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蓖麻毒蛋白A链基因克隆与重复表达载体构建

中国油料作物学报 2009年第2期31卷 167-172页

作者：黄凤兰李国瑞萨日娜陈永胜阎秀峰东北林业大学生命科学学院哈尔滨黑龙江150000 内蒙古民族大学生命科学学院内蒙古通辽028000 内蒙古民族大学农学院内蒙古通辽028000

利用降落PCR的方法,从蓖麻基因组DNA中克隆毒蛋白A链基因的560bp片段;利用一步法将该基因的2个正义片段和2个反义片段分别与pB I-121质粒连接,构建含该基因的正义重复和反义重复表达载体,为利用共抑制技术抑制蓖麻毒蛋白A链基因表达的... 详细信息

利用降落PCR的方法,从蓖麻基因组DNA中克隆毒蛋白A链基因的560bp片段;利用一步法将该基因的2个正义片段和2个反义片段分别与pB I-121质粒连接,构建含该基因的正义重复和反义重复表达载体,为利用共抑制技术抑制蓖麻毒蛋白A链基因表达的研究奠定基础。

关键词：蓖麻毒蛋白重复表达载体降落PCR 一步法共抑制

蓖麻毒蛋白A链与Ia抗原单抗偶联物对肿瘤细胞的作用

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中国免疫学杂志 1989年第4期5卷 210-212页

作者：吴敏王庆诚张振范唐思伦臧人杰泸州医学院微生物教研室中国科学院上海生物化学研究所上海市免疫学研究所基础免疫室

用ε—氨己酰半乳糖胺—琼脂糖和去唾液酰胎儿球蛋白—Sepharose 4B柱层析纯化蓖麻毒蛋白A链,以DE—52离子交换层析法纯化得Ia抗原MAb—HB_(55)5。将二者通过二硫键交联成免疫毒素RTA—HB_(55)。在体外条件下,RTA—HB_(55)对Raji细胞杀... 详细信息

用ε—氨己酰半乳糖胺—琼脂糖和去唾液酰胎儿球蛋白—Sepharose 4B柱层析纯化蓖麻毒蛋白A链,以DE—52离子交换层析法纯化得Ia抗原MAb—HB_(55)5。将二者通过二硫键交联成免疫毒素RTA—HB_(55)。在体外条件下,RTA—HB_(55)对Raji细胞杀伤的IC_(50)为3×10^(-10)M,游离RTA的IC_(50)为10^(-8)M,RTA—HB_(55)对K_(562)细胞的IC_(50)0则为2×10^(-8)M。表明RTA—HB_(55)能选择性地杀伤靶细胞而不杀伤非靶细胞,可望在B淋巴细胞白血病和淋巴瘤的治疗中获得应用。

关键词：蓖麻毒蛋白单克隆抗体免疫毒素

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蓖麻毒蛋白的研究与应用进展

化学世界 2005年第5期46卷 309-312,272页

作者：陈志慧仲恺农业技术学院化学与化工系广东广州510225

对蓖麻毒蛋白的结构、毒性作用机理、纯化方法及其在肿瘤导向治疗和生物杀虫方面的研究进展进行了简述,并提出了问题和展望。

关键词：蓖麻毒蛋白结构纯化导向进展

导入蓖麻毒蛋白的供体淋巴细胞在小鼠皮肤移植中产生的特异免疫耐受

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北京大学学报（自然科学版） 1997年第2期33卷 230-239页

作者：王重庆关迎辉李启靖北京大学生命科学学院

以小鼠为研究对象进行皮肤移植，受体为ＢＡＬＢ／Ｃ鼠，供体为Ｃ５７ＢＬ／６鼠。用氯化钙介导蓖麻毒蛋白（ｒｉｃｉｎ）进入供体鼠的脾细胞制成毒细胞，适时地注入受体体内。带有蓖麻毒蛋白的供体脾细胞，一方面可提供特异移植抗原（... 详细信息

以小鼠为研究对象进行皮肤移植，受体为ＢＡＬＢ／Ｃ鼠，供体为Ｃ５７ＢＬ／６鼠。用氯化钙介导蓖麻毒蛋白（ｒｉｃｉｎ）进入供体鼠的脾细胞制成毒细胞，适时地注入受体体内。带有蓖麻毒蛋白的供体脾细胞，一方面可提供特异移植抗原（主要组织相容性抗原）使特异的Ｔ，Ｂ淋巴细胞识别；另一方面，它被识别裂解后，释放蓖麻毒蛋白，又可杀伤与其识别的Ｔ，Ｂ淋巴细胞，使受体对供体移植物产生耐受。实验共设两组，在皮肤移植前后分别用包埋蓖麻毒蛋白的供体脾细胞处理，两组移植皮片存活时间均比相应对照组有显著延长（ｔ＞ｔ０．０１）。混合淋巴细胞培养实验和淋巴细胞转化实验证明了实验组对供体细胞的免疫应答及免疫细胞的分化能力均受到抑制。对这一新设想进行了初步的研究。

关键词：免疫耐受皮肤移植蓖麻毒蛋白供体淋巴细胞

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蓖麻毒蛋白的研究进展

中国油脂 2013年第6期38卷 24-27页

作者：李楠黎继烈朱晓媛中南林业科技大学生命科学与技术学院长沙410004

蓖麻毒蛋白是从蓖麻籽中提取的一种强毒性毒素,其在医药、农业及军事领域有着重要作用,已成为当前抗癌药物研究的热点。主要对蓖麻毒蛋白的理化性质、致毒机理、提取纯化工艺及其在医药、生物农药领域的应用进行了综述,对蓖麻毒蛋白提... 详细信息

蓖麻毒蛋白是从蓖麻籽中提取的一种强毒性毒素,其在医药、农业及军事领域有着重要作用,已成为当前抗癌药物研究的热点。主要对蓖麻毒蛋白的理化性质、致毒机理、提取纯化工艺及其在医药、生物农药领域的应用进行了综述,对蓖麻毒蛋白提取过程及其应用中存在的问题进行了讨论。由于蓖麻籽本身毒蛋白含量不高,油脂含量较高,对其进行毒蛋白的提取最终收率不高,影响蓖麻毒蛋白在医药、农业领域的推广应用。可利用生物工程技术对其基因进行改造,定向选育毒蛋白含量较高的蓖麻品种,促进蓖麻毒蛋白在生物农药和医药方面的应用。

关键词：蓖麻籽蓖麻毒蛋白生物农药免疫毒素检测

包有蓖麻毒蛋白的脂质体的制备、性质及毒性研究

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生物化学与生物物理学报 1999年第4期31卷 474-476页

作者：张今秦德安陈百先鲁小青李昊李琳杨慧萍华东师范大学生物系!上海200062 甘泉医院!上海200070

以半乳糖神经酰胺（ｇａｌａｃｔｏｓｙｌｃｅｒａｍｉｄｅ，ＧＣ）为材料，采用冷冻干燥脱水再水化法（ＤＲＶ法）制成包裹有蓖麻毒蛋白的半乳糖神经酰胺脂质体（ｒｉｃｉｎＧＣＬｓ），并对其性质及体外细胞毒性和动物毒性做了... 详细信息

以半乳糖神经酰胺（ｇａｌａｃｔｏｓｙｌｃｅｒａｍｉｄｅ，ＧＣ）为材料，采用冷冻干燥脱水再水化法（ＤＲＶ法）制成包裹有蓖麻毒蛋白的半乳糖神经酰胺脂质体（ｒｉｃｉｎＧＣＬｓ），并对其性质及体外细胞毒性和动物毒性做了研究。实验结果表明，ｒｉｃｉｎＧＣＬｓ的最大包封率可达７４．１％，粒度分布主要在０．５～０．８ μｍ之间，符合静脉注射液的标准。脂质体冻干粉在４ ℃储存近半年，粒度分布几乎没有变化。体外细胞毒性实验结果表明，ｒｉｃｉｎＧＣＬｓ和游离蓖麻毒蛋白对人肝癌细胞７７２１均有杀伤作用。ＲｉｃｉｎＧＣＬｓ的杀伤力比游离蓖麻毒蛋白更强；它们的细胞存活半数抑制浓度（ＩＣ５０）之比为１∶３．８９。小鼠毒性试验中，游离蓖麻毒蛋白的半数致死量（ＬＤ５０）为（３０．６ ±８．４９） μｇ／ｋｇ，而ｒｉｃｉｎＧＣＬｓ的ＬＤ５０为（４１．８ ±９．３３） μｇ／ｋｇ，高于游离蓖麻毒蛋白３６．２９％。蓖麻毒蛋白经ＧＣＬｓ包裹后，提高了对人肝癌细胞７７２１的杀伤力，同时降低了对小鼠的整体毒性

关键词：蓖麻毒蛋白半乳糖神经酰胺脂质体细胞毒性

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蓖麻毒蛋白在细胞内的转运过程研究进展

山东农业大学学报（自然科学版） 2018年第6期49卷 916-920页

作者：徐雅楠孙立杰于丽丽黄凤兰内蒙古民族大学生命科学学院内蒙古通辽028000 内蒙古自治区高校蓖麻产业工程技术研究中心内蒙古通辽028000

蓖麻毒蛋白(Ricin)是一种核糖体失活蛋白,对真核细胞有毒性。它移除真核细胞核糖体大亚基28SrRNA保守序列中特异的腺嘌呤残基,使蛋白合成过程终止,导致细胞死亡。本文对蓖麻毒蛋白在植物细胞内合成后转运出细胞的过程,以及蓖麻毒蛋白作... 详细信息

蓖麻毒蛋白(Ricin)是一种核糖体失活蛋白,对真核细胞有毒性。它移除真核细胞核糖体大亚基28SrRNA保守序列中特异的腺嘌呤残基,使蛋白合成过程终止,导致细胞死亡。本文对蓖麻毒蛋白在植物细胞内合成后转运出细胞的过程,以及蓖麻毒蛋白作用于哺乳动物细胞时转运过程的研究进展予以简要描述。

关键词：蓖麻毒蛋白转运过程蓖麻细胞哺乳动物细胞

蓖麻毒蛋白在蓖麻组培苗不同部位叶片中含量的测定

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江苏农业科学 2014年第2期42卷 43-46页

作者：罗蕊赵志强黄凤兰陈永胜雷雪尚雨丝王超邱靖王婕郭书龙内蒙古民族大学农学院内蒙古通辽028000 内蒙古民族大学生命科学学院内蒙古通辽028000 内蒙古自治区高校蓖麻产业工程技术研究中心内蒙古通辽028000

本研究优化了从蓖麻叶片中提取蛋白的过程,利用硫酸盐沉淀法、BCA试剂盒、UVwin5紫外软件V5.1.0、BandScan蛋白定量分析软件相结合的方法对蓖麻组培苗不同部位叶片中的毒蛋白的含量进行测定,结果表明,蓖麻叶片中毒蛋白的含量与叶位呈正比。

关键词：蓖麻蓖麻毒蛋白含量叶位硫酸盐沉淀法

蓖麻毒蛋白诱导HuTu-80细胞凋亡的比较蛋白质组学研究

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蓖麻毒蛋白诱导HuTu-80细胞凋亡的比较蛋白质组学研究

作者：栾世慧内蒙古民族大学

学位级别：硕士

蓖麻毒素是蓖麻籽中存在的一种能使核糖体失活的高效蛋白质,并由A、B链构成,A链是具有N-糖苷酶活性的活性链,导致蛋白质的合成受到抑制,引发细胞死亡;B链具有凝集素活性,能够识别和结合细胞表面含有半乳糖结构的受体,协助A链进入细胞。... 详细信息

蓖麻毒素是蓖麻籽中存在的一种能使核糖体失活的高效蛋白质,并由A、B链构成,A链是具有N-糖苷酶活性的活性链,导致蛋白质的合成受到抑制,引发细胞死亡;B链具有凝集素活性,能够识别和结合细胞表面含有半乳糖结构的受体,协助A链进入细胞。当一个蓖麻毒素分子进入到细胞内时,就可以使整个细胞的蛋白质合成停止最终导致细胞死亡。本研究通过比较蛋白质组学的研究手段,用蓖麻毒蛋白诱导人十二指肠腺癌细胞（HuTu-80）,分析全蛋白差异表达的情况,为蓖麻毒蛋白在HuTu-80细胞中的作用机理提供新的试验窗口。 1.本研究首先采用硫酸铵盐析法,从蓖麻种籽中提粗素,通过Sepharose4B柱亲和层析和Sephacryl S-200柱凝胶过滤层析对其进行纯化,经p-巯基乙醇处理,可见A链分子量为28KDa, B链的分子量为32KDa的蓖麻毒素。SDS-PAGE鉴定纯化后的蓖麻毒素达到了电泳纯。测定其浓度后,用获得的蓖麻毒蛋白对HuTu-80细胞进行ICso试验。结果表明：细胞形态发生变化,而IC50为200ng/ml。 2.构建蓖麻毒蛋白诱导HuTu-80细胞的凋亡模型,通过MTT排除试验、AO/EB染色、Annexin V-FITC/PI双染检测细胞凋亡,确定蓖麻毒蛋白诱导HuTu-80细胞早期凋亡时相,提取细胞组分蛋白进行Western-blot分析,观察HuTu-80细胞在凋亡过程中细胞色素c的迁移情况。结果表明：蓖麻毒蛋白对HuTu-80细胞的增殖和生长有明显的抑制作用,IC50为200ng/ml,最佳攻毒时间为8h,同时HuTu-80细胞的形态特征与生物化学特征也发生了一系列的变化,细胞核出现皱缩和破裂的情况,释放出致密颗粒状凋亡小体,细胞膜上的磷脂酰丝氨酸出现外翻,而细胞色素c随着蓖麻毒蛋白处理时间的增加,从线粒体易位到细胞浆逐渐显著。 3.用蓖麻毒蛋白浓度为200ng/ml,时间为8h处理细胞,分别提取正常组和处理组的HuTu-80细胞全蛋白,iTRAQ同位素标记技术与质谱检测技术得到1660个蛋白信息,其中采用假设检验的方法对蛋白质定量结果进行差异分析,选取p-value＜0.05的蛋白质作为差异蛋白质,共的到94个差异蛋白质,这为以后研究蓖麻毒蛋白诱导HuTu-80细胞凋亡机制提供了参考依据。

关键词：蓖麻毒蛋白比较蛋白质组学细胞凋亡 HuTu-80细胞