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常态及虚寒状态小鼠体内次乌头碱的血药浓度差异研究

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中国中药杂志 2010年第15期35卷 2008-2011页

作者：杨媛黄建梅刘小青白梅荣马长华张冰北京中医药大学中药学院北京100102

目的:对比研究虚寒状态和常态小鼠血清中次乌头碱浓度差异,分析不同机体代谢环境的差异,在代谢层面说明药物毒性发生与机体的代谢环境有关。方法:复制小鼠虚寒状态模型,连续给予附子水煎液14d,用HPLC检测第1,7,14天虚寒状态及常态小鼠... 详细信息

目的:对比研究虚寒状态和常态小鼠血清中次乌头碱浓度差异,分析不同机体代谢环境的差异,在代谢层面说明药物毒性发生与机体的代谢环境有关。方法:复制小鼠虚寒状态模型,连续给予附子水煎液14d,用HPLC检测第1,7,14天虚寒状态及常态小鼠血清中次乌头碱的浓度;同时观察小鼠的存活率。结果:附子水煎液对虚寒状态小鼠机体代谢起调节作用,给药14d后,其血药浓度恢复或接近正常组水平;附子水煎液对常态组小鼠的体内代谢环境存在扰动,给药7,14d的血药浓度均比第1天高;在14d的给药周期内,虚寒组血药浓度的变化范围小于正常组。附子水煎液灌胃后第7天及第14天,虚寒状态组小鼠的存活率明显高于常态组小鼠。结论:常态及虚寒状态小鼠血药浓度的差异提示常态和虚寒状态小鼠的代谢环境存在差异,代谢环境在给予附子水煎液的过程中发生改变。实验结果在一定程度上说明附子在临床上产生毒性的剂量不同与机体的代谢环境不同有关。

关键词：次乌头碱虚寒状态血药浓度代谢环境

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虚寒状态大鼠免疫系统功能变化研究

中国实验方剂学杂志 2013年第1期19卷 199-201页

作者：李连珍张冰刘小青河南农业大学农学院郑州450002 北京中医药大学中药学院北京100029

目的:探讨氢化可的松诱导的虚寒大鼠免疫系统功能变化特点,为虚寒证动物模型深入研究奠定基础。方法:48只SD雄性大鼠按体重随机分成正常组和虚寒组,每组24只。虚寒组im氢化可的松琥珀酸钠生理盐水溶液20 mg·kg-1。注射第7,14,21天下午... 详细信息

目的:探讨氢化可的松诱导的虚寒大鼠免疫系统功能变化特点,为虚寒证动物模型深入研究奠定基础。方法:48只SD雄性大鼠按体重随机分成正常组和虚寒组,每组24只。虚寒组im氢化可的松琥珀酸钠生理盐水溶液20 mg·kg-1。注射第7,14,21天下午,剪尾取10μL全血,显微镜下白细胞计数。第15,22天上午,正常组和虚寒组各12只,麻醉,腹主静脉取血,分离血清和血浆(EDTA抗凝),全自动生化分析仪检测免疫球蛋白G(IgG)和免疫球蛋白M(IgM),ELISA法检测白细胞介素4(IL-4)和干扰素-γ(IFN-γ)。摘取胸腺、脾脏电子分析天平称量后,计算脏器指数。结果:与同期正常组比较,虚寒组大鼠胸腺指数和血清IgM含量在造模第14,21天均明显降低(P虚寒状态动物模型,免疫系统功能明显低下,并存在Th1/Th2细胞因子的漂移现象。

关键词：虚寒状态免疫系统氢化可的松

基于cAMP-PKA信号通路的虚寒状态大鼠中枢神经递质变化机制研究

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中国中医基础医学杂志 2010年第4期16卷 289-290,294页

作者：李敏张冰刘小青刘欣李连珍北京中医药大学中药学院北京100102

目的:探讨虚寒状态下单胺类神经递质的变化及机制,明确cAMP-PKA信号通路在虚寒状态中的作用。方法:氢化可的松塑造大鼠虚寒模型,HPLC法检测脑内单胺类神经递质及代谢产物含量:NE、E、DA、5-HT、5-HIAA、DOPAC,放免法测血浆cAMP、cGMP水... 详细信息

目的:探讨虚寒状态下单胺类神经递质的变化及机制,明确cAMP-PKA信号通路在虚寒状态中的作用。方法:氢化可的松塑造大鼠虚寒模型,HPLC法检测脑内单胺类神经递质及代谢产物含量:NE、E、DA、5-HT、5-HIAA、DOPAC,放免法测血浆cAMP、cGMP水平,免疫组化法测肝脏PKA表达。结果:14d虚寒状态组NE、5-HIAA、5-HT含量和cAMP、cGMP水平及PKA表达显著降低;21 d虚寒状态组NE、DOPACT含量和cAMP、cGMP水平及PKA表达显著降低。结论:cAMP-PKA通路可能是介导虚寒状态脑内单胺类神经递质变化的机制之一。

关键词：虚寒状态单胺类神经递质 cAMP-PKA信号通路

常态虚寒状态小鼠CYP3A活性P-gp水平比较研究

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辽宁中医杂志 2008年第3期35卷 460-462页

作者：白梅荣张冰刘小青倪莉高新颜北京中医药大学北京100029

目的:比较虚寒状态与常态小鼠肝和小肠细胞色素P4503A(CYP3A)活性和P-糖蛋白(P-gp)水平情况。方法:肌注氢化可的松复制小鼠虚寒状态模型,采用聚乙二醇法制备肝和小肠微粒体,测定肝和小肠细胞色素CYP 3A活性;以免疫组化法检测肝和小肠组... 详细信息

目的:比较虚寒状态与常态小鼠肝和小肠细胞色素P4503A(CYP3A)活性和P-糖蛋白(P-gp)水平情况。方法:肌注氢化可的松复制小鼠虚寒状态模型,采用聚乙二醇法制备肝和小肠微粒体,测定肝和小肠细胞色素CYP 3A活性;以免疫组化法检测肝和小肠组织P-gp水平。结果:虚寒状态组和正常状态组肝和小肠微粒体内CYP3A活性和P-gp水平存在差异,即正常状态CYP3A活性、P-gp水平高于虚寒状态,且差异显著(P状态差异。

关键词：虚寒状态肝小肠 CYP3A P-gp

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虚寒状态大鼠cAMP变化机制的实验研究

中国中医药信息杂志 2010年第2期17卷 33-34页

作者：李敏张冰刘小青金勇男赖永金倪莉北京中医药大学中药学院北京100102

目的观察虚寒状态下大鼠血浆第二信使环磷酸腺苷(cAMP)含量变化,探讨其可能机制。方法将大鼠随机分为正常组和虚寒模型组,虚寒组每日肌肉注射氢化可的松注射液,正常组每日肌肉注射等量生理盐水,持续14d;处死动物,检测甲状腺激素三碘甲... 详细信息

目的观察虚寒状态下大鼠血浆第二信使环磷酸腺苷(cAMP)含量变化,探讨其可能机制。方法将大鼠随机分为正常组和虚寒模型组,虚寒组每日肌肉注射氢化可的松注射液,正常组每日肌肉注射等量生理盐水,持续14d;处死动物,检测甲状腺激素三碘甲腺原氨酸(T3)、甲状腺素(T4)、反三碘甲腺原氨酸(rT3)、肾上腺皮质激素皮质醇(COR)、环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)、腺苷酸环化酶(AC)、三磷酸腺苷(ATP)。结果虚寒状态内分泌激素T3、T4、rT3、COR水平降低,cAMP水平、AC活性降低,ATP含量升高。结论虚寒状态下甲状腺、肾上腺皮质功能降低,内分泌激素作用于AC,对AC活化降低,第二信使cAMP生成减少,其介导的生物学效应相应降低,故虚寒机体表现出抑制的状态。

关键词：虚寒状态环磷酸腺苷腺苷酸环化酶三磷酸腺苷内分泌激素大鼠

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虚寒状态大鼠肝脏能量代谢变化研究

天津中医药 2014年第8期31卷 484-486页

作者：李连珍薛春苗张冰刘小青河南农业大学农学院郑州450002 北京中医药大学东直门医院北京100700 北京中医药大学中药学院北京100029

[目的]探讨氢化泼尼松诱导的虚寒大鼠肝脏能量代谢变化特点。[方法]48只SD雄性大鼠随机分为正常组和虚寒组,每组24只。虚寒组肌肉注射氢化泼尼松琥珀酸钠生理盐水溶液20 mg/kg,正常组注射生理盐水0.25 mL。注射第14、第21天晚上8点,正... 详细信息

[目的]探讨氢化泼尼松诱导的虚寒大鼠肝脏能量代谢变化特点。[方法]48只SD雄性大鼠随机分为正常组和虚寒组,每组24只。虚寒组肌肉注射氢化泼尼松琥珀酸钠生理盐水溶液20 mg/kg,正常组注射生理盐水0.25 mL。注射第14、第21天晚上8点,正常组和虚寒组各12只,禁食不禁水12 h,次日上午8点,麻醉,腹主静脉取血,分离血清,全自动生化分析仪检测乳酸(LAC)。固定位置取一块儿肝脏,4%多聚甲醛固定,免疫组化法检测解偶联蛋白2(UCP-2)蛋白表达。其余肝脏,-80℃冻存,紫外分光光度法检测琥珀酸脱氢酶(SDH)和三磷酸腺苷酶(ATPase)。[结果]与同期正常组比较,虚寒组大鼠血清LAC含量、肝组织SDH活性在造模第14天和第21天均明显降低(P虚寒状态动物模型肝脏能量代谢可能存在障碍。

关键词：虚寒状态能量代谢氢化泼尼松

虚寒状态下仙茅入血成分苔黑酚葡萄糖苷血药浓度变化研究

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虚寒状态下仙茅入血成分苔黑酚葡萄糖苷血药浓度变化研究

虚寒、虚热状态大鼠肝组织DNA甲基化水平的研究

中华中医药学会2013年药房管理分会学术年会

作者：薛春苗张冰金锐北京中医药大学东直门医院北京中医药大学中药学院

目的:观察仙茅作用于正常、虚寒两种不同状态大鼠后,其入血成分苔黑酚葡萄糖苷的血药浓度变化差异,探讨仙茅在正常与虚寒状态下体内药代与生物学效应的相关性。方法:SD雄性大鼠随机分为两组,即正常组和虚寒组。采用肌注氢化可的松粉针剂... 详细信息

目的:观察仙茅作用于正常、虚寒两种不同状态大鼠后,其入血成分苔黑酚葡萄糖苷的血药浓度变化差异,探讨仙茅在正常与虚寒状态下体内药代与生物学效应的相关性。方法:SD雄性大鼠随机分为两组,即正常组和虚寒组。采用肌注氢化可的松粉针剂20mg/kg/d塑造虚寒大鼠模型。模型成功后,正常/虚寒大鼠连续7d给予仙茅水提液30g/kg,最后一次给药后,分别于多点动物交叉眼眶取血,采用高效液相法检测苔黑酚葡萄糖苷血药浓度,并计算药物代谢参数。结果:虚寒组大鼠在给药后20min,其血药浓度就高于正常组大鼠,直到120min达最大血药浓度,其高水平状态一直维持到300min;虚寒组大鼠达峰时间长,峰浓度高,曲线下面积大。结论:虚寒组大鼠体内苔黑酚葡萄糖苷浓度始终处于高水平状态,可能为其生物学效应的更好发挥提供了物质基础。

关键词：仙茅虚寒状态苔黑酚葡萄糖苷血药浓度

来源： cnki会议评论

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虚寒、虚热状态大鼠肝组织DNA甲基化水平的研究

作者：郑飞北京中医药大学

学位级别：硕士

本研究为国家“973”计划课题《基于“药性构成三要素”的中药药性实质研究》(课题编号2007CB512605)的一部分,中药药性理论是中药临床应用的基础与指导,该课题着重考察中药药性形成和药性表达的诸种因素,提出“药性是药物作用于机体状... 详细信息

本研究为国家“973”计划课题《基于“药性构成三要素”的中药药性实质研究》(课题编号2007CB512605)的一部分,中药药性理论是中药临床应用的基础与指导,该课题着重考察中药药性形成和药性表达的诸种因素,提出“药性是药物作用于机体状态的、与化学成分相关的生物效应的概括和归纳”工作假说,即“三要素”学说,认为机体状态、化学成分及生物学效应是构成药性的三要素。其中,机体是药物发挥作用的载体,是功效产出的依托,是构成药性的重要要素。不同的机体状态如何用各种生理指标进行表征,以及不同状态如何影响药物生物效应的表达是研究的内容之一本课题组前期的研究结果表明虚寒、虚热状态大鼠肝脏代谢酶水平较正常组降低。DNA所携带的遗传信息的正确表达是合成代谢酶的前提,DNA甲基化作为表观遗传学的内容,能够通过影响基因的表达而改变其功能。 DNA甲基化是指在DNA甲基转移酶催化下,利用S-腺苷甲硫氨酸提供的甲基,将胞嘧啶的5位碳原子甲基化,使胞嘧啶转化为5-甲基胞嘧啶。哺乳动物中DNA甲基化主要位点是CpG二核苷酸对上的胞嘧啶,在人类基因组中,70%-80%CpG二核苷酸对上的胞嘧啶处于甲基化状态,未甲基化的胞嘧啶主要分布在CpG岛上。近年来的研究表明DNA甲基化与肿瘤、遗传病、自身免疫性疾病和衰老的发生密切相关。关于DNA甲基化与机体状态之间的关系未见报道,本实验通过检测虚寒、虚热两种机体状态下大鼠肝组织的DNA甲基化水平,初步探讨DNA甲基化与机体状态之间的关系,并以此为切入点寻求虚寒、虚热状态大鼠肝脏代谢酶活性降低的原因。本论文实验部分共分为四节：第一节建立了大鼠肝组织DNA的提取和水解方法。提取和水解方法确定为采用酚／氯仿抽提法提取DNA,然后用核酸酶P1和牛小肠碱性磷酸酶将DNA水解为脱氧核苷。第二节建立了全基因组DNA甲基化水平的HPLC测定方法,方法学考察结果显示本法线性、准确度、重复性和样品稳定性均符合要求,本法简便,快速,重现性好,可作为大鼠肝组织DNA甲基化水平的检测方法。第三节以姜附桂方水煎液(附子、干姜、肉桂1：1：1)为造模剂复制大鼠虚热模型,检测模型组和正常组大鼠肝组织DNA甲基化水平并进行比较,结果显示,中药造模的虚热组大鼠与正常组相比DNA甲基化水平降低,差异有统计学意义(P虚寒、虚热模型,模型复制成功后给予仙茅,检测正常组、模型组和仙茅给药组大鼠肝组织DNA甲基化水平并进行比较,结果显示,各组之间DNA甲基化水平无差异(P>0.05)。本实验首次对DNA甲基化与机体状态之间的关系进行了研究,对各组大鼠肝组织DNA甲基化水平的检测结果显示,姜附桂方(附子、干姜、肉桂1：1：1)能引起基因组DNA甲基化水平的降低,氢化可的松和地塞米松磷酸钠均对基因组DNA甲基化水平无影响。姜附桂方(附子、干姜、肉桂1：1：1)引起基因组DNA甲基化水平降低的原因尚不清楚,有待进一步研究。

关键词： HPLC DNA甲基化虚寒状态虚热状态

辛热药仙茅作用于药物代谢酶CYP3A的药性表达研究

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北京中医药大学学报 2010年第11期33卷 745-748,757,794页

作者：李敏张冰刘小青刘欣李连珍北京中医药大学中药学院北京100102 陕西中医学院药学院

目的在观察仙茅对虚寒大鼠神经内分泌功能改善基础上,探讨辛热药仙茅对虚寒状态动物肝脏药物代谢酶的影响及在辛热药性表达中的意义。方法将SD大鼠随机分为空白对照组,虚寒模型组,仙茅大、中、小剂量组。以氢化可的松(3.75 mg/kg)肌肉... 详细信息

目的在观察仙茅对虚寒大鼠神经内分泌功能改善基础上,探讨辛热药仙茅对虚寒状态动物肝脏药物代谢酶的影响及在辛热药性表达中的意义。方法将SD大鼠随机分为空白对照组,虚寒模型组,仙茅大、中、小剂量组。以氢化可的松(3.75 mg/kg)肌肉注射复制虚寒大鼠模型,辛热药仙茅以30、20、10 g/kg干预,红霉素-N脱甲基法检测动物肝脏代谢酶细胞色素P4503A(CYP3A)活性,放免法检测动物血浆环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)含量,Western blot法检测动物肝脏孕烷X受体(PXR)蛋白表达,免疫组化法检测动物肝脏蛋白激酶A(PKA)蛋白表达。结果虚寒大鼠肝脏药物代谢酶活性降低,PXR表达减少,cAMP、cGMP水平降低,PKA表达减少,仙茅各剂量组可提高CYP3A活性和cAMP含量,增强PXR、PKA表达,对cGMP影响不大。结论仙茅可能通过调节cAMP-PKA信号通路改善虚寒状态的代谢功能低下症状,从而表明辛热药的部分药性实质。

关键词：仙茅虚寒状态细胞色素P4503A 环磷酸腺苷蛋白激酶A 孕烷X受体大鼠