复合体,在其它辅助激活因子的协同作用下,转录调控经典Wnt通路的靶基因,从而最终调控胚胎和细胞的发育、分化和凋亡等。在病毒感染模型中TCF-1与LEF-1对于Tfh细胞的调控从而影响机体对抗病毒感染的研究颇多,但在蛋白免疫应答中,TCF-1与LEF-1是否也调控了Tfh细胞的分化与功能?目前这方面的研究报道还较少,LEF-1与TCF-1在蛋白免疫应答中的相互调节关系也不清楚。本课题围绕着TCF-1与LEF-1在蛋白免疫中对Tfh细胞功能的调控进行了深入研究,并得到了以下三个方面的结论:1.在蛋白免疫中TCF-1与LEF-1可影响CD4T细胞的活化。在三种不同的蛋白免疫模型中Tcf7以及Tcf7与Lef1敲除小鼠CD4CD44T细胞频率和数量显著下降,提示我们,CD4T细胞活化功能受损。考虑到TCF-1/LEF-1在胸腺细胞发育形成CD4T的环节就具有重要的调控作用,为避免TCF-1/LEF-1缺失造成对小鼠CD4T细胞带有未知的缺陷。我们将表达他莫西芬敏感的雌激素受体（ERT2-Cre）融合的诱导敲除小鼠与Tcf7Lef1小鼠杂交,得到TCF-1诱导性全身敲除小鼠,ERT2-CreTcf7Lef1（本文中简写为TKO）,ERT2-CreTcf7Lef1（DKO）,ERT2-CreTcf7Lef1（LKO）,和ERT2-CreTcf7Lef1（Ctrl）小鼠,共四组小鼠进行实验。实验开始前,连续5天,对小鼠通过腹腔注射他莫昔芬诱导敲除TCF-1/LEF-1,休息5天后,检测敲除效率。将4-羟基-3-硝基苯乙酰基（NP）合剂与血蓝蛋白共轭形成的蛋白复合物NP-KLH与铝佐剂混合,通过腹腔注射的方式对各组小鼠进行蛋白免疫。免疫第7天,断颈处死小鼠,取脾脏淋巴细胞进行分析。我们发现与野生型（Ctrl）小鼠相比,TKO小鼠与DKO小鼠组,CD44CD4T细胞频率和数量都减少,表明CD4T细胞活化受损;LKO小鼠组,CD4T细胞的活化程度与Ctrl小鼠相当。同时,与Ctrl小鼠相比,DKO小鼠、TKO小鼠中活化CD4T细胞分化为Tfh（CD44CXCR5）的能力无差异。我们还利用卵清蛋白（Ovalbumin,NP-OVA）联合铝佐剂以及鸡γ球蛋白（Chicken Gamma Globulin,NP-CGG）联合完全弗氏佐剂,分别通过腹腔注射和皮下注射的方式,对各组小鼠进行蛋白免疫,检测不同蛋白免疫模型中,CD4T细胞活化及分化的情况。流式检测发现,分别用NP-OVA蛋白和NP-CGG蛋白免疫后,TKO小鼠和DKO小鼠的脾脏与淋巴结中CD44CD4T细胞频率和数量下降,这与在NP-KLH蛋白免疫模型中观察到的现象一致。另一方面,与NP-KLH模型不同,NP-OVA蛋白免疫模型中,TKO小鼠和DKO小鼠,Tfh细胞在活化CD4T细胞中频率及数量显著降低。NP-CGG免疫的TKO小鼠

关键词： T细胞转录因子1 淋巴样增强因子1 蛋白免疫滤泡辅助T细胞 B细胞应答

家兎抗血清蛋白免疫的研究 2.免疫血清中缺白蛋白沉淀抗体现象的探讨

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骨科 1964年第1期 1-7+81-82页

作者：謝毓晋饒海玉叶海林武汉生物制品研究所综合研究组

在前文中我们报告了在家兔抗猪血清蛋白免疫工作中初步观察到的抗原干扰现象。免疫注射后血清中白蛋白抗原看来受到了血清球蛋白的干扰,抗体的产生受到了抑制。在采用静脉法注射较大剂量的猪血清蛋白抗原进行免疫时,白蛋白抗体产生受到... 详细信息

在前文中我们报告了在家兔抗猪血清蛋白免疫工作中初步观察到的抗原干扰现象。免疫注射后血清中白蛋白抗原看来受到了血清球蛋白的干扰,抗体的产生受到了抑制。在采用静脉法注射较大剂量的猪血清蛋白抗原进行免疫时,白蛋白抗体产生受到抑制的现象更加明显,多数免疫家兔血清中缺少白蛋白抗体。采用其他免疫方法,包括肌肉注射,佐剂抗原,小剂量多次加强免疫等综合措施,可以改善,

关键词：猪血清白蛋白抗体谱胶体分散体系免疫电泳试验蛋白抗原免疫血清环状沉淀反应沉淀抗体免疫扩散试验血清抗体对照血清家兔血清白蛋白抗体蛋白免疫

沙门氏菌菌蜕对结核分枝杆菌四种蛋白免疫的佐剂效应

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沙门氏菌菌蜕对结核分枝杆菌四种蛋白免疫的佐剂效应

肾综合征出血热病毒50K结构蛋白免疫学特性的初步研究(摘要)

中国畜牧兽医学会生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十二次学术研讨会

作者：李鹤倪宏波刘思国中国农业科学院哈尔滨兽医研究所细菌病研究室/国家生物技术重点实验室黑龙江八一农垦大学动物科学技术学院

结核病是由结核分枝杆菌引起的一种重要的人兽共患传染病,据世界卫生组织不完全统,全球每年约有10亿人感染该病,并造成约140万人的死亡。该病在发展中国家流行尤为严重,罹患结核病的病人呈现逐年上升的趋势,给公共卫生事业造成了重大的... 详细信息

结核病是由结核分枝杆菌引起的一种重要的人兽共患传染病,据世界卫生组织不完全统,全球每年约有10亿人感染该病,并造成约140万人的死亡。该病在发展中国家流行尤为严重,罹患结核病的病人呈现逐年上升的趋势,给公共卫生事业造成了重大的影响。在过去的很多年里,许多学者都致力于抗结核病疫苗的研究并且获得

关键词：兽医学结核病沙门氏菌菌蜕蛋白免疫佐剂效应

来源： cnki会议评论

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解放军医学杂志 1989年第5期 327-327页

作者：陈琪福

以McAb亲和层析纯化的HFRS病毒50K结构蛋白免疫BALB/c小鼠,结果:第一次免疫后3周即有特异性抗体(包括中和抗体)被检出。抗体滴度随免疫进程而升高,第三次免疫后3周,其血清中和抗体滴度

关键词：蛋白免疫检出结构蛋白蛋白质 HFRS 免疫血清

用标记融合蛋白免疫捕获试验检测细小病毒B19 IgM抗体

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国外医学(微生物学分册) 1992年第2期 90-90页

作者：王凌刘军连

本文用复制B19病毒融合蛋白的表达质粒pUC18转化大肠杆菌JM-107,选出阳性菌株,扩增后收集培养上清液,经亲和层析分离、纯化融合蛋白,并用12%SDS-PAGE分析其特性。融合蛋白免疫捕获试验(FP-IC)具

关键词： B19 IgM 抗体蛋白免疫细小病毒试验检测

改良兔抗人白蛋白免疫羧化胶乳在大肠肿瘤检测中的应用

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中华检验医学杂志 2000年第2期23卷 63-63页

作者：王志红张红光李世荣北京军区总医院消化内科

肿瘤抗原p185蛋白免疫鼠脾细胞的抗瘤效应研究(摘要)

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复旦学报(医学版) 2000年第5期27卷 334-334页

作者：李晓华上海医科大学基础医学院免疫学教研室!上海200032

目的研究肿瘤抗原p185蛋白作为肿瘤疫苗的诱导的抗肿瘤效应。方法亲和层析纯化的p185蛋白皮下注射正常BALB/c小鼠，取脾细胞分别与p185蛋白、3T3-neu细胞体外共培养，以单独佐剂注射组的小鼠脾细胞为对照，观察其培养上清中IFN-γ和TNF... 详细信息

目的研究肿瘤抗原p185蛋白作为肿瘤疫苗的诱导的抗肿瘤效应。方法亲和层析纯化的p185蛋白皮下注射正常BALB/c小鼠，取脾细胞分别与p185蛋白、3T3-neu细胞体外共培养，以单独佐剂注射组的小鼠脾细胞为对照，观察其培养上清中IFN-γ和TNF-α活性。将免疫鼠脾淋巴细胞经p185抗原和低剂量的IL-2体外培养1周后，再用CD3抗体刺激扩增，用流式细胞仪分析其细胞表型。3T3-neu和3T3细胞分别接种于裸鼠腋窝皮下验证其致瘤性。选择具有致瘤性的3T3-neu细胞与经抗CD3抗体扩增的免疫鼠脾细胞体外混合后(1∶9)接种于裸鼠腋窝皮下，以3T3-neu细胞单独或与CD3抗体活化的正常鼠脾细胞(CD3-AK)混合后，同法接种于裸鼠腋窝皮下观察其成瘤时间和带瘤宿主的存活期。结果免疫鼠脾细胞培养上清中IFN-γ活性为(40.27±9.6)U/ml，也具有产生较高TNF-α能力。对照组未能检测出有IFN-γ活性，其TNF-α活性也较低。裸鼠体内实验证实，2.5×105的3T3-neu细胞在裸鼠体内即可成瘤，而对照的3T3细胞无致瘤性。3T3-neu细胞与体外扩增的免疫鼠脾细胞混合后接种裸鼠，瘤结节形成时间平均为52.5 d，存活期平均为55.3 d(其中5只动物至60 d尚未成瘤，按60 d计算)，而对照组瘤结节形成时间平均分别为12.5和9.2 d，存活期平均为27.8和25.6 d。表明p185蛋白免疫鼠脾细胞有相对特异的抗瘤活性。结论肿瘤抗原p185蛋白作为肿瘤疫苗可诱导一定的抗瘤效应。［全文刊登于中华微生物学和免疫学杂志 2000，20(3)：258］

关键词：脾细胞抗瘤效应蛋白免疫肿瘤抗原 p185