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藏药植物的信息可视化设计研究与应用

藏药植物的信息可视化设计研究与应用

作者：刘晓彤云南大学

学位级别：硕士

本文以艺术设计助力藏药知识的科普与传播为目的,以梳理藏药植物信息为起点,探讨信息可视化设计的形式如何结合藏药植物信息开拓新的传播路径,探索藏药植物的信息可视化设计形式与表现方法,找到更直观、趣味的信息可视化表达方法,为促... 详细信息

本文以艺术设计助力藏药知识的科普与传播为目的,以梳理藏药植物信息为起点,探讨信息可视化设计的形式如何结合藏药植物信息开拓新的传播路径,探索藏药植物的信息可视化设计形式与表现方法,找到更直观、趣味的信息可视化表达方法,为促进大众了解和认识藏药知识搭建桥梁。本文分五章进行论述,第一章绪论对选题背景、意义、研究现状、创新点等进行阐述,在背景中提出“藏药知识传播相对滞后”的问题;接着第二章对藏药及信息可视化设计进行概述,在此基础上分析了信息可视化设计与医学结合的相关案例,为接下来解决问题奠定基础。其次第三章聚焦到藏药植物基础知识板块,并对其信息类型进行分析,总结设计方法和设计要求。第四章是解决藏药知识传播问题的具体设计实践部分,通过案例分析总结出适用于本课题设计实践的设计原则,在设计原则和设计要求的基础上制定科学的设计流程,即信息收集——信息架构——视觉转化三个部分,视觉转化完成后会进行衍生应用的拓展,第五章是对整个课题的总结与展望。笔者希望在社会发展的新时代,能够通过艺术设计与藏药植物相关信息的结合探索出真正推动藏药知识传播的信息可视化设计方法,为藏族人民和普通大众提供信息接受的便利,促进达成健康中国的建设目标。

关键词：藏药藏药植物信息可视化设计

藏药二十五味松石丸对小鼠药源性肝损伤的改善作用及机制研究

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藏药二十五味松石丸对小鼠药源性肝损伤的改善作用及机制研究

作者：沙玉茹西南民族大学

学位级别：硕士

目的:本研究通过建立异烟肼-利福平(INH-RFP)、雷公藤多苷(TPGS)、对乙酰氨基酚(APAP)诱导的三种药源性肝损伤小鼠模型,研究藏药二十五味松石丸对小鼠药源性肝损伤的改善作用,并基于Keap1/Nrf2与TLR4/NF-κB p65信号通路研究二十五味松... 详细信息

目的:本研究通过建立异烟肼-利福平(INH-RFP)、雷公藤多苷(TPGS)、对乙酰氨基酚(APAP)诱导的三种药源性肝损伤小鼠模型,研究藏药二十五味松石丸对小鼠药源性肝损伤的改善作用,并基于Keap1/Nrf2与TLR4/NF-κB p65信号通路研究二十五味松石丸改善药源性肝损伤的作用机制。方法:1.将48只昆明小鼠随机分为空白组、INH-RFP模型组、二十五味松石丸高(400 mg·kg)、中(200 mg·kg)、低(100 mg·kg)剂量组及阳性药水飞蓟素(silymarin,SLM)组。各给药组小鼠均连续灌胃给药14 d。除空白组外,其余各组小鼠自给药第一天起以INH、RFP分别为150 mg·kg、50 mg·kg的剂量联合灌胃14 d造模。最后一次造模12 h后收集小鼠血清与肝脏组织,通过肝脏病理切片苏木精-伊红染色(HE),并检测小鼠血清中天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平以及肝匀浆中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、总抗氧化能力(T-AOC)水平,观察与分析二十五味松石丸对INH-RFP致小鼠肝损伤的保护作用。2.将48只昆明小鼠随机分为空白组、TPGS模型组、二十五味松石丸高(400mg·kg)、中(200 mg·kg)、低(100 mg·kg)剂量组及阳性药水飞蓟素(SLM)组。各给药组小鼠均连续灌胃给药14 d。除空白组外,其余各组小鼠自给药第一天起以TPGS 300 mg·kg的剂量连续灌胃14 d。最后一次造模12 h后收集小鼠血清与肝脏组织,通过肝脏病理切片苏木精-伊红染色(HE),并检测小鼠血清中天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平以及肝组织匀浆中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、总抗氧化能力(T-AOC)水平,观察与分析二十五味松石丸对TPGS致小鼠肝损伤的改善作用。3.将48只昆明小鼠随机分为空白组、APAP模型组、二十五味松石丸高(400mg·kg)、中(200 mg·kg)、低(100 mg·kg)剂量组和乙酰半胱氨酸(NAC)组。各给药组小鼠均连续给药14 d后,除空白组外,其余各组小鼠腹腔注射200mg·kg APAP,12 h后收集小鼠血清与肝脏组织。通过肝脏病理切片苏木精-伊红染色(HE),并检测小鼠血清中天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平以及肝组织匀浆中谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、总抗氧化能力(T-AOC)、过氧化氢酶(CAT)及髓过氧化物酶(MPO)水平,观察与分析二十五味松石丸对APAP致小鼠药源性肝损伤的改善作用。免疫组化法(IHC)检测小鼠肝脏半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)蛋白表达水平。ELISA法测定小鼠血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)与白介素6(IL-6)水平,Western blot法测定小鼠肝细胞核内核转录因子E2相关因子2(Nrf2)、细胞质Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)、肝脏内toll样受体4(TLR4)以及细胞核内核因子κB p65(NF-κB p65)蛋白表达,实时荧光定量PCR测定小鼠肝脏中谷氨酸半胱氨酸连接酶催化亚基(GCLC)、谷氨酸半胱氨酸连接酶修饰亚基(GCLM)、血红素氧合酶1(HO-1)、还原型辅酶/醌氧化还原酶1(NQO-1)基因m RNA相对表达水平,初步探究二十五味松石丸改善小鼠药源性肝损伤的作用机制。结果:1.与INH-RFP模型组比较,二十五味松石丸给药组小鼠肝脏病理损伤程度有所改善;肝脏系数有降低趋势,但无显著性差异;高剂量组小鼠血清AST水平以及中剂量组小鼠血清ALT水平有所降低;各给药组小鼠肝脏MDA水平有降低趋势,但无显著性差异;中剂量组小鼠肝脏SOD水平以及高剂量组小鼠肝脏GSH、T-AOC水平有所升高。2.与TPGS模型组比较,二十五味松石丸各给药组小鼠肝脏病理损伤程度有减轻的趋势。高剂量组小鼠肝脏系数有所降低,其它给药组小鼠肝脏系数有降低趋势,但无显著性差异;中剂量组小鼠血清AST水平以及各给药组小鼠血清ALT水平有所降低;中剂量组小鼠肝脏中MDA水平有所降低,其它给药组小鼠肝脏中MDA水平有降低趋势,但无显著性差异;低剂量组小鼠肝脏中SOD水平以及中剂量组小鼠肝脏T-AOC水平有所升高。3.与APAP模型组相比,二十五味松石丸给药组小鼠肝脏病理损伤程度有所改善;肝脏系数及血清AST、ALT水平有所降低;肝脏中GSH、SOD、CAT、T-AOC水平有所升高,MDA、MPO有所降低;caspase-3表达无显著性差异;血清TNF-α、IL-6水平有所降低;小鼠肝脏细胞质Keap1、细胞核NF-κB p65表达有所减少,细胞核Nrf2表达有所增加,肝脏TLR4表达无显著性差异;GCLC、

关键词：藏药二十五味松石丸药源性肝损伤核转录因子E2相关因子2 核因子-κB p65

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中藏药对西藏牦牛源沙门氏菌抑菌效果研究

黑龙江畜牧兽医 2023年第17期 72-77页

作者：李登宇李天娇班马泽郎张开琴孙心如王保宁索朗斯珠西藏农牧学院动物科学学院西藏林芝860006 四川大学华西基础医学与法学院成都610041

为了探究藏药合剂、中药及藏药对西藏牦牛源沙门氏菌的抑菌效果,试验以1株西藏牦牛源沙门氏菌H42为研究对象,选择5种藏药合剂、11种中药、14种藏药,采用超声波处理、煎煮浓缩等方法制备药物水煎剂;利用纸片法制备各种药物的药敏纸片,初... 详细信息

为了探究藏药合剂、中药及藏药对西藏牦牛源沙门氏菌的抑菌效果,试验以1株西藏牦牛源沙门氏菌H42为研究对象,选择5种藏药合剂、11种中药、14种藏药,采用超声波处理、煎煮浓缩等方法制备药物水煎剂;利用纸片法制备各种药物的药敏纸片,初步检测药物敏感性;采用微量肉汤稀释法测定中藏药的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC);并利用肉汤稀释棋盘法检测中藏药联合后对菌株的抑菌效果;同时选取部分效果较好的中藏药进行动物保护性试验和肝脏、盲肠载菌量测定试验。结果表明:H42菌株对诃子表现为极敏,对仁青芒觉、坐珠达西、肉桂、藏木香表现为高敏,对荜茇、石榴、岩白菜、草红花、干姜、地榆、黄连、白术表现为中敏,对其他中药、藏药表现为不敏感,对丁胺卡那、庆大霉素、环丙沙星均表现为敏感。仁青芒觉、诃子的MIC和MBC均为31.25 mg/mL,坐珠达西、藏木香的MIC和MBC均为62.50 mg/mL,地榆、黄连的MIC和MBC均为31.25 mg/mL。仁青芒觉与诃子联合用药效果最好,其联合抑菌指数(FICI)为0.5。灌胃中藏药组的小鼠死亡率明显降低,保护率均达50%及以上。灌胃中藏药后小鼠盲肠和肝脏的载菌量均显著或极显著降低(P藏药对牦牛源沙门氏菌H42有较好的抑菌效果,其中仁青芒觉、坐珠达西、地榆、黄连、诃子表现较好。

关键词：藏药合剂中药藏药沙门氏菌西藏牦牛抑菌活性治疗试验

藏药臭蒿抗肝内胆汁淤积性肝损伤的药效物质基础及药材质量标准研究

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藏药臭蒿抗肝内胆汁淤积性肝损伤的药效物质基础及药材质量标准研...

作者：陈思江西中医药大学

学位级别：硕士

臭蒿,为菊科蒿属植物,藏名汉译为“桑子那布”,其传统药用功效为清热凉血、退黄、消炎,自古以来藏医利用臭蒿治疗“赤巴”病,急性黄疸性肝炎和胆囊炎。《部颁药品标准(藏药第一册)》(1995年版)《常用藏药志》《中国藏药志》《甘肃中草... 详细信息

臭蒿,为菊科蒿属植物,藏名汉译为“桑子那布”,其传统药用功效为清热凉血、退黄、消炎,自古以来藏医利用臭蒿治疗“赤巴”病,急性黄疸性肝炎和胆囊炎。《部颁药品标准(藏药第一册)》(1995年版)《常用藏药志》《中国藏药志》《甘肃中草药资源志》《中华本草》等相关专著中记载臭蒿基原为菊科植物臭蒿Artemisia hedinii Ostenf.et Pauls.的干燥地上部分。目前,国内外关于臭蒿化学成分及药理活性的研究报道较少,前人研究中,发现倍半萜类化合物是其主要化学成分结构类型,该植物及其成分往往被作为抗炎、抗菌潜在药物而报道。同时,在《部颁药品标准(藏药第一册)》(1995年版)中仅有性状、粉末及理化鉴别规定,臭蒿药材质量标准也极不完善。为了验证藏药臭蒿的传统药用功效,探明其抗肝内胆汁淤积性肝损伤的药效物质基础,本文选用α-萘异硫氰酸酯(α-naphthylisothiocyanate,ANIT)作为造模剂,构建肝内胆汁淤积症小鼠模型,对臭蒿总提物及其各极性部位进行药效比较,筛选有效部位,并对有效部位进行较系统的化学成分分离,在此基础上对来自西藏地区的10批次臭蒿药材进行质量标准研究。具体研究内容如下。1.臭蒿抗肝内胆汁淤积性肝损伤的药效学评价及有效部位筛选。本实验选用ANIT(60 mg/kg)构建急性肝内胆汁淤积性肝损伤小鼠模型。13组小鼠,每组10只,组别分为正常组,模型组,阳性药组,臭蒿总提物、石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位及水部位均设置了高、低剂量组。根据臭蒿临床用量及前期预实验结果,高、低剂量组小鼠给药剂量分别定为2.4、0.8 g/kg的生药量。灌胃给药7天后取血、取肝,检测小鼠血清和肝组织匀浆中的相关指标,观察肝脏的形态学变化和组织病理学切片。结果表明:臭蒿总提物、乙酸乙酯部位和石油醚部位高/低剂量组均能显著降低小鼠血清中ALT、AST、ALP、TBIL、DBIL、TBA水平,升高小鼠肝组织中SOD、GSH水平,同时降低MDA活性,其他部位无显著性影响;这三个部位小鼠肝脏的形态学变化和组织病理结果也进一步表明其对于ANIT所致的小鼠肝脏受损情况有所缓解。因此确定了乙酸乙酯和石油醚部位为臭蒿抗肝内胆汁淤积性肝损伤的有效部位。2.臭蒿抗肝内胆汁淤积性肝损伤有效部位的化学成分研究。从乙酸乙酯和石油醚部位共分离鉴定了23个化合物,包括9个黄酮、5个倍半萜、4个苯丙素、2个聚乙炔、1个三萜、1个木脂素和1个酚酸。这些化合物分别为:Brickellin(CH1)、芹菜素(CH2)、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸(CH6)、Tetramethoxyflavone-2′-O-β-D-glucoside(CH8)、Rel-(2α,3β)-7-Omethylcedrusin(CH9)、(E)-tonghaosu(CH10)、(Z)-tonghaosu(CH11)、(9β,10α)-19-Norpregn-5-ene-11,20-dione(CH13)、2′,5,5′-Trihydroxy-3,4′,6,7-Artetourneforin B(CH18)、9-Oxo-6α,7α(H)-eudesm-4,11(13)-dien-12,6-olide(CH19)、木犀草素-5-O-β-D-葡萄糖苷(CH23)、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷(CH25)、11,12-Dihydroxyeudesm-4-en-3-one(CH33)、Hispiduloside(CH41)、5,5′-Trihydroxy-3,4′,7-tetramethoxyflavone-2′-O-β-D-glucoside(CH43)、4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸甲酯(CH50)、Ethyl 3,3′,4,4′-tetrahydroxy-δ-truxinate(CH51)、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸甲酯(CH53)、1,3-O-E-二咖啡酰基甘油(CH55)、木犀草素(CH60)、(7R,9S,10S)-9-Acetoxyeudesm-3,5,11(13)-trien-12-oic acid(CH62)、9β-Aceroxy4,5-dehydro-4(15)-dihydrocosric acid(CH63)、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷(CH69)。其中CH1、CH8、CH9、CH13、CH23、CH33、CH43、CH51这8个化合物为蒿属首分,其余15个化合物均为首次从臭蒿中分离得到。3.臭蒿药材质量标准研究。依据《中国药典》2020版四部通则,对来自西藏地区的10批次臭蒿药材进行质量标准研究,为建立其药材质量标准提供方法学参考。采用显微鉴别法对药材粉末特征进行描述;以(E)-Tonghaosu(CH10)和(Z)-Tonghaosu(CH11)为对照品,建立了薄层鉴别方法;检测了10批次臭蒿药材中水分、总灰分及醇溶性浸出物含量,其水分含量范围为

关键词：藏药臭蒿肝内胆汁淤积性肝损伤药效物质药效评价质量控制 HPLC

6种藏药对奶山羊乳房炎葡萄球菌的体外抑菌作用

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中国兽医杂志 2022年第11期58卷 33-38,43页

作者：邱芳侯思梦李芳娥顾庆云郭晶晶刘连杰周祥玲刘晓强西北农林科技大学动物医学院陕西杨凌712100 陕西省富平县畜牧兽医局陕西富平711700 西藏职业技术学院西藏拉萨850030 甘肃武山县畜牧兽医服务中心甘肃武山741300

奶山羊乳房炎是奶山羊常发疾病之一。本试验旨在测定獐牙菜、乌奴龙胆、钩藤、铁棒锤、甘青青兰和短穂兔耳草6种藏药对致奶山羊乳房炎葡萄球菌的体外抑菌活性。从陕西省富平县3个奶山羊养殖场采集患有乳房炎的奶山羊奶样55份进行病原菌... 详细信息

奶山羊乳房炎是奶山羊常发疾病之一。本试验旨在测定獐牙菜、乌奴龙胆、钩藤、铁棒锤、甘青青兰和短穂兔耳草6种藏药对致奶山羊乳房炎葡萄球菌的体外抑菌活性。从陕西省富平县3个奶山羊养殖场采集患有乳房炎的奶山羊奶样55份进行病原菌的分离和鉴定,采用微量稀释法测定所分离的葡萄球菌对常用抗菌药物的药敏性,利用K-B纸片琼脂扩散法测定6种藏药对所分离的葡萄球菌的体外抑菌活性。结果显示,55份乳样中共分离得到52种细菌,共计149株,其中葡萄球菌56株;药敏试验结果显示,受试葡萄球菌对β-内酰胺类抗菌药普遍耐药,且除金黄色葡萄球菌和溶血性葡萄球菌之外的其他葡萄球菌出现了多重耐药;6种藏药水提取物对受试葡萄球菌,特别是金黄色葡萄球菌有较强的抑制作用,抑菌圈直径为7.30~25.50 mm;其中短穂兔耳草对葡萄球菌的体外抑菌作用最强,其他依次为铁棒锤、钩藤、獐牙菜和甘青青兰,乌奴龙胆的作用较弱。本试验为综合开发藏药治疗奶山羊乳房炎提供了科学依据。

关键词：奶山羊乳房炎葡萄球菌藏药体外抑菌作用

基于网络药理学和实验验证的藏药十味乳香散治疗急性痛风性关节炎分子机制探究

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高原科学研究 2023年第3期7卷 71-85页

作者：刘贝柳永明陈耀龙李依奇赵建栋甘肃中医药大学甘肃兰州730000 甘肃省中医院甘肃兰州730000

目的:探讨藏药十味乳香散(SWRXS)治疗急性痛风性关节炎(Acute Gouty Arthritis,AGA)的作用机制。方法:利用TCMSP、CNKI及PubMed查阅文献收集药物的化学成分,借助化源网、PubChem、SwissADME、SwissTargetPrediction及Cytoscape筛选SWRXS的靶点及核心活性成分;依托Drugbank、OMIM、GeneCards疾病数据库收集AGA的相关靶点。将SWRXS及AGA交集靶点进行拓扑分析,筛选核心靶点;使用Metascape进行GO和KEGG富集分析,微生信可视化。建立AGA大鼠模型,观察SWRXS对AGA大鼠关节肿胀度、步态、血清炎症因子IL-1β、TNF-α、滑膜组织病理形态的影响,进一步验证其作用机制。结果:通过网络药理学分析发现,SWRXS的核心成分主要包括槲皮素、山柰酚、木犀草素、鞣花酸、异鼠李素等,核心靶点包括TNF、IL6、PTGS2、SRC、IL1B等,核心通路包括NF-κB、TLRs、JAK-STAT、PI3K-Akt等。动物实验结果显示,SWRXS可以减轻AGA模型大鼠的关节肿胀程度,降低大鼠血中炎症因子TNF-α、IL-1β的含量,使滑膜细胞增生及炎症细胞浸润均明显减轻。结论:十味乳香散通过多种化合物作用于多个通路、多个靶点发挥其对AGA的治疗作用,其中活性成分槲皮素、山奈酚、木犀草素等可能通过作用于TNF、IL1B等靶点,进而通过NF-κB、TLRs、JAK-STAT、PI3K-Akt等信号通路产生抑制炎症反应、减弱氧化应激反应、增加嘌呤化合物代谢和抑制破骨细胞过度增殖等方面的分子效应。

关键词：网络药理学十味乳香散急性痛风性关节炎信号通路藏药

基于数据挖掘和网络药理学的藏药抗缺氧分子机制研究

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高原科学研究 2023年第2期7卷 60-70页

作者：方龙伟秀措吉央拉多吉卓玛巴桑卓玛西藏大学高原健康科学研究中心西藏拉萨850000 西藏自治区拉萨市城关区吉日社区卫生服务中心西藏拉萨850000

目的:采用数据挖掘、网络药理学和分子对接方法探讨藏药抗缺氧的作用机制和物质基础。方法:通过收集中国知网、PubMed数据库和《藏药部颁标准》中关于藏药抗缺氧的处方资料,使用SPSS Modeler软件进行用药组方和关联规则分析,筛选出高频... 详细信息

目的:采用数据挖掘、网络药理学和分子对接方法探讨藏药抗缺氧的作用机制和物质基础。方法:通过收集中国知网、PubMed数据库和《藏药部颁标准》中关于藏药抗缺氧的处方资料,使用SPSS Modeler软件进行用药组方和关联规则分析,筛选出高频核心药组。从TCMSP数据库获取核心药组的活性成分、靶点,从GeneCards平台数据库收集缺氧疾病靶点;运用String数据库、Cytoscape软件、R软件等对药物-疾病交集靶点进行PPI、GO、KEGG通路分析;利用AutoDock等软件对核心活性成分和核心靶蛋白进行分子对接。结果:共获得180个藏药处方,116个高频方剂,共计247味藏药,23味高频中药,进一步关联分析得到高频药组6个。应用网络药理学对核心药组“木香+丁香+肉豆蔻+余甘子+诃子”的抗缺氧作用机制进行探索,发现31个化合物可作为主要的抗缺氧活性成分,其关键抗缺氧活性靶点60个,富集了PI3KAkt、HIF-1、激素的反应、蛋白激酶活性、线粒体外膜等通路1527个。分子对接分析进一步验证了豆甾醇、山奈酚等不同类别分子与靶点结合能力较强。结论:传统处方与数据库及网络药理学等方法并重,发现藏药可能是通过药物分子调节体内氧化应激因子、呼吸通路、代谢通路等来调控体内氧气运输、利用体系,从而多组分、多靶点、多通路达到抗缺氧作用。

关键词：抗缺氧藏药数据挖掘网络药理学分子机制

奶山羊乳房炎主要致病菌的分离鉴定及藏药对其抗菌活性研究

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奶山羊乳房炎主要致病菌的分离鉴定及藏药对其抗菌活性研究

作者：邱芳西北农林科技大学

学位级别：硕士

陕西省是我国主要的奶山羊养殖的省份之一,富平县作为陕西省奶山羊产业发展的领头羊,占到全省奶山羊存栏和羊乳产量的30%。乳房炎是奶山羊养殖中最为常见的疾病之一。近年来随着陕西奶山羊养殖业的迅速发展,乳房炎问题同样也日益突出,... 详细信息

陕西省是我国主要的奶山羊养殖的省份之一,富平县作为陕西省奶山羊产业发展的领头羊,占到全省奶山羊存栏和羊乳产量的30%。乳房炎是奶山羊养殖中最为常见的疾病之一。近年来随着陕西奶山羊养殖业的迅速发展,乳房炎问题同样也日益突出,特别是在管理措施不到位的散养户以及小规模养殖户。乳房炎的发生不仅造成动物泌乳量减少,乳品质量降低,且有害细菌浓度超标,甚至造成哺乳动物死亡。奶山羊乳房炎不仅给奶山羊养殖造成严重损失,并严重危害消费者健康。1.奶山羊乳房炎主要病原菌分离鉴定、致病性及耐药性分析。为探究引起奶山羊乳房炎的致病菌,本试验于2020年2月至2021年7月从陕西省富平县6个奶山羊养殖场共采集得到患有临床型乳房炎的奶山羊奶样55份,经分离鉴定得到149株细菌,其中葡萄球菌56株(37.58%)、埃希菌30株(20.13%)、芽孢杆菌11株(7.38%)、克雷伯氏杆菌10株(6.71%)、变形杆菌为10株(6.71%)、柠檬酸杆菌6株(4.03%)、拉乌尔菌4株(2.68%)、肠球菌2株(1.34%),其他菌株20株(13.43%)。对分离的金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌进行了小鼠致病性试验,从小鼠临床表现、死亡小鼠的剖解特征及病理组织切片情况分析金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌的致病性,结果显示24 h内所有试验组小鼠均出现不同程度的病理症状,小鼠出现蜷缩畏冷、精神沉郁、卧底不起、呼吸急促和食欲废绝等临床症状,金黄色葡萄球菌组尤为明显。剖解试验组死亡小鼠后发现其心脏、肝脏、肺脏和脏均有不同程度出血及肿胀,病理组织学切片观察发现金黄色葡萄球菌组小鼠的肝脏、肾脏和肺脏出现明显的病理改变,根据小鼠存活曲线,金黄色葡萄球菌致病力较强。为跟踪了解所分离的奶山羊乳房炎主要致病菌的耐药性情况,本试验选取β-内酰胺类、多肽类、四环素类、大环内酯类、喹诺酮类、氨基糖苷类、酰胺醇类等7类,14种常见抗菌药物,采用CLSI推荐的微量稀释法对所分离的30株大肠埃希菌以及包括27株金黄色葡萄球菌在内的56株葡萄球菌进行类体外药物敏感性试验。结果显示大肠埃希菌几乎对所有的抗菌药物都存在不同程度的耐药性,耐药种类数多于金黄色葡萄球菌。大肠埃希菌对头孢曲松钠、卡那霉素及四环素类高度耐药,对头孢噻肟钠、头孢噻呋及阿米卡星较为敏感。金黄色葡萄球菌对头孢噻呋、多西环素、恩诺沙星均耐药,对卡那霉素及氟苯尼考高度敏感。其余葡萄球菌都具有不同程度的耐药情况。上述结果表明奶山羊乳房炎致病菌耐药情况较为普遍,寻找临床替代药物刻不容缓。2.奶山羊乳房炎源金黄色葡萄球菌与大肠埃希菌耐药基因及毒力基因检测。了阐明富平奶山羊乳房炎主要致病菌金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌的毒力基因和耐药基因的流行情况,利用PCR方法对所分离的27株金黄色葡萄球菌及30株大肠埃希菌进行了相关基因检测分析。结果表明在金黄色葡萄球菌中检测到Hla、Hlb、PVL、TSST-1、SEA、SEB、Fn BPA与Clfa,其中溶血素基因Hla与Hlb检出最高,为9株(33.34%),除SEC基因外,其余各毒力基因分别在3株(11.12%)菌株发现,其中同一菌株所携带毒力基因种类数最多为4种。15株金黄色葡萄球菌携带mec A基因,占总数的55.56%。检测了HPI毒力岛、LEE毒力岛、溶血素、P菌毛、S菌毛、F17菌毛等13个毒力基因在所分离的大肠埃希菌的流行情况,未检测到相关基因。在受试大肠埃希菌中,检测出含β-内酰胺类bla基因3株,占比为10%。3.6种藏药体外抑菌活性研究。为了研究藏药对奶山羊乳房炎病原菌的的抗菌活性选取短穗兔耳草、甘青青兰、钩藤、獐芽菜、乌奴龙胆、铁棒锤等6种藏药,采用琼脂纸片扩散K-B法对分离的30株大肠埃希菌及56株葡萄球菌进行药物敏感性试验,分析其对受试菌的体外抑菌活性。结果显示,6种藏药的水提物和醇提取物对受试菌有显著的体外抑菌活性,尤其对葡萄球菌,抑菌圈直径范围7.3-26.5 mm。短穂兔耳草的抗菌作用最强,所有受试的致病菌对其高度敏感。其次为铁棒锤,除科尼葡萄球菌外其他受试葡萄球菌也对其高度敏感。受试菌株对钩藤、獐牙菜和甘青青兰中度敏感。大多数受试菌对乌奴龙胆轻度敏感或不敏感。除短穗兔耳草与獐牙菜的水提物对于大肠埃希菌的抑菌效果较其醇提物更为显著之外,其余藏药的醇提取物均比藏药水提取物抑菌活性要强。六种藏药提取物的抗菌活性总体来说短穂兔耳草>铁棒锤>钩藤>獐牙菜>甘青青兰>乌奴龙胆。上述结果表明藏药在治疗奶山羊乳房炎方面具有潜在价值。

关键词：奶山羊乳房炎病原菌藏药抗菌活性毒力基因

4种藏药提取物对牦牛源产气荚膜梭菌的抑菌效果研究

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4种藏药提取物对牦牛源产气荚膜梭菌的抑菌效果研究

作者：蔡重振西藏农牧学院

学位级别：硕士

产气荚膜梭菌常引起牦牛急性腹泻,出血性肠炎以及实质器官出血坏死,严重影响西藏当地牦牛养殖业的健康发展。现阶段,对于该病的防治主要依赖抗生素的使用,然随之出现的细菌耐药性问题也愈加严重。部分藏药及其中分离的单体物质已被证实... 详细信息

产气荚膜梭菌常引起牦牛急性腹泻,出血性肠炎以及实质器官出血坏死,严重影响西藏当地牦牛养殖业的健康发展。现阶段,对于该病的防治主要依赖抗生素的使用,然随之出现的细菌耐药性问题也愈加严重。部分藏药及其中分离的单体物质已被证实对产气荚膜梭菌具有一定的抑菌效果,或可研发为新的抗菌药物,替代抗生素的使用,防止细菌耐药性的产生。本试验采集西藏林芝市牦牛腹泻粪便样品87头份,对样品中的产气荚膜梭菌进行分离鉴定、毒素分型、菌株耐药性及耐药基因检测;对有止泻、清热解毒功能的藏药单药利用水、75%乙醇、甲醇进行提取,药敏试验筛选出对牦牛源产气荚膜梭菌具有抑菌效果的藏药提取物;采用微量二倍稀释法、棋盘法检测12种常用抗生素及藏药提取物对产气荚膜梭菌的最小抑菌浓度,并检测藏药提取物与抗生素联用对耐药菌株的抑菌效果;最后,对分离的产气荚膜梭菌生物被膜的成膜能力,抗生素与藏药提取物联用对生物被膜的抑制效果进行检测,利用Real-Time PCR技术探究藏药提取物对产气荚膜梭菌生物被膜成膜及孢子形成相关基因表达的影响。得到以下研究结果:1.从87份牦牛腹泻粪便样品中分离鉴定得到20株产气荚膜梭菌,其中17株为A型,3株为D型。药敏结果显示,分离株对氨基糖苷类药物耐药率分别为庆大霉素85.0%、卡那霉素90.0%,对多粘菌素B、磺胺甲噁唑的耐药率分别为80.0%、85.0%;对头孢唑啉、头孢噻吩、多西环素、米诺霉素100.0%敏感;35.0%的菌株4重耐药,甚至出现6重及7重耐药的情况。检测到抗喹诺酮类qnr S、aac（6'）-Ib基因,抗氨基糖苷类aac（6'）/aph（2''）基因,抗氟苯尼考类flor基因,抗β-内酰胺类bla 基因,抗四环素类tet M、tet A（P）、tet B（P）基因,抗磺胺类sul2、sul3基因,共10种耐药基因。表明西藏存在牦牛源产气荚膜梭菌的流行,并存在不同程度的耐药情况,提示我们需持续监测产气荚膜梭菌的流行及耐药情况,注重临床合理用药,可考虑采取多种药物交叉应用,避免超级细菌的出现。2.4种藏药各取100 g,采用3种方法对其进行提取。结果显示:石榴子水提取量最大,为34.20 g;其次为75%乙醇提取的白硇砂及石榴子,分别为29.10 g、28.33 g;而寒水石的提取量最低,均小于3.00 g。水提取的24种藏药中马兜铃抑菌效果较好,在药敏纸片浓度为102.4 g/L时表现为极敏（≥20.0 mm）;75%乙醇提取的24种藏药中,马兜铃及诃子的抑菌效果较好,其次为波棱瓜子和白豆蔻;各类藏药甲醇提取物抑菌效果较好的马兜铃在药敏纸片浓度为51.2 g/L时仍表现为极敏（≥20.0 mm）。表明藏药提取物具有一定的抑菌效果,可作为产气荚膜梭菌的预防、治疗药物进一步研究,以期寻找到能替代抗生素且经济实惠的藏药。3.4种藏药的提取物对产气荚膜梭菌的MIC检测结果显示:水提取的波棱瓜子及白豆蔻最小抑菌浓度均>25.6 g/L,水提诃子对45.0%的产气荚膜梭菌MIC≤0.8 g/L;波棱瓜子75%乙醇提取物抑菌效果较好,对所有分离株的MIC均≤0.4 g/L,其次为马兜铃75%乙醇提取物对95.0%的菌株MIC≤0.4 g/L;马兜铃甲醇提取物对所有分离株的MIC均≤0.4 g/L,波棱瓜子甲醇提取物对所有分离株的MIC均≤0.8 g/L。20株产气荚膜梭菌均对氯霉素耐药,对庆大霉素及多粘菌素B的耐药率较高,均为95.0%;分离株均对强力霉素、头孢噻吩、克林霉素、万古霉素敏感。联合药敏试验结果显示,诃子75%乙醇提取物与庆大霉素联用效果较好,对7株产气荚膜梭菌产生协同作用,其次为马兜铃甲醇提取物与庆大霉素或多粘菌素B联用的药物组合,均对6株产气荚膜梭菌产生协同作用。表明藏药具有抑菌增效的作用,但同种药物组合对同种细菌不同分离株的作用存在差异,表现为协同、累加、无关与拮抗四种不同作用,需进一步对藏药抑菌机制进行研究。4.对20株产气荚膜梭菌的生物被膜成膜能力进行检测发现所有分离株均有成膜能力,55.0%的产气荚膜梭菌具有强成膜能力。不同浓度单药对生物被膜的抑制效果显示,抗生素中多粘菌素B对生物被膜的抑制作用最强,在1/4 MIC处仍有强抑制效果;藏药提取物中,马兜铃甲醇提取物与诃子75%乙醇提取物对生物被膜的抑制效果较好,在1/2 MIC处有强抑制效果。抗生素与藏药提取物联用结果显示,庆大霉素与诃子75%乙醇提取物联用及多粘菌素B与马兜铃甲醇提取物联用对生物被膜的抑制效果较好,在两者均为1/4 MIC浓度时仍有强抑制作用;4种藏药提取物对产气荚膜梭菌生物被膜形成相关基因agr B、htr A、abr B、arg G、rib D、rib E,孢子形成相关基因sig K、cod Y、spo0A、min D表达具有一定影响。表明4种藏药提取物对成膜能力较强的产气荚膜梭菌生物被膜的形成具有抑制作用,与抗生素联用能增强其抑制效果

关键词：产气荚膜梭菌牦牛耐药性藏药生物被膜