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作者：何翠颖河北医科大学

学位级别：硕士

T细胞淋巴瘤是一种来源于T细胞的恶性增殖性疾病。2008年WHO淋巴瘤新分类标准中T细胞部分包括T-淋巴母细胞白血病/淋巴瘤和成熟T/NK细胞淋巴瘤两大类,后者又包括结外NK/T细胞淋巴瘤,外周T细胞淋巴瘤,成人T细胞白血病/淋巴瘤等多个类型。... 详细信息

T细胞淋巴瘤是一种来源于T细胞的恶性增殖性疾病。2008年WHO淋巴瘤新分类标准中T细胞部分包括T-淋巴母细胞白血病/淋巴瘤和成熟T/NK细胞淋巴瘤两大类,后者又包括结外NK/T细胞淋巴瘤,外周T细胞淋巴瘤,成人T细胞白血病/淋巴瘤等多个类型。T细胞淋巴瘤在全球都有发病,且发病率呈现明显的地区差异,中国、日本、韩国等亚洲国家和北美地区发病率明显高于其他地区。T细胞淋巴瘤发病机制目前尚不清楚,异质性强,不同亚型临床表现各异,分型和诊断一直存在争议。相比B细胞淋巴瘤,T细胞淋巴瘤恶性程度更高,进展迅速,预后差,目前尚无针对本病统一的最佳治疗方案,亟待新药的开发。葫芦素(cucurbitacin)是从葫芦科和十字花科中提取的四环三萜类化合物,具有退热、阵痛、抗炎、抗菌、抗肿瘤等作用。根据化学结构不同,葫芦素家族被分为葫芦素A到T共17个亚型。葫芦素B、d、E、I因抗瘤作用显著被广泛研究。其中葫芦素d与葫芦素I化学结构相似,仅有两处不同:一处不同是葫芦素d结构中C1与C2之间为单键,葫芦素I相应位置为双键;另一处不同为空间构型差异。具有抗癌活性的葫芦素可以引起细胞周期阻滞,生长抑制和凋亡,分子机制涉及多种信号通路。葫芦素抗肿瘤作用机制与其化学结构密切相关。所在课题组一直致力于葫芦素d抗肿瘤机制的研究,发现葫芦素d可通过抑制NF-κB活化,降低抗凋亡蛋白Bcl-xl和Bcl-2表达,诱导白血病细胞凋亡。本课题通过对比研究葫芦素d(cucurbitacin d,Cu d)和葫芦素I(cucurbitacin I,Cu I)对T细胞淋巴瘤细胞的作用,分析其化学结构与抗癌机制的关系,为相关药物开发及T细胞淋巴瘤治疗提供参考。主要研究内容如下:第一部分比较葫芦素d与葫芦素I对小鼠T细胞淋巴瘤EL4细胞增殖的影响及其作用机制目的:比较葫芦素d和葫芦素I对小鼠T细胞淋巴瘤EL4细胞的作用,分析其化学结构与抗癌机制的关系,为相关药物开发及T细胞淋巴瘤治疗提供参考。方法:1小鼠T细胞淋巴瘤EL4细胞在dMEM培养基中常规培养,每24～48小时传代,实验均使用对数期细胞。2 Cell Titer-Glo®荧光细胞活性检测法检测并比较葫芦素d与葫芦素I对小鼠T细胞淋巴瘤EL4细胞增殖的影响:分别用葫芦素d和葫芦素I刺激细胞,观察药物刺激组细胞对细胞形态的影响,Cell Titer-Glo®荧光细胞活性法检测细胞活性。3 Western Blot法检测并比较葫芦素d与葫芦素I对小鼠T细胞淋巴瘤EL4细胞凋亡的影响:葫芦素d与葫芦素刺激EL4细胞,提取细胞总蛋白,Western Blot法检测并比较对照组及葫芦素d、葫芦素I刺激后EL4细胞内凋亡相关蛋白PARP与Caspase-3活化及表达情况。4 Western Blot法检测并比较葫芦素d与葫芦素I在小鼠T细胞淋巴瘤EL4细胞中对NF-κB p65活化的影响:葫芦素d与葫芦素刺激EL4细胞,提取细胞总蛋白,Western Blot法检测并比较对照组及葫芦素d、葫芦素I刺激后EL4细胞内NF-κB p65活化及表达情况。结果:1 Cell Titer-Glo®荧光细胞活性检测法结果显示葫芦素d与葫芦素I对小鼠T细胞淋巴瘤EL4细胞增殖均有抑制作用,作用具有时间-剂量依赖性,且葫芦素I对EL4细胞增殖的抑制作用强于葫芦素d(P葫芦素d与葫芦素I可使小鼠T细胞淋巴瘤EL4细胞内凋亡相关蛋白Cleaved-PARP,Cleaved-caspase-3表达增加,且葫芦素I作用强于葫芦素d(P葫芦素d与葫芦素I可以抑制NF-κB p65活化,且葫芦素I作用强于葫芦素d(P葫芦素d与葫芦素I可抑制小鼠T细胞淋巴瘤EL4细胞NF-κB p65磷酸化激活,活化caspase-3和PARP诱导细胞凋亡,抑制细胞增殖。2葫芦素I对EL4细胞抑制作用强于葫芦素d。第二部分比较葫芦素d与葫芦素I 对人T细胞淋巴瘤细胞株及T细胞淋巴瘤患者和健康志愿者外周血淋巴细胞的影响目的:比较葫芦素d和葫芦素I对人T细胞淋巴瘤Hu T78,Hu T102,MT-2,MT-4细胞,T细胞淋巴瘤患者及健康志愿者外周血淋巴细胞的作用,进一步评价葫芦素d和葫芦素I用于T细胞淋巴瘤治疗的价值。方法:1人T细胞淋巴瘤Hu T78,Hu T102,MT-2,MT-4细胞在dMEM培养基中常规培养,每24～48小时传代,实验均使用对数期细胞。2 Cell Titer-Glo®荧光细胞活性检测法检测并比较葫芦素d与葫芦素I对Hu T78,Hu T102,MT-2,MT-4细胞增殖的影响:分别用葫芦素d和葫芦素I刺激细胞,Cell Titer-Glo®荧光细胞活性法检测细胞活

关键词： T细胞淋巴瘤葫芦素d 葫芦素I 细胞凋亡 NF-κB

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王瓜葫芦素d的提取及其对大鼠乳腺癌细胞增殖、凋亡和体内成瘤作用的影响

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山东医药 2016年第31期56卷 20-23页

作者：史若诗姚万军郝新才夏中元柯昌斌刘菊英武汉大学人民医院武汉430000 湖北医药学院十堰市太和医院

目的从王瓜中提取葫芦素d,并观察其对大鼠乳腺癌细胞增殖、凋亡和体内成瘤作用的影响。方法采用硅胶柱层析、葡聚糖凝胶柱层析,结合硅胶柱色谱、高效液相色谱法(HPLC)对王瓜果实进行分离纯化,运用现代光谱技术(~1H-NMR)对提取化合物(葫... 详细信息

目的从王瓜中提取葫芦素d,并观察其对大鼠乳腺癌细胞增殖、凋亡和体内成瘤作用的影响。方法采用硅胶柱层析、葡聚糖凝胶柱层析,结合硅胶柱色谱、高效液相色谱法(HPLC)对王瓜果实进行分离纯化,运用现代光谱技术(~1H-NMR)对提取化合物(葫芦素d)的结构进行鉴定。培养大鼠乳腺癌细胞株Walker256,将细胞分为实验1、2、3组和对照组,分别加入2、4、8μmol/L的葫芦素d和等量培养液。采用Ed U法观察细胞增殖情况,TUNEL法观察凋亡情况。将80只雌性SPF大鼠随机分为Con组、Sham组、IP-L组和IP-H组,各20只。Sham组、IP-L组和IP-H组取Walker256细胞制作大鼠乳腺癌骨转移瘤模型,Con组不制作模型;IP-L组经腹腔注射0.75mg/(kg·d)的葫芦素d,IP-H组经腹腔注射1.5 mg/(kg·d)的葫芦素d,Sham组腹腔注射等量生理盐水,每天1次,连续21 d。观察各组大鼠左侧胫骨组织病理变化,测量胫骨肿瘤瘤体大小,观察毒性反应发生情况。结果从王瓜提取物中分离出1个化合物,鉴定为葫芦素d。对照组及实验1、2、3组细胞增殖抑制率分别为5.32%±4.54%、46.17%±4.87%、57.37%±5.15%、64.61%±5.33%,细胞凋亡率分别为6.24%±4.31%、35.43%±5.09%、44.79%±4.92%、73.19%±4.86%,组间两两相比,P均葫芦素d,其可抑制大鼠乳腺癌细胞株Walker256增殖,诱导其凋亡;葫芦素d对大鼠乳腺癌骨转移瘤有生长抑制作用,但可导致大鼠死亡率增加。

关键词：王瓜葫芦素d 四环三萜大鼠乳腺癌细胞株骨转移瘤动物实验

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甜瓜蒂中主要四环三萜结构鉴定及葫芦素B,葫芦素d含量测定

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中国实验方剂学杂志 2017年第8期23卷 77-81页

作者：马启武赵海誉北京市通州区食品药品安全监控中心北京101100 中国中医科学院中药研究所北京100700

目的:阐明甜瓜蒂中主要四环三萜类成分化学模式,建立HPLC测定甜瓜蒂药材中葫芦素B和葫芦素d含量的方法。方法:采用UPLC-ESI-Orbitrap-MS/MS技术分析甜瓜蒂中主要的四环三萜类成分,Eclipse XdB-C_(18)色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),以0.1... 详细信息

目的:阐明甜瓜蒂中主要四环三萜类成分化学模式,建立HPLC测定甜瓜蒂药材中葫芦素B和葫芦素d含量的方法。方法:采用UPLC-ESI-Orbitrap-MS/MS技术分析甜瓜蒂中主要的四环三萜类成分,Eclipse XdB-C_(18)色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),以0.1%甲酸-乙腈溶液为流动相梯度洗脱;采用RP-HPLC法测定7批甜瓜蒂药材中葫芦素B和葫芦素d含量,Inert Sustain C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以0.1%冰乙酸溶液(含庚烷磺酸钠1 g·L^(-1))-乙腈为流动相,检测波长228 nm。结果:在化学模式定性分析中,共发现并初步鉴定出甜瓜蒂中主要的8种四环三萜类成分,包括雪胆素甲,异雪胆素甲,葫芦素I,葫芦素d,葫芦素B及25-脱乙酰基葫芦素B的3个同分异构体;在定量分析中,葫芦素B,葫芦素d与有关物质分离度均符合要求,其质量浓度分别在49.5~297.0 mg·L^(-1)(r=0.999 99),10.3~61.8 mg·L^(-1)(r=0.999 9)与峰面积呈现良好的线性关系,平均回收率分别为99.18%,RSd 1.0%;99.13%,RSd 1.1%。结论:该研究基本阐明了甜瓜蒂中主要的四环三萜类成分,并建立了用于定量的HPLC方法,准确度高,重复性好,可用于甜瓜瓜蒂药材中葫芦素B,葫芦素d的含量测定。

关键词：甜瓜蒂超高液相色谱-电喷雾-四级杆-静电场轨道质谱联用技术高效液相色谱葫芦素B 葫芦素d

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天然产物葫芦素d抗胶质母细胞瘤及其作用机制研究

天然产物葫芦素D抗胶质母细胞瘤及其作用机制研究

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作者：王轩杭州师范大学

学位级别：硕士

胶质瘤是临床上最为常见的原发性脑肿瘤,患者的生存中期仅为12到14个月,5年生存率低于5%。胶质瘤中一小部分具有干性的胶质瘤干细胞是手术治疗后复发以及形成耐药的主要原因,至今依旧没有特效药物可以彻底治疗胶质瘤。在本研究中,我们... 详细信息

胶质瘤是临床上最为常见的原发性脑肿瘤,患者的生存中期仅为12到14个月,5年生存率低于5%。胶质瘤中一小部分具有干性的胶质瘤干细胞是手术治疗后复发以及形成耐药的主要原因,至今依旧没有特效药物可以彻底治疗胶质瘤。在本研究中,我们通过带有Nestin-GFP报告基因的胶质瘤细胞系高通量筛选天然产物化合物库从中发现了葫芦素d。葫芦素d可以剂量依赖性地抑制胶质瘤细胞(A172,U87-MG,U251)的活性和生长,其对应IC50值分别为700nM,150nM,200nM。进一步的研究表明葫芦素d通过抑制金属蛋白酶(MMP)降低了胶质瘤细胞的迁移和侵袭能力。经过流式细胞分析得知,葫芦素d处理的细胞被阻滞在G2/M期,细胞增殖相关蛋白Ki-67表达减少,dNA合成受到抑制,这些则是由葫芦素d诱导的P53表达增强和ERK磷酸化减少(失活)导致的。与此同时葫芦素d能破坏线粒体功能导致呼吸链受损、活性氧水平上升从而诱导胶质瘤细胞凋亡,表现为Annexin V阳性细胞的显著增加。在与胶质瘤治疗一线药物替莫唑胺联用时葫芦素d显示出较强的协同作用。进一步的分子机理研究显示:STAT3,AKT1磷酸化激活被抑制,因此导致下游干性相关基因Sox2,Oct3/4,htert以及胶质瘤干细胞标志物Cd133,Nestin,Olig2等的表达下调,而胶质细胞分化标志物Gfap,Mbp的表达上升。在肿瘤异种移植实验中,葫芦素d有效抑制了异种移植胶质瘤的生长,且表现为极低的生理毒性。综上所述,我们首次发现了葫芦素d作为潜在的抗胶质瘤药物或胶质瘤治疗辅助药物具有极大的临床应用价值,值得进一步深入研究。

关键词：胶质瘤葫芦素d 胶质瘤干细胞

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葫芦素d通过下调GATA6表达抑制SGC-7901胃癌细胞增殖迁移的作用机制研究

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河北医学 2020年第4期26卷 571-576页

作者：冯晓波李敏虹尚精娟周颖上海市第七人民医院胃肠疾病诊疗部上海200136

目的:探讨葫芦素d通过下调GATA转录因子6(GATA6)表达抑制SGC-7901胃癌细胞增殖、迁移的作用机制。方法:体外培养SGC-7901细胞,用MTT法检测葫芦素d对SGC-7901细胞抑制率并确定葫芦素d的干预剂量,将细胞分为对照组、顺铂组、葫芦素d低、... 详细信息

目的:探讨葫芦素d通过下调GATA转录因子6(GATA6)表达抑制SGC-7901胃癌细胞增殖、迁移的作用机制。方法:体外培养SGC-7901细胞,用MTT法检测葫芦素d对SGC-7901细胞抑制率并确定葫芦素d的干预剂量,将细胞分为对照组、顺铂组、葫芦素d低、中、高剂量组。对照组不进行处理,顺铂组给予终浓度为10.0μmoL/L的顺铂,葫芦素d低、中、高剂量组分别给予终浓度为2.0、4.0、8.0μmoL/L的葫芦素d,继续培养48h后进行检测SGC-7901细胞迁移能力、SGC-7901细胞中miRNA-143和GATA6 mRNA表达水平及细胞凋亡和细胞周期情况测定。结果:随着葫芦素d剂量增加,SGC-7901细胞抑制率增加(P葫芦素剂量为8.0μmoL/L时,抑制率为53.07%,故选8.0μmoL/L作为最高干预剂量,并设2.0μmoL/L和4.0μmoL/L两个剂量。与对照组比较,顺铂组SGC-7901细胞迁移能力、GATA6 mRNA相对表达量和G0/G1期细胞比例降低,miRNA-143 mRNA的相对表达量、细胞凋亡率和S期细胞比例增加(P葫芦素d处理后,SGC-7901细胞迁移能力、GATA6 mRNA相对表达量和G0/G1期细胞比例降低,miRNA-143 mRNA的相对表达量、细胞凋亡率和S期细胞比例增加,且呈剂量依赖性(P葫芦素d能抑制SGC-7901胃癌细胞增殖和迁移,具有一定的抗癌活性,其机制可能与葫芦素d通过下调GATA6表达有关。

关键词：葫芦素d GATA6 SGC-7901胃癌细胞细胞增殖细胞迁移

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葫芦素d对血管新生的抑制作用

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哈尔滨医科大学学报 2019年第1期53卷 1-6页

作者：朴贤美陈庆文张永春班涛张妍哈尔滨医科大学药学院药理学教研室黑龙江省生物医药工程重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地心血管药物研究教育部重点实验室黑龙江哈尔滨150081

目的研究葫芦素d抑制血管新生作用。方法①通过MTT法检测葫芦素d对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)和人肝癌细胞(HepG2)活力的影响;②通过流式细胞术检测葫芦素d对HUVEC细胞凋亡作用的影响;③通过划痕实验检测葫芦素d对HUVEC细胞迁移作用的影响... 详细信息

目的研究葫芦素d抑制血管新生作用。方法①通过MTT法检测葫芦素d对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)和人肝癌细胞(HepG2)活力的影响;②通过流式细胞术检测葫芦素d对HUVEC细胞凋亡作用的影响;③通过划痕实验检测葫芦素d对HUVEC细胞迁移作用的影响;④在基质胶上观察葫芦素d对HUVEC毛细管状结构形成的影响;⑤通过鸡胚绒毛尿囊膜模型观察葫芦素d在体内对新生血管的影响。结果①MTT实验结果显示葫芦素d呈剂量依赖性抑制HUVEC和HepG2细胞增殖,通过比较IC_(50)值,发现葫芦素d对于HUVEC的抑制增殖作用明显强于对HepG2细胞的抑制增殖作用;②流式细胞术实验结果显示葫芦素d诱导HUVEC细胞凋亡;③划痕实验结果表明葫芦素d显著抑制HUVEC细胞迁移;④体外血管新生实验结果表明葫芦素d抑制HUVEC在基质胶上形成毛细管状结构;⑤在鸡胚绒毛尿囊膜模型中,发现葫芦素d显著抑制鸡胚绒毛尿囊膜上血管的生成。结论体内、外实验证明葫芦素d具有抑制血管新生作用。

关键词：葫芦素d 人脐静脉内皮细胞血管新生

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葫芦素d抗肿瘤作用研究进展

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中国现代中药 2017年第9期19卷 1350-1354页

作者：崔译文全晶晶宋艳志邓意辉徐晖沈阳药科大学药学院辽宁沈阳110016 杭州泰格医药科技股份有限公司沈阳办事处辽宁沈阳110002

葫芦素d(Cucurbitacin d)是一种高度氧化的四环三萜类化合物,研究发现其对多种癌症均具有治疗作用,有望成为新型抗肿瘤药物。本文介绍其在抗肿瘤作用方面研究进展。

关键词：葫芦素d 抗肿瘤作用研究进展

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葫芦素d对血管新生及bFGF诱导PLCγ/Erk1/2通路激活影响

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辽宁中医药大学学报 2018年第12期20卷 47-50页

作者：李宁曹慧敏董文秀王海林才丽平辽宁中医药大学辽宁沈阳110847 沈阳市第四人民医院辽宁沈阳110031

目的:评价葫芦素d对血管内皮细胞增殖、迁移、成管作用的影响及其作用机制。方法:采用人脐静脉血管内皮细胞株(***926),通过CCK8细胞增殖检测、划痕实验、管腔形成实验检测葫芦素d对血管新生各环节的作用,并通过Western Blot法检测葫芦... 详细信息

目的:评价葫芦素d对血管内皮细胞增殖、迁移、成管作用的影响及其作用机制。方法:采用人脐静脉血管内皮细胞株(***926),通过CCK8细胞增殖检测、划痕实验、管腔形成实验检测葫芦素d对血管新生各环节的作用,并通过Western Blot法检测葫芦素d对bFGF介导的细胞信号通路激活的抑制作用。结果:葫芦素d对血管内皮细胞活性影响较低,同时能够明显抑制血管内皮细胞的迁移、成管能力;能够抑制bFGF刺激下FGFR2及其下游信号通路关键蛋白PLCγ、Erk1/2的磷酸化。结论:葫芦素d具有抑制血管新生的作用,其机制可能与抑制bFGF介导的信号通路激活有关。

关键词：葫芦素d 血管内皮细胞株碱性成纤维生长因子

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基于VEGFR2/Src/FAK通路探讨葫芦素d抗血管新生机制

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解剖科学进展 2019年第4期25卷 453-456页

作者：何子微曹慧敏董文秀才丽平李宁辽宁省金秋医院综合外科丘宁沈侖110011 辽宁中医药大学重大科研平台辽宁沈阳110847

目的探讨葫芦素d对VEGF诱导的血管新生的作用及其机制。方法鸡胚绒毛尿囊膜血管新生实验、大鼠胸主动脉血管内皮迁出与人血管内皮细胞划痕实验检测葫芦素d对VEGF诱导的血管新生和内皮细胞迁移的作用,Western blot技术检测葫芦素d对VEGF... 详细信息

目的探讨葫芦素d对VEGF诱导的血管新生的作用及其机制。方法鸡胚绒毛尿囊膜血管新生实验、大鼠胸主动脉血管内皮迁出与人血管内皮细胞划痕实验检测葫芦素d对VEGF诱导的血管新生和内皮细胞迁移的作用,Western blot技术检测葫芦素d对VEGF诱导的VEGFR2及其下游的Src、FAK磷酸化水平的影响。结果葫芦素d对VEGF诱导的鸡绒毛尿囊膜血管新生具有明显的抑制作用,并能抑制VEGF诱导的大鼠胸主动脉环模型和划痕实验中血管内皮迁移。葫芦素d能够抑制VEGF刺激的VEGFR2、Src、FAK磷酸化。结论葫芦素d具有抑制VEGF诱导的血管新生作用,其机制可能与抑制VEGFR2及其下游的细胞信号通路蛋白活化有关。

关键词：葫芦素d 血管内皮生长因子血管新生大鼠

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瓜蒌、瓜蒌皮、瓜蒌子的体内代谢产物鉴定比较分析

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中草药 2024年第20期55卷 6845-6861页

作者：张潇予夏凯柔宋雪瑜刘培刘玉萍刘谊民陈彦张黄琴南京中医药大学中药制药过程控制与智能制造技术全国重点实验室江苏省中医药研究院中药组分与微生态研究中心南京中医药大学江苏省中药资源产业化过程协同创新中心

目的研究瓜蒌Trichosanthis Frucutus、瓜蒌皮Trichosanthis Pericarpium、瓜蒌子Trichosanthis Semen提取液在大鼠体内的代谢特征异同。方法采用超高效液相色谱-线性离子肼-静电轨道肼串联质谱(UHPL C-LTQ-Orbitrap-MS)采集瓜蒌、瓜... 详细信息

目的研究瓜蒌Trichosanthis Frucutus、瓜蒌皮Trichosanthis Pericarpium、瓜蒌子Trichosanthis Semen提取液在大鼠体内的代谢特征异同。方法采用超高效液相色谱-线性离子肼-静电轨道肼串联质谱(UHPL C-LTQ-Orbitrap-MS)采集瓜蒌、瓜蒌皮及瓜蒌子提取液及大鼠ig各提取液后的血浆、胆汁、尿液、粪便的多级质谱信息,利用质量亏损过滤技术进行代谢产物鉴定及代谢途径分析。结果在ig瓜蒌、瓜蒌皮和瓜蒌子提取液的大鼠体内分别鉴定到37、38、31种原型成分,其中,ig不同提取液的大鼠体内均鉴定到槲皮素、木犀草素、柚皮素、葫芦素d、腺苷、苯丙氨酸等,而芦丁、山柰酚、葫芦素B等仅在ig瓜蒌、瓜蒌皮提取液的大鼠体内被鉴定到。对共同鉴定到的芹菜素、橘红素、异槲皮苷、槲皮素和葫芦素d进行进一步的代谢产物鉴定,涉及的相关代谢产物有36种,主要代谢途径包括甲基化、羟基化、葡萄糖醛酸化、硫酸化等。值得注意的是,虽然代谢产物的数量和种类几近相同,但在生物样品中的分布却有差异。结论系统地鉴定了瓜蒌、瓜蒌皮、瓜蒌子的成分及在大鼠体内的原型成分,并对芹菜素、橘红素、异槲皮苷、槲皮素和葫芦素d体内的代谢产物及代谢过程进行分析,阐明了三者的多元成分差异及其体内代谢特征,为进一步探讨其药动学行为及药效物质基础差异提供了参考,为瓜蒌资源的充分利用与临床合理用药提供了思路。

关键词：瓜蒌瓜蒌皮瓜蒌子 UHPLC-LTQ-Orbitrap-MS 代谢产物芹菜素橘红素异槲皮苷槲皮素葫芦素d

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