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薄荷醇在Caco-2细胞模型中的促吸收机制研究

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薄荷醇在Caco-2细胞模型中的促吸收机制研究

作者：王爱娟广东药科大学

学位级别：硕士

目的:以Caco-2细胞为模型,从细胞和分子水平考察薄荷醇促吸收作用与P-糖蛋白(P-gp)的关系,以及是否是通过NF-кB信号传导通路来调控P-gp的表达,为薄荷醇应用于临床,作为药物肠道吸收促进剂奠定基础。方法:1.药物对Caco-2细胞毒性范围配... 详细信息

目的:以Caco-2细胞为模型,从细胞和分子水平考察薄荷醇促吸收作用与P-糖蛋白(P-gp)的关系,以及是否是通过NF-кB信号传导通路来调控P-gp的表达,为薄荷醇应用于临床,作为药物肠道吸收促进剂奠定基础。方法:1.药物对Caco-2细胞毒性范围配制不同浓度梯度的薄荷醇、P-gp抑制剂维拉帕米、NF-кB信号通路抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸钠简称PDTC(Ammonium pyrrolidinedithiocarbamate),利用Caco-2细胞进行毒性实验,酶标仪测定OD值,确定Caco-2细胞存活率不小于90%的各给药浓度,同时设定薄荷醇的高、中、低三个浓度组。2.药物对Caco-2细胞的时效毒性用确定的薄荷醇、维拉帕米、PDTC对于Caco-2细胞的敏感药物剂量进行时效毒性研究。使各组药物作用Caco-2细胞,并在5个时间点(1h、2h、12h、24h、48h)分别加入CCK-8,测定各组OD值,观察给药后不同时间点Caco-2细胞的存活率。3.薄荷醇对Caco-2细胞中MDR1基因及P-gp蛋白表达影响将低浓度薄荷醇组、中浓度薄荷醇组、高浓度薄荷醇组、维拉帕米组、PDTC组分别给药Caco-2细胞,在5个时间点(1h、2h、12h、24h、48h)分别提取各组的RNA及总蛋白,用荧光定量PCR技术和western blot技术观察MDR1基因与P-gp蛋白的表达量。4.薄荷醇对Caco-2细胞NF-кB信号通路的影响三个浓度组的薄荷醇、维拉帕米、PDTC分别给药Caco-2细胞,在5个时间点(1h、2h、12h、24h、48h)提取RNA和总蛋白,用荧光定量PCR技术和western blot技术分别测定Ik Bα基因和蛋白表达量。另外,分离给药5个时间点后Caco-2细胞的胞核及胞浆蛋白,用western blot技术考察胞浆中p65蛋白向胞核迁移情况,以此来评价不同浓度薄荷醇对NF-кB信号通路的影响。结果:1.对Caco-2细胞给药浓度的确定CCK-8药物毒性实验结果显示,薄荷醇给药浓度不高于16μM时,Caco-2细胞的存活率>90%,因此,以2μM、8μM、16μM分别为薄荷醇的低、中、高浓度组。维拉帕米及PDTC给药浓度分别为不高于25μM和100μM时,Caco-2细胞的存活率>90%。2.各组药物对Caco-2细胞时间与毒性关系以低、中、高薄荷醇组、维拉帕米25μM、PDTC 100μM分别给药Caco-2细胞,作用5个时间点(1h、2h、12h、24h、48h)后,各组药物对应的Caco-2细胞的存活率均不小于90%。3.薄荷醇对Caco-2细胞MDR1基因及P-gp蛋白表达的影响荧光定量PCR结果显示,与对照组相比,维拉帕米组和PDTC组在5个时间点(1h、2h、12h、24h、48h)对MDR1的表达都有显著的抑制作用(P薄荷醇组在前3个时间点(1h、2h、12h)对MDR1的抑制效果明显(P薄荷醇组于前3个时间点对MDR1的表达有一定的抑制作用(P薄荷醇组与对照组相比对MDR1的作用无统计学意义。Western blot结果显示,不同浓度薄荷醇在不同时间点对P-gp表达的影响趋势与对MDR1的抑制效果基本一致。4.薄荷醇对Caco-2细胞NF-кB信号通路的影响荧光定量PCR结果显示,与对照组相比,低浓度薄荷醇组、维拉帕米组、PDTC组在前3个时间点(1h、2h、12h)对Ik Bα基因的表达有显著的诱导作用(P薄荷醇组对Ik Bα基因的诱导作用有所减弱(P薄荷醇组和高浓度薄荷醇组在5个时间点对Ik Bα基因表达的诱导作用无统计学意义。Western blot结果显示,与对照组比较,低浓度薄荷醇在前4个时间点(1h、2h、12h、24h)显著诱导Ik Bα蛋白的表达(P薄荷醇组和高浓度薄荷醇组在前3个时间点(1h、2h、12h)对Ik Bα蛋白的表达有诱导作用(P薄荷醇组、维拉帕米组、PDTC组在5个时间点(1h、2h、12h、24h、48h)均可有效的抑制p65蛋白从细胞质迁移至细胞核(P薄荷醇组及高浓度薄荷醇

关键词：薄荷醇 P-gp NF-кB Caco-2细胞促吸收机制

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薄荷醇的合成新工艺

化学世界 2000年第5期41卷 237-239页

作者：聂丽娟李响敏秦中江西中德联合研究院江西南昌330047

以柠檬桉叶油为主要原料经环化、催化氢化二步反应得到薄荷醇。在环化反应中 ,考察了温度、环化剂、反应物浓度、反应器类型对反应的影响 ,得出反应产率达70 %～ 75 %。在氢化反应中 ,经过对反应时间、温度、压力、催化剂用量及催化剂... 详细信息

以柠檬桉叶油为主要原料经环化、催化氢化二步反应得到薄荷醇。在环化反应中 ,考察了温度、环化剂、反应物浓度、反应器类型对反应的影响 ,得出反应产率达70 %～ 75 %。在氢化反应中 ,经过对反应时间、温度、压力、催化剂用量及催化剂套用等条件的探讨 ,将氢化压力由文献报道的 10 MPa降至 0 .3 MPa,产率近 10 0 %。实验表明此合成工艺简单 ,条件温和 ,易于工业化生产。

关键词：柠檬桉叶油薄荷醇合成环化催化氢化

薄荷醇临时固型后遗迹加固剂介入土遗迹时机研究

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薄荷醇临时固型后遗迹加固剂介入土遗迹时机研究

作者：王春燕陕西师范大学

学位级别：硕士

出土文物受材质、埋藏环境和出土后环境因素影响,脆弱的遗迹和遗物有可能瞬间卷曲、干裂、脱落,以至于迹象消失;还有些文物相互叠加,层次复杂,发掘现场不易清理,需要提取到实验室,进行“实验室考古”。为了确保遗迹遗物的安全,采取物理... 详细信息

出土文物受材质、埋藏环境和出土后环境因素影响,脆弱的遗迹和遗物有可能瞬间卷曲、干裂、脱落,以至于迹象消失;还有些文物相互叠加,层次复杂,发掘现场不易清理,需要提取到实验室,进行“实验室考古”。为了确保遗迹遗物的安全,采取物理和化学方法进行临时加固,逐渐成为业界的通行做法。薄荷醇是目前国际上临时固型遗迹应用较多的新型化学材料,具有熔化温度低、临时固型后能自然挥发,没有残留、不影响遗迹外貌、后期处理方便、临时固型性能良好等优点。不过,薄荷醇在完成固型使命后,随着这种材料的不断挥发,土遗迹有可能面临着松散、酥解和坍塌等风险,需要适时使用遗迹加固剂,对遗迹采取及时有效的加固,以保证遗迹在后期的存放、展览、移动过程中的完整性和牢固性。但是,加固剂究竟是在临时固型后多长时间介入,也就是说,在薄荷醇挥发到什么程度介入,才能使遗迹得到最有效的保护加固,业界并无统一认识。聚乙烯醇缩丁醛（PVB）、丙烯酸树脂（B72）和正硅酸乙酯（TEOS）是文物保护领域最常使用的三种遗迹加固剂。三种加固剂与薄荷醇临时固型剂相结合的最佳时机,业界尚无人探讨。为了在实际应用中对薄荷醇临时固型后的土遗迹达到好的加固效果,通过模拟实验的方法,对薄荷醇临时固型后的土块,当挥发量达到30%、60%、90%时,用以上三种加固剂分别进行加固。从外观形貌变化和耐水性两个土遗迹保护指标考察土块的加固效果,其中外观形貌主要包括土块颜色变化和土块是否完整两个方面。加固后的土块与加固前相比,如果颜色在允许变化范围内（△E值,以空白土样为标准,仪器测量加固后土块的颜色变化值△E值≤6）,完整度没有变化,且有较强的耐水性,即表明效果良好,也就是恰当的介入时机。实验结果表明,遗迹加固剂在薄荷醇挥发不同阶段介入,加固效果不同。1.聚乙烯醇缩丁醛在薄荷醇固型后加固土块.土块外观形貌,在薄荷醇挥发30%时,土块颜色变化Δ E值为2.04,有少量土渣掉落。薄荷醇挥发60%时,土块颜色变化Δ E值为2.07,土块完整性好。薄荷醇挥发90%时,土块颜色变化Δ E值为8.21,土块形貌完整,但Δ E值8.21,远大于遗迹加固后颜色允许变化范围Δ E值≤6,不符合对遗迹加固后外观形貌要求。薄荷醇挥发60%时外观形貌最优。耐水性实验中,薄荷醇挥发90%时加固后土块,在水里的发生变化时间晚于薄荷醇挥发60%和30%。薄荷醇挥发90%时加固的土块在水里浸泡后的最终完整性,效果最优。结合土块的外观形貌和耐水性,薄荷醇挥发60%时聚乙烯醇缩丁醛加固土块时机较好。但是建议在后期工作中,在薄荷醇挥发60%～90%之间继续实验,找到最佳保护时机。2.丙烯酸树脂（B72）在薄荷醇固型后加固土块,外观形貌方面,在薄荷醇挥发30%时加固剂介入,土块颜色变化Δ E值为4.47,土块完整。薄荷醇挥发60%时,土块颜色变化Δ E值为3.27,土块完整。薄荷醇挥发90%时,土块颜色变化ΔE值为9.74,土块上、下边缘一圈有土块疏松掉渣情况,土块有裂缝。薄荷醇挥发30%时加固的土块外观形貌较好。耐水性方面,在薄荷醇挥发30%时加固剂介入,入水5分钟后上表面呈成壳状,周围、内部成粉末状脱落。薄荷醇挥发60%时介入,入水瞬间四周和底部迅速溃散,30秒内土块呈壳状。薄荷醇挥发90%时介入,试样土块内部溃散严重,外表壳厚较完整,加固剂渗透深度较深（壳较厚）。随着薄荷醇挥发量加大,丙烯酸树脂（B72）加固后的土块颜色逐渐加深,土块完整性逐渐变差。在耐水性试验中,三个阶段加固剂介入后的土块水中溃散严重,耐水性都不理想。不推荐丙烯酸树脂在薄荷醇挥发过程中介入加固遗迹。3.正硅酸乙酯在薄荷醇固型后加固土块,外观形貌方面,在薄荷醇挥发30%时加固剂介入,土块颜色变化ΔE值为2.33,土块有掉渣现象。薄荷醇挥发60%时加固剂介入,土块颜色变化ΔEe值为4.1,掉渣严重,有较大土块脱落。薄荷醇挥发90%时加固剂介入,土块颜色变化Δ E值为1.71,土块四周有疏松现象。薄荷醇挥发90%时加固土块的土块耐水实验中,溃散最慢,土块耐水完整度较好,加固效果最好。在薄荷醇挥发的三个阶段,正硅酸乙酯介入,土块完整性均不好,土块外观形貌不合格,正硅酸乙酯不适合在薄荷醇挥发过程介入遗迹加固。

关键词：土遗迹保护薄荷醇临时固型材料遗迹加固剂加固剂介入时机

配合Pd催化剂薄荷醇与异丁烯羰基合成Validol

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分子催化 2007年第3期21卷 249-254页

作者：王承学孙敬茹孙德长春工业大学化工学院吉林长春130012 中国科学院长春应用化学研究所吉林长春130012

用PdCL2(PPh3)2/PPh3/P-CH3C6H4SO3H复合催化体系,在间歇高压釡中,以二甲苯为溶剂,在一定的反应温度、CO/H2压力和薄荷醇与异丁烯浓度下,研究了主催化剂浓度和各种助催化剂的配比对薄荷醇转化率和反应速度的影响.在适宜的催化体系和反... 详细信息

用PdCL2(PPh3)2/PPh3/P-CH3C6H4SO3H复合催化体系,在间歇高压釡中,以二甲苯为溶剂,在一定的反应温度、CO/H2压力和薄荷醇与异丁烯浓度下,研究了主催化剂浓度和各种助催化剂的配比对薄荷醇转化率和反应速度的影响.在适宜的催化体系和反应体系中,进行了反应物的转化率、Validol的选择性和收率与反应时间关系实验.对98%以上Validol产物进行了FT-TR、MS、13C NMR和1H NMR鉴别.最后,完成了反应温度、CO压力和薄荷醇、异丁烯浓度对羰基合成Validol反应速度的影响实验,提出了该反应的反应机理和催化循环过程.

关键词：配合钯催化剂薄荷醇异丁烯羰基合成反应机理

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薄荷醇的微胶囊化及其性能分析

食品工业 2013年第7期34卷 140-142页

作者：朱丽云杨君高永生张高帆张拥军中国计量学院生命科学学院杭州310018 浙江中烟工业有限责任公司杭州310012

研究薄荷醇微胶囊的包埋率、表观结构、粒径分布和释放规律。通过光学显微镜、扫描电镜观察薄荷醇微胶囊的形貌特征,激光粒度分析仪测定微胶囊的粒径分布,对-二甲胺基苯甲醛比色法测定不同温度、条件下微胶囊化薄荷醇的含量变化,考察其... 详细信息

研究薄荷醇微胶囊的包埋率、表观结构、粒径分布和释放规律。通过光学显微镜、扫描电镜观察薄荷醇微胶囊的形貌特征,激光粒度分析仪测定微胶囊的粒径分布,对-二甲胺基苯甲醛比色法测定不同温度、条件下微胶囊化薄荷醇的含量变化,考察其释放特性。薄荷醇微胶囊表面圆整、致密,粒径分布集中在5.5～10.87μm之间,能较好的分散于70%乙醇中;在25℃和45℃下微胶囊化薄荷醇的释放与未包埋薄荷醇存在显著差异(p<0.05)。

关键词：薄荷醇微胶囊表征释放

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PGSS技术制备薄荷醇/棕榈酸复合颗粒

化工进展 2011年第S1期30卷 313-315页

作者：朱林静 ANYEMEDU Kofi Asare 蓝洪桥洪燕珍苏玉忠王宏涛李军厦门大学化学化工学院化学工程与生物工程系福建厦门361005 中国烟草福建中烟工业技术中心福建厦门361022

用PGSS技术研究制备薄荷醇/棕榈酸的复合颗粒,研究了不同薄荷醇/棕榈酸组成,不同预膨胀温度和预膨胀压力下所制备的复合颗粒的粒径和粒径分布,并进行了薄荷醇释放速率的表征。结果表明,PGSS技术制备粒径为10～20μm的薄荷醇/棕榈酸微颗... 详细信息

用PGSS技术研究制备薄荷醇/棕榈酸的复合颗粒,研究了不同薄荷醇/棕榈酸组成,不同预膨胀温度和预膨胀压力下所制备的复合颗粒的粒径和粒径分布,并进行了薄荷醇释放速率的表征。结果表明,PGSS技术制备粒径为10～20μm的薄荷醇/棕榈酸微颗粒,在所研究范围内操作条件对制备的颗粒的大小和分布影响不大,但薄荷醇/棕榈酸的组成对薄荷醇释放速率有明显的影响。

关键词：薄荷醇棕榈酸 PGSS 复合颗粒

功效函数法评价薄荷醇与月桂氮芯卓酮对双氯芬酸钠的透皮吸收

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中国医院药学杂志 2009年第7期29卷 528-531页

作者：王晖郭源源陈垦梁庆薛漫清广东药学院中药药理教研室广东广州510006 广东药学院护理学院广东广州510310

目的:探讨功效函数法在透皮吸收促进剂促透效果综合评价中的应用。方法:在双室透皮扩散装置上进行离体动物皮肤透皮吸收实验,不同时间取样,测定薄荷醇与月桂氮卓芯酮单用及联用组接受液中双氯芬酸钠的浓度,计算稳态流量、渗透系数和滞... 详细信息

目的:探讨功效函数法在透皮吸收促进剂促透效果综合评价中的应用。方法:在双室透皮扩散装置上进行离体动物皮肤透皮吸收实验,不同时间取样,测定薄荷醇与月桂氮卓芯酮单用及联用组接受液中双氯芬酸钠的浓度,计算稳态流量、渗透系数和滞后时间3个指标,采用功效函数法进行多指标的综合评价,依据指标的权重,计算各方案的综合权值并进行比较,其值最大的为最优方案。结果:不同组别的稳态流量和渗透系数相比较,其顺序依次为1%月桂氮芯卓酮>2%薄荷醇>1%薄荷醇>1%月桂氮芯卓酮+1%薄荷醇>1%月桂氮芯卓酮+2%薄荷醇>无促透剂组;而不同组别的时滞比较,其顺序依次为无促透剂组>1%月桂氮卓芯酮+1%薄荷醇>1%月桂氮芯卓酮+2%薄荷醇>1%月桂氮卓芯酮>2%薄荷醇>1%薄荷醇。功效函数法算得的最优组方为1%月桂氮卓芯酮。结论:功效函数法可作为促透剂综合评价的一种新方法。

关键词：功效函数法薄荷醇月桂氮革酮双氯芬酸钠透皮吸收

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薄荷醇缓解胃食管反流的机制研究及技术研发

薄荷醇缓解胃食管反流的机制研究及技术研发

作者：张志明江南大学

学位级别：硕士

胃食管反流病是一种常见的多发性消化道疾病,发病过程中多呈现烧心、反酸等不适症状,一定程度上影响了患者的生活质量,如若长期得不到良好的治疗,更会引发食管炎、食管癌等严重疾病。目前的常规治疗方法对于较为敏感的特殊人群具有一定... 详细信息

胃食管反流病是一种常见的多发性消化道疾病,发病过程中多呈现烧心、反酸等不适症状,一定程度上影响了患者的生活质量,如若长期得不到良好的治疗,更会引发食管炎、食管癌等严重疾病。目前的常规治疗方法对于较为敏感的特殊人群具有一定的风险,因此,研发针对胃食管反流的新型特医食品具有重要的临床意义。Transient receptor potential vanilloid 1（TRPV1）是一种瞬时感受电位通道,在机体疼痛反应和炎症发生过程中起到决定性的作用。以往研究发现,TRPV1在食管神经细胞中参与了“灼烧感”的神经信号传递过程,与胃食管反流病的发生发展有重要联系。然而,作为对反流过程中胃酸刺激首当其冲的食管上皮细胞,其TRPV1参与的胃食管病理过程的机制尚不明朗。本研究通过酸性溶液模拟反酸微环境,在人食管上皮细胞（HET-1A）以及小鼠胃食管反流病模型中进行TRPV1参与胃食管反流的机制研究;并从食药同源分子的角度出发,筛选了可行性较高的TRPV1靶向抑制成分——薄荷醇,对其治疗效果进行了一系列功能验证。主要研究内容和结果包括以下两个方面:（1）TRPV1参与食管上皮细胞中胃食管反流病理过程的机制研究。体外实验中,利用酸性培养基刺激HET-1A细胞模拟胃食管反流过程的酸性微环境,检测细胞中的TRPV1表达变化,转录和蛋白水平均检测到酸性刺激引起的TRPV1表达增加。通过钙成像实验考察酸性刺激前后细胞中的钙内流变化,并且利用siRNA沉默HET-1A细胞中的TRPV1表达以探究TRPV1的作用;结果证实TRPV1在细胞钙内流的过程中起到主导作用,钙内流强度会被酸性刺激所增强,从而引起细胞钙信号紊乱,炎症因子的增加。通过滴灌法建立小鼠胃食管反流病模型,再分离小鼠食管进行生化和病理分析,发现酸性刺激后,小鼠食管黏膜上皮中TRPV1表达增加,出现炎症反应以及上皮增生和角化多度的病症。（2）靶向性食药同源分子的效果验证,即薄荷醇对胃食管反流病的治疗效果分析。体外实验中对于酸性刺激处理过的细胞给予薄荷醇治疗,分析细胞中TRPV1的表达变化、钙内流变化以及炎症因子变化;结果证实薄荷醇能够明显减轻酸性刺激引起的TRPV1表达增加、钙信号紊乱和炎症反应过程。胃食管反流病模型的小鼠给予薄荷醇治疗后,再通过免疫组织化学分析及H＆E染色分析食管上皮中的TRPV1表达变化及病理变化;结果发现TRPV1的表达水平明显降低,对于酸性刺激导致的体重和进食量减少有一定缓解效果,酸刺激引发的生理不适症状也明显改善,炎症反应得到显著缓解。综上,食管上皮细胞中的TRPV1是胃食管反流过程中重要的响应元件,其通过影响细胞的钙信号通路介导炎症反应;薄荷醇能够靶向TRPV1,对胃食管酸反流引起的炎症具有抑制作用,结果证实薄荷醇具有治疗胃食管胃酸反流引起的相关疾病的潜在价值。

关键词：胃食管反流病薄荷醇 TRPV1

薄荷醇通过P糖蛋白对丹参素肠吸收影响的研究

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薄荷醇通过P糖蛋白对丹参素肠吸收影响的研究

作者：恽昊广东药科大学

学位级别：硕士

目的:拟用薄荷醇作为中药促进剂的代表,分别从细胞和整体水平探讨薄荷醇对丹参素肠吸收的影响,并通过Caco-2单层细胞模型研究薄荷醇影响丹参素肠吸收与P糖蛋白(P-gp)之间的关系,探究薄荷醇促进药物肠吸收的初步机制。方法:1.外翻肠囊模... 详细信息

目的:拟用薄荷醇作为中药促进剂的代表,分别从细胞和整体水平探讨薄荷醇对丹参素肠吸收的影响,并通过Caco-2单层细胞模型研究薄荷醇影响丹参素肠吸收与P糖蛋白(P-gp)之间的关系,探究薄荷醇促进药物肠吸收的初步机制。方法:1.外翻肠囊模型的肠吸收实验体外培养建立大鼠外翻肠囊模型,实验大鼠分组:空白组,维拉帕米阳性对照组,20、40、80μg/m L丹参素组;选择最佳吸收给药浓度分别加入体积比:0.1%、0.3%、0.9%薄荷醇组。采用高效液相色谱仪测定不同浓度丹参素的肠吸收情况,并测定了在薄荷醇干预情况下丹参素肠吸收的程度变化。2.Caco-2单层细胞模型的建立取处于对数生长期的Caco-2细胞,采用Transwell嵌套板,将吹打后混匀的细胞悬液铺于上层膜上培养,隔天更换培养液。观察细胞形态,并利用电阻测定仪检测细胞间跨膜电阻作为单层细胞模型建立成功的依据。3.MTT药物浓度毒性实验采用MTT法,用CCK-8试剂盒对Caco-2细胞模型进行药物毒性实验,使用酶标仪测定OD值,计算细胞存活率并确定药物给药浓度。4.Caco-2单层模型的细胞转运实验体外培养建立Caco-2单层细胞模型,实验细胞分组:空白组,维拉帕米阳性对照组,10、20、40、60μM丹参素组;选择吸收较好的两组加入:2、8、16μM(低、中、高)薄荷醇组。采用高效液相色谱仪测定不同浓度丹参素转运后的药物浓度,并测定在薄荷醇影响下丹参素转运浓度的变化。5.细胞底物积累和外排实验体外培养建立Caco-2单层细胞模型,实验细胞分为:空白组,维拉帕米阳性对照组,40μM丹参素组,2、8、16μM(低剂量组、中剂量组和高剂量组)薄荷醇组以及丹参素-薄荷醇混合溶液组和丹参素-维拉帕米混合溶液组。采用多功能酶标仪测定了荧光强度和总蛋白含量,结果用荧光强度/mgpro表示,可以间接反映Rh123在Caco-2细胞里的含量。结果:1.翻肠囊模型肠吸收试验外翻肠囊模型肠吸收实验结果显示,丹参素在40μg/m L的给药浓度下累积吸收量最好,为最佳浓度。在加入0.1%薄荷醇之后,吸收速率和累积吸收量明显上升;在加入0.9%薄荷醇之后,吸收速率反而下降,累积吸收量无明显变化。2.Caco-2细胞模型的验证Caco-2细胞在培养过程中融合度变高,电阻值也逐渐升高,直至21天左右形成致密的单层细胞膜,测定细胞间跨膜电阻值大于400Ω/cm2。3.丹参素、薄荷醇和维拉帕米给药浓度的确定细胞药物毒性实验显示,丹参素在给药浓度不高于50μM时,Caco-2细胞存活率>90%;薄荷醇在给药浓度不高于16μM时,Caco-2细胞存活率>90%,维拉帕米在给药浓度不高于30μM时,Caco-2细胞存活率>90%,以此作为丹参素、薄荷醇和维拉帕米的敏感给药浓度。丹参素和薄荷醇混合溶液在丹参素给药浓度低于50μM、薄荷醇给药浓度低于16μM时,Caco-2细胞存活率>90%;丹参素和维拉帕米混合溶液在丹参素给药浓度低于40μM、维拉帕米给药浓度低于30μM时,Caco-2细胞存活率>90%。4.Caco-2单层细胞模型转运实验细胞转运实验结果显示,丹参素在35μM、40μM给药浓度下渗透系数好,吸收程度较好。薄荷醇在给药浓度为2μM时,丹参素的渗透系数明显提升,转运率明显升高;在给药浓度为16μM时,丹参素的渗透系数没有明显变化,转运率有下降趋势;丹参素的转运速率随着维拉帕米给药浓度的升高而上升,成浓度依赖性。5.薄荷醇对丹参素肠吸收的影响和P-gp的关系细胞累积实验结果显示,Caco-2细胞中Rh123的累积量不随着薄荷醇给药浓度而改变,在低浓度时明显高于空白组(只有丹参素)(P0.05);细胞外排实验结果显示,薄荷醇组Caco-2细胞中Rh123的外排量在低浓度时明显增加(P0.05)。结论:1.低浓度的薄荷醇可以促进丹参素的肠吸收,而高浓度的薄荷醇可能对丹参素肠吸收有抑制作用;2.低浓度的薄荷醇可以增强Caco-2细胞对P-gp底物的积累,减少外排;高浓度的薄荷醇则对Caco-2细胞对P-gp底物的积累和外排无明显影响;3.薄荷醇影响丹参素的肠吸收机制与P-gp表达有着密切关联,低浓度的薄荷醇有可能抑制Caco-2细胞内P-gp表达从而促进丹参素的吸收;而高浓度的薄荷醇有可能促进或者诱导Caco-2细胞P-gp表达,从而可能抑制丹参素的吸收。

关键词：丹参素薄荷醇 P糖蛋白 Caco-2 肠吸收