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蛇床子催眠活性组分对PCPA损伤大鼠松果体细胞的保护作用及钟基因表达调控机制

中药材 2021年第1期44卷 182-185页

作者：王丹妮郭晋良仝立国宋美卿仲启明杨钤冯玛莉山西省中医药研究院山西太原030012

目的:观察蛇床子催眠活性组分对PCPA松果体损伤大鼠结构、功能的保护作用及生物钟基因表达的影响,探讨蛇床子催眠活性组分催眠作用机制。方法:采用腹腔注射PCPA 450 mg/kg连续2 d,建立大鼠松果体损伤模型,灌胃蛇床子催眠活性组分高、低... 详细信息

目的:观察蛇床子催眠活性组分对PCPA松果体损伤大鼠结构、功能的保护作用及生物钟基因表达的影响,探讨蛇床子催眠活性组分催眠作用机制。方法:采用腹腔注射PCPA 450 mg/kg连续2 d,建立大鼠松果体损伤模型,灌胃蛇床子催眠活性组分高、低剂量(60、30 mg/kg)并设褪黑素(10 mg/kg)阳性对照组,检测血清褪黑素、松果体组织病理学和超微结构及松果体中钟基因Clock、Bmal1、Per1、Per2、Per3、Cry1、Cry2表达。结果:与正常对照组比较,模型组入睡潜伏期显著延长,血清褪黑素水平及松果体Bmal1、Per1 mRNA表达显著降低,Per3 mRNA表达显著升高(P蛇床子催眠活性组分高剂量组入睡潜伏期显著缩短,睡眠持续时间显著延长,血清褪黑素水平显著升高;蛇床子催眠活性组分高剂量组松果体Clock、Bmal1、Cry1、Cry2 mRNA表达显著升高,Per3 mRNA显著降低,蛇床子催眠活性组分低剂量组Clock、Bmal1、Per1、Per2、Per3、Cry1、Cry2 mRNA表达显著降低(P蛇床子催眠活性组分高剂量组细胞排列紊乱,核固缩,空泡变性增多,数目减少;松果体超微结构观察显示模型组线粒体多肿胀、嵴断裂、固缩,蛇床子催眠活性组分高剂量组线粒体肿胀、嵴断裂、固缩较模型组减少。结论:蛇床子催眠活性组分对松果体细胞损伤有保护作用,并能调节松果体钟基因表达。

关键词：蛇床子催眠活性组分松果体损伤血清褪黑素生物钟基因表达

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蛇床子催眠活性组分对PCPA失眠大鼠松果体细胞凋亡及褪黑素合成的影响

蛇床子催眠活性组分对PCPA失眠大鼠松果体细胞凋亡及褪黑素合成的...

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作者：郭晋良山西省中医药研究院

学位级别：硕士

目的:探寻蛇床子催眠活性组分(CHC)对对氯苯丙氨酸(PCPA)失眠大鼠行为学、松果体损伤的保护作用,观察褪黑素(MT)合成关键酶AANAT的表达变化探讨CHC对松果体保护机制。方法:***对PCPA失眠大鼠松果体细胞的保护作用雄性SD大鼠随机分为空... 详细信息

目的:探寻蛇床子催眠活性组分(CHC)对对氯苯丙氨酸(PCPA)失眠大鼠行为学、松果体损伤的保护作用,观察褪黑素(MT)合成关键酶AANAT的表达变化探讨CHC对松果体保护机制。方法:***对PCPA失眠大鼠松果体细胞的保护作用雄性SD大鼠随机分为空白对照、模型对照、MT阳性对照(10 mg/kg)、蛇床子催眠活性组分高、中、低剂量(60、30、15mg/kg)共为6组,除空白对照组外,其余各组腹腔注射PCPA混悬液450mg/kg,每天1次、连续2d建立失眠大鼠松果体损伤模型,各组大鼠于给药后第4、5、6d分别进行自主活动分析、高架十字迷宫、戊巴比妥钠协同睡眠实验,称量造模前后及给药后重量;给药7天后杀检取血、剖取松果体,HE染色观察其组织病理学变化,采用TUNEL原位染色方法观察松果体组织细胞凋亡指数(AI),流式细胞术分析松果体细胞早期凋亡率,免疫组化方法及图象分析技术检测松果体Bcl-2、Bax蛋白的表达。***对PCPA失眠大鼠松果体褪黑素合成关键酶AANAT的影响仍选用腹腔注射PCPA混悬液造模,给药结束后采取腹主动脉血和松果体组织,分别采用ELASA检测血清MT浓度,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测松果体褪黑素关键合成限速酶AANAT mRNA表达,Western-blot印迹法检测松果体AANAT蛋白表达。结果:***对PCPA失眠大鼠行为学变化的影响(1)旷场活动,活动总距离、站立次数、中心区持续时间模型对照组显著高于空白对照组(P<0.05、P<0.01、P<0.01);MT组、CHC高、中剂量组活动总距离显著低于模型对照组(P<0.05、P<0.01、P<0.05);CHC高剂量站立次数、中心持续时间组显著低于模型对照组(P<0.01、P<0.05)。(2)高架十字迷宫,开臂次数及时间比例模型对照组显著低于空白对照组(P<0.05);MT组、CHC高、中剂量组开臂次数百分比显著高于模型对照组(P<0.05)。(3)戊巴比妥钠协同睡眠,入睡潜伏期模型对照组显著高于空白对照组(P<0.01);MT组及CHC高、中剂量组显著低于模型对照组(P<0.01)、睡眠时间显著高于模型对照组(P<0.01),CHC低剂量睡眠时间显著高于模型对照组(P<0.05)。(4)给药后体重变化,模型对照组显著低于空白对照组(P<0.01),CHC高、CHC中剂量组显著高于模型对照组(P<0.01、P<0.05),给药各组的体重均数介于PCPA模型与空白对照组之间。***对PCPA失眠大鼠松果体病理组织学及细胞凋亡影响(1)松果体组织病理学变化模型对照组较空白对照组松果体细胞排列紊乱,核固缩,数目明显减少,空泡变性增多;CHC高、中剂量、MT组松果体细胞排列轻度紊乱,核固缩,数目减少,空泡变性少。(2)松果体组织TUNELAI指数模型对照组显著高于空白对照组(P<0.01),MT、CHC高、中剂量组显著低于模型对照组(P<0.01)。(3)松果体细胞早期凋亡率模型对照组显著高于空白对照组(P<0.05),CHC高剂量组显著低于模型对照组(P<0.05)。(4)松果体凋亡因子Bcl-2、Bax相对量,Bcl-2蛋白表达模型对照组显著低于空白对照组(P<0.05),MT、CHC高、中剂量组显著高于模型对照组(P<0.01、P<0.05、P<0.05);Bax蛋白表达模型对照组显著高于空白对照组(P<0.01),MT、CHC高、中剂量组显著低于模型对照组(P<0.05、P<0.01、P<0.01)。***对松果体褪黑素合成关键酶AANAT的影响(1)大鼠血清MT:模型对照组显著低于空白对照组(P<0.01);MT、CHC高、中剂量组显著高于模型对照组(P<0.05、P<0.01、P<0.05)。(2)AANAT mRNA表达:模型对照组显著低于空白对照组(P<0.01);MT组、CHC高剂量组显著高于模型对照组(P<0.05、P<0.01)。(3)AANAT蛋白相对表达量:模型对照组显著低于空白对照组(P<0.01);MT组、CHC高剂量组显著高于模型对照组(P<0.01)。结论:***明显减少PCPA失眠大鼠自主活动,增加进入高架十字迷宫的开臂时间百分比,缓解失眠大鼠烦躁焦虑状态,缩短入眠潜伏期、延长睡眠持续时间。***明显减轻PCPA失眠大鼠松果体组织病理损伤、抑制松果体细胞凋亡,提高PCPA大鼠血清MT水平。***改善PCPA失眠大鼠行为学、松果体结构功能,与抑制凋亡因子Bcl-2表达增加、促凋亡因子Bax表达降低,增加褪黑素合成限速酶AANAT mRNA及AANAT蛋白表达有关。

关键词：蛇床子催眠活性组分 PCPA失眠大鼠褪黑素合成酶AANAT 松果体损伤 Bcl-2 Bax

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蛇床子催眠活性组分对失眠大鼠钟基因与氨基酸类神经递质的影响

蛇床子催眠活性组分对失眠大鼠钟基因与氨基酸类神经递质的影响

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作者：魏文静山西省中医药研究院

学位级别：硕士

目的:观察蛇床子催眠活性组分(SCZ)对对氯苯丙氨酸(PCPA)失眠大鼠海马、脑干、下丘脑等不同部位氨基酸类神经递质的变化,进而通过其对PCPA失眠大鼠海马神经递质受体、生物钟基因表达的影响,探讨SCZ催眠作用机制。方法:采用腹腔注射PCPA ... 详细信息

目的:观察蛇床子催眠活性组分(SCZ)对对氯苯丙氨酸(PCPA)失眠大鼠海马、脑干、下丘脑等不同部位氨基酸类神经递质的变化,进而通过其对PCPA失眠大鼠海马神经递质受体、生物钟基因表达的影响,探讨SCZ催眠作用机制。方法:采用腹腔注射PCPA 450mg/kg每天1次,连续2天,建立大鼠PCPA失眠模型,设立SCZ低(25mg/kg)、中(50mg/kg)、高(100mg/kg)剂量组,并设地西泮阳性对照组(1.5mg/kg),灌胃给予PCPA失眠大鼠(10ml/kg)连续3天,采用超高效液相色谱-荧光法检测海马、脑干、下丘脑γ-氨基丁酸(GABA)、甘氨酸(GLY)和谷氨酸(GLU)、天冬氨酸(ASP)等氨基酸类神经递质含量的变化;免疫组织化学法检测大鼠海马齿状回GABA和GLU受体蛋白的表达;实时荧光定量PCR检测失眠大鼠海马Clock、Bmal1、Cry1、Cry2、Per1、Per2、Per3等钟基因的表达水平。分析SCZ对PCPA失眠大鼠海马生物钟基因与神经递质含量变化的关系。结果:***对PCPA失眠大鼠海马、脑干、下丘脑不同脑区氨基酸类神经递质的影响(1)海马GLU含量模型对照组显著高于空白对照组(P<0.01),地西泮阳性对照组、SCZ高、中剂量组显著低于模型对照组(P<0.01、P<0.05);ASP含量各给药组较模型对照组有降低趋势,但无显著差异;GABA、GLY含量模型对照组均显著低于空白对照组(P<0.01),地西泮阳性对照组显著高于模型对照组(P<0.01、P<0.001),SCZ高剂量组显著高于模型对照组(P<0.05)。表明SCZ能明显增加PCPA失眠大鼠海马抑制性神经递质GABA、GLY含量,降低GLU的含量。(2)脑干GLU、ASP含量模型对照组显著高于空白对照组(P<0.05、P<0.01),SCZ高、中剂量组GLU含量显著低于模型对照组(P<0.01),地西泮阳性对照组ASP含量显著低于模型对照组(P<0.01),SCZ高、中剂量组ASP含量显著低于模型对照组(P<0.01、P<0.05);GABA、GLY含量模型对照组显著低于空白对照组(P<0.05),地西泮阳性对照组显著高于模型对照组(P<0.01、P<0.05),SCZ高、低剂量组GABA含量显著高于模型对照组(P<0.01、P<0.05),SCZ高、中剂量组GLY含量显著高于模型对照组(P<0.05)。表明SCZ能明显增加PCPA失眠大鼠脑干GABA、GLY的含量,降低GLU、ASP含量。(3)下丘脑GLU、ASP含量模型对照组显著高于空白对照组(P<0.01),地西泮阳性对照组显著低于模型对照组(P<0.001、P<0.01),SCZ高、中剂量组GLU含量显著低于模型对照组(P<0.01、P<0.05),SCZ高、中剂量组ASP含量显著低于模型对照组(P<0.01、P<0.001);GABA、GLY含量模型对照组显著低于空白对照组(P<0.05),地西泮阳性对照组GABA、GLY含量显著高于模型对照组(P<0.001、P<0.01),SCZ高、中剂量组GABA含量显著高于模型对照组(P<0.01),SCZ高剂量组GLY含量显著高于模型对照组(P<0.001)。表明SCZ能明显增加PCPA失眠大鼠下丘脑GABA、GLY的含量,降低GLU、ASP含量。(4)海马GABA含量显著高于脑干(P<0.01),海马GLU含量显著高于脑干、下丘脑(P<0.001、P<0.01),下丘脑ASP、GLY含量显著高于海马、脑干(P<0.01),表明GABA、GLU含量在海马分布广泛。***对PCPA失眠大鼠海马齿状回GABA和GLU受体蛋白表达的影响海马齿状回GLU免疫组化平均光密度模型对照组显著高于空白对照组(P<0.01),各给药组显著低于模型对照组(P<0.01),海马齿状回GABA免疫组化平均光密度模型对照组显著低于空白对照组(P<0.05),地西泮阳性对照组GABA含量显著高于模型对照组(P<0.01),各给药组显著高于模型对照组(P<0.01)。说明SCZ能明显增加GABA受体表达量,降低GLU受体表达量。***对PCPA失眠大鼠海马生物钟基因表达的影响海马Clock、Bmal1基因表达量模型对照组显著高于空白对照组(P<0.05),地西泮阳性对照组Clock基因表达量显著低于模型对照组(P<0.05),SCZ中剂量组Clock、Bmal1基因量表达均显著低于模型对照组(P<0.01);Cry1、Per1、Per2、Per3基因量表达模型对照组显著低于空白对照组(P<0.05、P<0.01、P<0.05、P<0.05),地西泮阳性对照组Cry1、Per1、Per2、Per3基因表达量均显著高于模型对照组(P<0.01,P<0

关键词：蛇床子催眠活性组分 PCPA失眠大鼠不同脑区氨基类神经递质海马GABA和GLU受体海马钟基因表达

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探讨蛇床子催眠活性组分对PCPA失眠大鼠褪黑素合成限速酶AANAT的调控作用

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中国实验方剂学杂志 2021年第14期27卷 47-52页

作者：郭晋良仲启明吉海杰杨钤宋美卿贾力莉仝立国牛艳艳冯玛莉山西省中医药研究院太原030012

目的:观察蛇床子催眠活性组分(CHC)对对氯苯丙氨酸(PCPA)失眠大鼠行为学、褪黑素(MT)合成限速酶芳基烷基胺N-乙酰基转移酶(AANAT)的影响,探讨其对松果体的保护机制。方法:60只SPF级雄性SD大鼠随机分为正常、模型,MT阳性药,CHC高、中、... 详细信息

目的:观察蛇床子催眠活性组分(CHC)对对氯苯丙氨酸(PCPA)失眠大鼠行为学、褪黑素(MT)合成限速酶芳基烷基胺N-乙酰基转移酶(AANAT)的影响,探讨其对松果体的保护机制。方法:60只SPF级雄性SD大鼠随机分为正常、模型,MT阳性药,CHC高、中、低剂量6组,每组10只。除正常组其余各组腹腔注射4.5%PCPA混悬液,10 mL·kg^(-1),连续2 d,建立大鼠PCPA失眠模型。造模后正常及模型组灌胃等体积2%聚山梨酯-80,MT组(10 mg·kg^(-1),CHC高、中、低(60,30,15 mg·kg^(-1)给予10 mL·kg^(-1)给药体积的药物,每日1次,连续7 d。给药4 d后分别进行旷场活动、高架十字迷宫、戊巴比妥钠协同睡眠试验,采用酶联免疫吸附法检测血清MT;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)测定松果体MT合成关键酶AANAT mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测松果体AANAT蛋白表达变化。结果:与正常组比较,模型组大鼠旷场活动总距离、站立次数、中心区持续时间明显增加(P<0.05,P<0.01),高架开臂次数及时间比例下降(P<0.05),入睡潜伏期显著延长(P<0.01);与模型组比较,低剂量组无明显差异,其余各组大鼠活动总距离均减少(P<0.05,P<0.01),高架开臂次数百分比升高(P<0.05),入睡潜伏期缩短、睡眠时间明显延长(P<0.05,P<0.01)。与正常组比较,模型组MT含量显著下降(P<0.01);与模型组比较,低剂量组差异无明显统计学意义,其余各组血清MT不同程度的升高(P<0.05)。与正常组比较,模型组AANAT mRNA表达量,AANAT蛋白表达量下降(P<0.01);与模型组比较,MT组,CHC高剂量组表达量明显增加(P<0.05)。结论:CHC改善PCPA失眠行为学指标、增加松果体细胞合成分泌MT,提高血清MT水平,与上调松果体AANAT mRNA及其蛋白的表达有关。

关键词：蛇床子催眠活性组分对氯苯丙氨酸(PCPA)失眠大鼠褪黑素合成限速酶芳基烷基胺N-乙酰基转移酶(AANAT)

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蛇床子催眠活性组分对PCPA失眠大鼠松果体细胞凋亡和相关Bcl-2/Bax蛋白表达的影响

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中医药学报 2022年第1期50卷 23-27页

作者：郭晋良杨钤王若瑜宋美卿贾力莉牛艳艳仝立国冯玛莉山西省中医药研究院山西太原030012

目的:观察蛇床子催眠活性组分(CHC)对PCPA致大鼠松果体细胞凋亡及其Bcl-2/Bax蛋白阳性表达的影响,探讨其改善松果体损伤的作用机制。方法:雄性SD大鼠随机分成空白对照组,模型对照组,MT阳性对照(10 mg/kg)组,蛇床子催眠活性成分高、中、... 详细信息

目的:观察蛇床子催眠活性组分(CHC)对PCPA致大鼠松果体细胞凋亡及其Bcl-2/Bax蛋白阳性表达的影响,探讨其改善松果体损伤的作用机制。方法:雄性SD大鼠随机分成空白对照组,模型对照组,MT阳性对照(10 mg/kg)组,蛇床子催眠活性成分高、中、低剂量(60、30、15 mg/kg)共6组,每组10只,除空白对照组外,其余各组大鼠每日腹腔注射PCPA 450 mg/kg,连续2 d,制备失眠大鼠松果体损伤模型,造模完成每日灌胃给药1次,连续7 d。分别于造模及给药前后观察各组大鼠的精神状态、皮毛光泽度、体质量变化情况;观察给药后HE染色松果体组织病理变化,原位末端凋亡(TUNEL)计数松果体组织凋亡细胞数得出凋亡指数(AI)、流式细胞术分析松果体细胞早期凋亡率,免疫组化法半定量分析凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达。结果:松果体病理组织镜下观察可见模型对照组细胞数目明显减少,排列紊乱,核固缩,空泡变性增多,CHC低剂量组与模型组无明显差异,其余各给药组大鼠松果体细胞排列紊乱均有一定程度改善、空泡变性减少;松果体组织TUNEL的AI指数模型对照组显著高于空白对照组(P<0.01),MT、CHC高、中剂量组显著低于模型对照组(P<0.01)。松果体细胞早期凋亡率模型对照组显著高于空白对照组(P<0.05),CHC高剂量组显著低于模型对照组(P<0.05);Bcl-2模型对照组显著低于空白对照组(P<0.05),MT阳性对照组、CHC高、中剂量组显著高于模型对照组(P<0.01,P<0.05);Bax模型对照组显著高于空白对照组(P<0.01),MT阳性对照组、CHC高、中剂量组著低于模型对照组(P<0.05,P<0.01)。结论:CHC改善PCPA致失眠大鼠松果体组织结构损伤,减少松果体凋亡,其作用机制与降低诱导凋亡蛋白Bax、增加抑制凋亡蛋白Bcl-2表达、上调Bcl-2/Bax有关。

关键词：蛇床子催眠活性组分松果体细胞凋亡 Bcl-2 Bax

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