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木聚糖酶—葡萄糖醛酸酶的优产及应用

木聚糖酶—葡萄糖醛酸酶的优产及应用

作者：沈艺红南京师范大学

学位级别：硕士

极端嗜热厌氧菌海栖热袍菌Thermotogamaritima MSB8所产木聚糖酶（XynB）和α-葡萄糖醛酸酶（AguA）具有耐热性（XynB和AguA蛋白分子量分别为43kDa、72kDa）,能高效降解半纤维素资源,在生物转化、食品工业和饲料生产等领域具有潜在应用... 详细信息

极端嗜热厌氧菌海栖热袍菌Thermotogamaritima MSB8所产木聚糖酶（XynB）和α-葡萄糖醛酸酶（AguA）具有耐热性（XynB和AguA蛋白分子量分别为43kDa、72kDa）,能高效降解半纤维素资源,在生物转化、食品工业和饲料生产等领域具有潜在应用前景。将XynB和AguA基因同向串连共表达构建出既产木聚糖酶又产α-葡萄糖醛酸酶的基因工程菌,既可提高生产效率又节约生产成本。本研究构建了单启动子共表达XynB和AguA工程菌E.coli JM109（DE3）/pET-20b-XRA和双启动子共表达XynB和AguA工程菌E.coli JM109（DE3）/pET-20b-XPA 和 Ecoli JM109（DE3）/pET-28a-XPA,并对其产酶效果的影响因素进行了优化,结果表明:（1）重组菌E.coliJM109（DE3）/pET-20b-XRA在IPTG浓度0.1mM、诱导时间10h时产酶水平最高,XynB表达量为4.28U/mL,AguA 表达量为 0.025U/mL;（2）重组菌E.coliJM109（DE3）/pET-20b-XPA 在乳糖浓度10mM、诱导时间8h、诱导温度42℃时产酶水平最高,XynB表达量为4.09U/mL,AguA 表达量为 0.06U/mL;（3）重组菌E.coli JM109（DE3）/pET-28a-XPA在LB培养基中,OD600达0.7左右加入0.8mM IPTG,XynB和AguA表达量分别达到7.6U/mL和0.5U/mL,相同条件下,XynB和AguA的表达量比E.coli JM109（DE3）/pET-20b-XPA分别提高3.5和7.3倍;在TB培养基中,经响应面优化得到最佳诱导条件为:IPTG浓度为0.55mM,诱导时机OD600为1.93,诱导时间为8.92h时,XynB表达量为12.21U/mL,AguA表达量为1.76U/mL,较优化前分别提高了 0.6和2.5倍。木聚糖酶-葡萄糖醛酸酶水解木聚糖的最佳条件研究表明:双酶XynB（10U/g）和AguA（1U/g）在80℃下比单酶XynB（10U/g）能够彻底快速地水解桦木木聚糖产生木寡糖,酶解产物中木二糖含量及纯度更高;进一步采用响应面优化酶解条件获得,木聚糖酶-葡萄糖醛酸酶在4.2%桦木木聚糖的底物浓度下,水解温度80.66℃,pH7.65,XynB酶量为60U/g,AguA酶量为9U/g,还原糖释放量可达到17.91mg/mL,还原糖释放量及电镜扫描分析可以看出木聚糖酶-葡萄糖醛酸酶对农副产品玉米芯具有良好的降解效果,这些结果显示产木聚糖酶-葡萄糖醛酸酶的工程菌在生物转化、食品工业和饲料生产等领域具有潜在应用前景。

关键词：低聚木糖木聚糖酶葡萄糖醛酸酶优产酶解

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β-葡萄糖醛酸酶在胆囊结石形成中的意义

β-葡萄糖醛酸酶在胆囊结石形成中的意义

作者：张磊安徽医科大学

学位级别：硕士

目的胆汁中有两种不同来源的β-葡萄糖醛酸酶(β-G)：内源性β-G和外源性β-G。两者均可以水解胆汁中的结合胆红素(BDG)为游离胆红素(UCB)，后者是胆石的主要成分之一。目前普遍认为β-G在胆管胆色素结石的形成中有重要作用。本研究... 详细信息

目的胆汁中有两种不同来源的β-葡萄糖醛酸酶(β-G)：内源性β-G和外源性β-G。两者均可以水解胆汁中的结合胆红素(BDG)为游离胆红素(UCB)，后者是胆石的主要成分之一。目前普遍认为β-G在胆管胆色素结石的形成中有重要作用。本研究通过对不同组别胆囊胆汁中的β-G活性、总胆红素浓度(TB)、UCB浓度等指标进行分析，探讨β-G是否影响胆囊胆固醇结石的形成，并分析内、外源性β-G在结石形成中的关系。方法收集2003年10月-12月在安徽医科大学第一附属医院行胆囊切除术患者的胆囊及其胆汁，根据病理报告分为胆囊息肉组(PO)和胆囊结石组;后者再根据病理及临床分为慢性炎症合并结石组(CⅠ)和急性炎症合并结石组(AⅠ)。PO组：共11例，其中男5例，女6例;年龄范围30-71岁。CⅠ组：共11例，其中男5例，女6例;年龄范围28-72岁。AⅠ组：共6例，其中男3例，女3例;年龄范围32-68岁。全部患者排除恶性肿瘤及各型肝炎。CⅠ组的病理切片表现为炎症细胞以淋巴、单核细胞为主;AⅠ组则主要以中性粒细胞为主，且在临床上有急性胆囊炎症状、体征，术中也证实胆囊急性炎症明显。收集的胆汁标本检测TB、UCB以及内、外源性β-G活性;收集的胆囊结石进行化学分类;术中取胆囊底部组织一块，行HE染色，并确定胆囊病理类型;计算内、外源性β-G活性总值以及UCB／TB，其结果作为统计指标进行分析;收集患者的年龄、性别以及肝肾功能资料，与上述指标进行相关分析。结果PO、CⅠ和AⅠ三组之间的β-G活性总值、内源性β-G活性、外源性β-G活性、TB浓度以及UCB／TB有差异(P＜0.05)，三组之间UCB浓度的差异没有显著性意义(P＞0.05)。CⅠ组与PO组相比，胆汁中内、外源性β-G活性、β-G活性总值以及UCB／TB显著增高(P＜0.05)，TB浓度显著降低(P＜0.05);两组之间UCB浓度的差异没有显著性意义;AⅠ组与CⅠ组相比，胆汁中内、外源性β-G活性、β-G活性总值显著增高(P＜0.05);TB浓度显著降低(P＜0.05);两组之间UCB浓度以及UCB／TB的差异没有显著性意义;由于存在感染，内、外源性安徽医科大学硕士学位论文卜G的活性均显著增高(尸酶(ALT)与p一G活性总值以及内、外源性p一G活性均呈正相关。结论在胆囊结石患者的胆汁中，存在病理性增多的p一G。因为存在感染，内、外源性 p一G的活性均显著升高并呈正相关;p一G的水解作用致使胆汁中TB浓度下降;UCB浓度也呈下降趋势。患者的ALT与p一G活性相关，此结果是肝脏在炎症情况下的生理性反应。总之，p一G加速BDG水解并生成大量UCB，后者通过相关机制促进胆石形成。p一G对于胆囊胆固醇结石的形成有重要意义。

关键词：葡萄糖醛酸酶胆红素胆结石胆囊

基于甲基葡萄糖醛酸钠诱导下大肠杆菌的光度法快速检测研究

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分析化学 2006年第6期34卷 829-831页

作者：唐辉张文耿萍金利通楼旻吴自荣华东师范大学化学系华东师范大学生命科学学院

建立了一种快速检测大肠杆菌的光度分析法。在脱氧胆酸钠(DOC)培养基中,大肠杆菌被甲基葡萄糖醛酸钠(m ethyl-β-D-glucuron ide sod ium,M etG lu)诱导,在细菌体内产生特异性葡萄糖醛酸酶(-βD-glucu-ron idase)。通过膜渗透剂Polymyxi... 详细信息

建立了一种快速检测大肠杆菌的光度分析法。在脱氧胆酸钠(DOC)培养基中,大肠杆菌被甲基葡萄糖醛酸钠(m ethyl-β-D-glucuron ide sod ium,M etG lu)诱导,在细菌体内产生特异性葡萄糖醛酸酶(-βD-glucu-ron idase)。通过膜渗透剂Polymyxin B nonapeptide hydrochloride(PBN)和Lysozym e对大肠杆菌细胞膜的作用,葡萄糖醛酸酶从大肠杆菌细胞中释放出来。葡萄糖醛酸酶能够催化分解底物p-N itrophenyl--βD-glucu-ron ide(PNPG)而产生对硝基酚,而对硝基酚的量与溶液中大肠杆菌的浓度成正比。对硝基酚对波长为400nm的可见光有最大吸收。根据吸光度值的大小与对硝基酚的浓度成很好的线性关系,通过测定400 nm处对硝基酚的吸光度值,实现了对大肠杆菌的快速定量检测。

关键词：大肠杆菌光度法快速检测葡萄糖醛酸酶对硝基酚

急性坏死性胰腺炎猴β葡萄糖醛酸酶活性的变化及生长抑素对其的作用

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中华普通外科杂志 2001年第11期16卷 660-661页

作者：杨志英唐伟松赵平杨植翁杏仕中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院基本外科 100730 承德医学院附属医院普外科北京市第六医院普外科

目的　观察猴急性坏死性胰腺炎 (ANP)病程中血及腹腔液 β葡萄糖醛酸酶 ( β G)的变化以及生长抑素对其的作用。方法　实验用猴 12只 ,胰管逆行注入胆汁和 5 %胰蛋白酶混合液制成ANP模型。治疗组 6只 ,于模型制成后 1h开始以 10 μg·k... 详细信息

目的　观察猴急性坏死性胰腺炎 (ANP)病程中血及腹腔液 β葡萄糖醛酸酶 ( β G)的变化以及生长抑素对其的作用。方法　实验用猴 12只 ,胰管逆行注入胆汁和 5 %胰蛋白酶混合液制成ANP模型。治疗组 6只 ,于模型制成后 1h开始以 10 μg·kg-1·h-1的速度给予生长抑素 ,取血或腹腔液 ,测定 β G活性。结果　 ( 1)对照组死亡率为 10 0 % ( 6/ 6) ,平均生存时间 ( 3 1± 9)h ;治疗组死亡率为 5 0 % ( 3 / 6) ,平均生存时间为 ( 5 3± 2 4 )h ,P 酶体破坏、保护细胞的机制对ANP起治疗作用。

关键词：生长抑素葡萄糖醛酸酶急性胰腺炎坏死性胰腺炎

胰腺导管上皮细胞与胰腺癌细胞内β-葡萄糖醛酸酶免疫电镜定位研究

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中国医科大学学报 1998年第5期27卷 451-453页

作者：张弘温海彦杨波于安民康麟于光宇沈阳军区总医院沈阳市大东区卫生局盘锦市二院

目的：观测β－葡萄糖醛酸酶（β－Ｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄａｓｅ，β－Ｇ）在人体胰腺导管上皮细胞与胰腺癌细胞中的定位，探索良、恶两种细胞内β－Ｇ的差异。方法：采用低温包埋，紫外线照射，超薄切片，胶体金标记，免疫电镜方法。结... 详细信息

目的：观测β－葡萄糖醛酸酶（β－Ｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄａｓｅ，β－Ｇ）在人体胰腺导管上皮细胞与胰腺癌细胞中的定位，探索良、恶两种细胞内β－Ｇ的差异。方法：采用低温包埋，紫外线照射，超薄切片，胶体金标记，免疫电镜方法。结果：β－Ｇ定位于内质网和溶酶体内，同时观察到胰腺癌细胞中标记β－Ｇ的金颗粒数目明显多于胰腺导管上皮细胞中金颗粒数目。结论：癌细胞分泌β－Ｇ增多，对胰腺癌的早期发现、早期诊断有一定意义。

关键词：胰腺肿瘤胰腺导管上皮细胞葡萄糖醛酸酶

正常肝细胞与肝癌细胞内β-葡萄糖醛酸酶免疫电镜定位

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中国医科大学学报 1997年第6期26卷 562-564页

作者：张弘杨波孙爱静宋敏宋今丹沈阳军区总医院普外一科

采用低温包埋、胶体金标记、免疫电镜技术，进行了正常肝细胞和肝癌细胞内β－葡萄糖醛酸酶（β－Ｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄａｓｅ，β－Ｇ）的定位研究。结果表明，β－Ｇ存在于内质网，溶酶体和高尔基复合体内，同时观察到肝癌细胞中标记... 详细信息

采用低温包埋、胶体金标记、免疫电镜技术，进行了正常肝细胞和肝癌细胞内β－葡萄糖醛酸酶（β－Ｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄａｓｅ，β－Ｇ）的定位研究。结果表明，β－Ｇ存在于内质网，溶酶体和高尔基复合体内，同时观察到肝癌细胞中标记β－Ｇ的金颗粒数目多于正常肝细胞中的数目。对肝细胞癌的早期发现，早期诊断可能具有意义。

关键词：肝细胞肝癌细胞葡萄糖醛酸酶免疫电镜

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β-葡萄糖醛酸酶在胆囊结石形成中的意义

中国医师杂志 2005年第12期7卷 1720-1721页

作者：张磊孟翔凌陶应田韩文秀夏泉黄赵刚安徽省合肥市第一人民医院外三科安徽合肥230061 安徽医科大学第一附属医院普外科安徽医科大学第一附属医院药剂科

本文探讨了β-葡萄糖醛酸酶(β-G)是否影响胆囊结石的形成以及内、外源性β-G在胆囊结石形成中的关系。结果,AI组与C I组相比,内、外源性β-G的活性显著增高(P<0.05),TB浓度和UCB浓度显著降低(P<0.05);内、外源性β-G的活性呈正相关。... 详细信息

本文探讨了β-葡萄糖醛酸酶(β-G)是否影响胆囊结石的形成以及内、外源性β-G在胆囊结石形成中的关系。结果,AI组与C I组相比,内、外源性β-G的活性显著增高(P<0.05),TB浓度和UCB浓度显著降低(P<0.05);内、外源性β-G的活性呈正相关。β-G影响胆囊结石的形成。

关键词：葡萄糖醛酸酶胆红素胆囊结石胆固醇粘蛋白

肝细胞癌癌组织内β-葡萄糖醛酸酶表达及意义

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肿瘤防治研究 1999年第5期26卷 357-358页

作者：朱善德杨波李荫山冯新莉杜晓炬李顺明张宏袁旭东沈阳军区总医院肝胆外科 110015 中国医科大学病理教研室沈阳空军司令部门诊部

目的　探讨肝细胞癌癌组织中β－葡萄糖醛酸酶（β－Ｇ）分布规律。方法　应用免疫组化和免疫电镜技术对β－Ｇ进行定位定量研究。结果　癌组织中β－Ｇ的表达在细胞及亚细胞超微水平是一致的，均明显高于正常组织，其表达强... 详细信息

目的　探讨肝细胞癌癌组织中β－葡萄糖醛酸酶（β－Ｇ）分布规律。方法　应用免疫组化和免疫电镜技术对β－Ｇ进行定位定量研究。结果　癌组织中β－Ｇ的表达在细胞及亚细胞超微水平是一致的，均明显高于正常组织，其表达强度也随恶性程度增加而升高，有显著差异（Ｐ＜０－０１）。结论　β－Ｇ升高是与癌细胞物质代谢增加相适应的。β－Ｇ作为体内一种酶标志，对肝癌的诊断及恶性程度判定有指导意义。

关键词：葡萄糖醛酸酶肝细胞癌免疫组织化学

β-葡萄糖醛酸酶前药对β-G基因转染人胆管癌细胞的作用

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世界华人消化杂志 2001年第10期9卷 1201-1205页

作者：戴辉窦科峰李开宗高志清仇凯陈勇管文贤岳树强侯小娟孙凯陈志南陈苏民中国人民解放军第四军医大学中国人民解放军第四军医大学生化教研室陕西省西安市710033

0 引言胆管细胞癌目前是一种不可治愈性的恶性肿瘤,早期诊断率低,治疗手段主要包括手术、化疗、放疗,但疗效均不够理想.许多患者的死亡原因并不是肿瘤复发转移,而是胆道梗阻,因此提高局部肿瘤治疗的效率,保证胆道通畅是目前提高胆管癌... 详细信息

0 引言胆管细胞癌目前是一种不可治愈性的恶性肿瘤,早期诊断率低,治疗手段主要包括手术、化疗、放疗,但疗效均不够理想.许多患者的死亡原因并不是肿瘤复发转移,而是胆道梗阻,因此提高局部肿瘤治疗的效率,保证胆道通畅是目前提高胆管癌生存率的有效方法[1-2].自杀基因疗法是有效治疗肿瘤且有临床应用潜能的治疗策略之一.本研究利用重组逆转录病毒载体,通过脂质体介导将βG基因转染人胆管癌细胞株QBC939,用其不同浓度的前体药-葡萄糖醛酸化表阿霉素[Epi-bus]处理,探索β-G基因/β-G前体药系统对人胆管癌细胞的杀伤作用及旁观者效应,从而建立一种新的自杀基因系统.

关键词：葡萄糖醛酸酶药物前体阿霉素药理学胆管癌/病理学肿瘤细胞